免疫沉淀類實(shí)驗(yàn)-實(shí)驗(yàn)一水質(zhì)的微生物檢測(cè)ppt課件

1、免疫沉淀類實(shí)驗(yàn)?zāi)先A大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)與放射衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心.教學(xué)對(duì)象：高等醫(yī)學(xué)院校衛(wèi)生檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)生實(shí)驗(yàn)課時(shí)：6學(xué)時(shí)課程類型：專業(yè)實(shí)驗(yàn)課課程要求：必修每組人數(shù)：2人.實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求掌握單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)、雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳的原理、結(jié)果分析及運(yùn)用； 熟習(xí)火箭免疫電泳、免疫電泳的原理及運(yùn)用。 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)對(duì)流免疫電泳示教：火箭免疫電泳免疫電泳.一、單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)原理： 將適量的抗體均勻混入瓊脂內(nèi)制成瓊脂板，打孔，在孔中參與一定量的待測(cè)抗原，抗原向周圍呈輻射狀分散，與抗體相遇，在比例適宜時(shí)構(gòu)成白色沉淀環(huán)沉淀環(huán)直徑的大小與抗原含量成正比，可從用不同濃度規(guī)范抗原制

2、成的規(guī)范曲線上，查出待檢樣品中抗原的含量。 一、單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn).試劑與器材商品IgG、IgM、IgA單向瓊脂分散板；37恒溫箱、濕盒、可調(diào)微量加樣器等；待檢血清。方法分別取商品IgG、IgM、IgA單向瓊脂分散板1塊，按闡明書操作。用微量加樣器分別準(zhǔn)確汲取不同稀釋度待測(cè)血清10mL加于孔內(nèi)。將瓊脂板放入濕盒中，置于37恒溫箱分散24小時(shí)。一、單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn).本卷須知：加樣量一定要準(zhǔn)確，并且不同逸出孔外，否那么結(jié)果不好察看；實(shí)踐檢測(cè)過程中，規(guī)范曲線必需與樣品測(cè)定同時(shí)制備。一、單向瓊脂分散實(shí)驗(yàn) 結(jié)果察看分別量取各孔樣品沉淀環(huán)的直徑，從相應(yīng)闡明書提供的參考規(guī)范曲線，計(jì)算待檢血清中各種免疫球蛋白的

3、含量。.二、雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn). 實(shí)驗(yàn)原理：在含有電解質(zhì)的瓊脂中，抗原抗體分子相互彌漫分散，當(dāng)比例適宜時(shí)可出現(xiàn)肉眼可見的白色沉淀線。沉淀線的外形、位置，與抗原的濃度、分散速度相關(guān)。 二、雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn).試劑與器材含15g/L生理鹽水的瓊脂糖待檢血清、抗人血清載玻片、濕盒、吸管、打孔器、37恒溫箱、可調(diào)微量加樣器等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理鹽水的瓊脂糖，于一干凈的載 玻片；打孔：待瓊脂板凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，每孔之間的間隔約4 5mm，根據(jù)需求，可打成呈梅花狀、三角狀的孔；加樣：用可調(diào)微量加樣器根據(jù)需求在不同孔內(nèi)參與待檢血清和抗人血清10mL；分散：將瓊脂糖

4、凝膠板放濕盒中，置37溫箱中24h后，取出察看結(jié)果。二、雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn).本卷須知：加樣量一定要準(zhǔn)確，并且不同逸出孔外，否那么結(jié)果不好察看；制板時(shí)，玻片要清潔，邊緣要整齊，加瓊脂糖時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡；打孔時(shí)留意防止產(chǎn)生裂痕或?qū)傊c玻片脫離。二、雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)結(jié)果察看：沉淀線的位置、數(shù)目與外形等。圖4 抗原特異性與沉淀線外形的關(guān)系a、b：抗體 A、A、B：抗原A、B完全不同 A、A部分一樣.三、對(duì)流免疫電泳建立在雙向瓊脂分散實(shí)驗(yàn)的根底上，經(jīng)過電流，使蛋白質(zhì)抗原、抗體在電場(chǎng)中作定向加速度雙分散，從而加速沉淀的構(gòu)成。 . 實(shí)驗(yàn)原理：在一定的離子強(qiáng)度、pH8.4以上的緩沖液中，大多數(shù)抗原解離帶負(fù)電，

5、在電場(chǎng)中向陽極挪動(dòng)，而抗體大部分是IgG，其等電點(diǎn)與環(huán)境中的pH接近，很少解離。另外，由于分子量大，加上電滲作用緩慢向陰極挪動(dòng)，在短時(shí)間內(nèi)，在兩孔之間或抗體另一側(cè)構(gòu)成沉淀線。 三、對(duì)流免疫電泳.試劑與器材1.5%巴比妥緩沖液瓊脂糖 待檢血清、抗人血清 0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液 載玻片、吸管、打孔器、可調(diào)微量加樣器、電泳儀、電泳槽等方法制板：用510mL吸管汲取溶化的含15g/L生理鹽水的瓊脂糖，于一干凈 的載玻片；打孔：待瓊脂板凝固后，用直徑3mm的打孔器打孔，每孔之間的間隔約 45mm，根據(jù)需求，可打成呈梅花狀、三角狀的孔；加樣：在孔中相向參與10mL抗原和抗體 ；電泳：將

6、抗原置于陰極側(cè)，抗體置于陰極側(cè)， 以4V/cm電壓電泳30min1h。 三、對(duì)流免疫電泳.結(jié)果察看：封鎖電源，翻開電泳槽，察看沉淀線的位置、數(shù)目與外形等。本卷須知：加樣量一定要準(zhǔn)確，并且不同逸出孔外，否那么結(jié)果不好察看；制板時(shí)，玻片要清潔，邊緣要整齊，加瓊脂糖時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡；孔距約0.5cm左右，太遠(yuǎn)看不到實(shí)驗(yàn)景象。三、對(duì)流免疫電泳.示 教火箭免疫電泳 將適量的抗體均勻混入瓊脂內(nèi)制成瓊脂板，冷凝后，在瓊脂板的一端打一排小孔，分別參與一定量的待測(cè)樣品進(jìn)展電泳。抗原在電泳過程中，與抗體相遇，在比例適宜時(shí)可構(gòu)成錐形沉淀峰，其外形如火箭，故名火箭電泳。火箭峰的高度與抗原含量成正比，以峰高為縱坐標(biāo)，知的抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制規(guī)范曲線圖，就可知待檢樣品中抗原的含量。.示 教免疫電泳： 免疫電泳技術(shù)是利用蛋白質(zhì)分子量以及其所帶電荷的不同，在電場(chǎng)作用下，