肉毒抗毒素效價(jià)測(cè)定法小白鼠試驗(yàn)法

1、肉毒抗毒素效價(jià)測(cè)定法小白鼠試驗(yàn)法1試劑1.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素由中國(guó)藥品生物制品檢定所按期分發(fā)，所標(biāo)單位應(yīng)與國(guó)際單位等值。標(biāo)準(zhǔn)抗毒素應(yīng)保存于28。1.2毒素由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)。亦可自備，但其制法（包括菌種、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及干燥方法等）應(yīng)與檢定所分發(fā)者相同。試驗(yàn)用的毒素須以中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)抗毒素準(zhǔn)確標(biāo)定其試驗(yàn)量（見(jiàn)一覽表），并每3個(gè)月復(fù)檢1次。使用干燥毒素時(shí)，須以精確的分析天平稱取，每次稱量不得少于10mg，溶解后應(yīng)一次用完。余存之干燥毒素應(yīng)封存于裝有干燥劑之真空器皿中。亦可用干燥毒素制成液體甘油毒素，即干燥毒素生理鹽水溶解液與中性甘油（經(jīng)11610分鐘高壓蒸汽滅菌者）等量混

2、合，每ml至少含20個(gè)試驗(yàn)量。毒素應(yīng)保存于28暗處。1.3稀釋液1.2%明膠磷酸鹽緩沖鹽水，滅菌后pH值應(yīng)為6.26.8，配方為：磷酸二氫鉀0.7g磷酸氫二鈉（12結(jié)晶水）2.4g氯化鈉6.8g加蒸餾水至1000ml，加明膠2.0g，溶解后過(guò)濾。2用具吸管、容量瓶、注射器應(yīng)經(jīng)標(biāo)化（用雙蒸餾水稱量法或其他準(zhǔn)確方法）。吸管、試管、容量瓶應(yīng)潔凈干燥，注射器及針頭應(yīng)煮沸消毒。3試驗(yàn)動(dòng)物用體重1416g健康小白鼠。4試驗(yàn)方法4.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素之稀釋用稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)抗毒素，使每ml所含IU如一覽表所示。原液的一次吸取量不應(yīng)少于0.5ml。4.2毒素之稀釋用稀釋液稀釋毒素，使每ml含5個(gè)毒素試驗(yàn)量，如一覽表所

3、示。4.3待檢抗毒素之稀釋用稀釋液將待檢抗毒素稀釋成數(shù)個(gè)稀釋度，使每ml約含一覽表所示單位或其上下。稀釋度之間隔約為5%10%。4.4混合4.4.1標(biāo)準(zhǔn)抗毒素對(duì)照組吸取已稀釋之標(biāo)準(zhǔn)抗毒素0.9、1.0、1.1ml分別裝入小試管中，再依次分別補(bǔ)加稀釋液0.6、0.5、0.4ml（可在抗毒素之前加入）。4.4.2待檢抗毒素試驗(yàn)組吸取不同稀釋度之待檢抗毒素各1.0ml分別裝入小試管中，每管補(bǔ)加稀釋液0.5ml（可在抗毒素之前加入）。以上各管分別加入稀釋毒素1.0ml，混合均勻，加塞，37結(jié)合45分鐘，立即注射?；旌蠒r(shí)，吸取標(biāo)準(zhǔn)抗毒素、待檢抗毒素及毒素的吸管不得混用（若不得不用同1支吸管吸取待檢抗毒素

4、，則應(yīng)由高稀釋度向低稀釋度依次吸取。每更換1稀釋度之前須將吸管內(nèi)的剩余液吹凈，將吸管外部所沾殘液拭凈，吸取下1稀釋度液到前次吸取的最高處，廢棄之，再于該管內(nèi)連續(xù)吸吹3次。但1支吸管只得用于1份樣品）。4.5注射按一覽表所示劑量與途徑，每1稀釋度液注射小白鼠4只。4.6觀察每天上、下午各觀察試驗(yàn)動(dòng)物1次，并記錄發(fā)病及死亡情況，連續(xù)4天。4.7結(jié)果判定4.7.1以對(duì)照組動(dòng)物50%死亡終點(diǎn)比較待檢抗毒素試驗(yàn)組動(dòng)物的50%保護(hù)終點(diǎn)推算待檢抗毒素的效價(jià)。4.7.2有下列情況之一者予以重試：（1）對(duì)照組動(dòng)物無(wú)死亡或死亡，或死亡極不規(guī)律而無(wú)法計(jì)算50%死亡終點(diǎn)。（2）待檢組動(dòng)物無(wú)死亡或全死亡，或死亡極不規(guī)律而無(wú)法計(jì)算50%保護(hù)終點(diǎn)。（3）在一稀釋度的動(dòng)物中有2只以上屬非特異死亡。肉毒抗毒素效價(jià)測(cè)定法一覽表抗毒素型別毒素試驗(yàn)量稀釋混合注射抗毒素(IU/ml)毒素(試驗(yàn)量/ml)抗毒素(ml)毒素(ml)稀釋液(ml)劑量(ml)抗毒素(IU)毒素(試驗(yàn)量)動(dòng)物只數(shù)途徑AL+/51.051.01.00.