微生物實(shí)驗(yàn)考試復(fù)習(xí)題

1、微生物實(shí)驗(yàn)考試復(fù)習(xí)題 1、使用油鏡觀察細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)為何要加香柏油？添加香柏油可增加亮度：空氣的折射率為1.0，玻璃的折射率為1.5，香柏油的為1.52，玻璃和香柏油的折射率相差很小，當(dāng)在高倍鏡下觀察時(shí)加香柏油有聚光作用，從而可增加視野亮度。添加香柏油可增大數(shù)值孔徑：數(shù)值孔徑NA=nsin（/2），香柏油的折射率大于空氣，因此相比于不加香柏油時(shí)n值增大，從而數(shù)值孔徑NA增大，便于觀察到清晰的菌體結(jié)構(gòu)。2、簡(jiǎn)單染色法有什么用途？簡(jiǎn)單染色法是只使用一種染料使菌體一次性著色的方法，可用來(lái)觀察細(xì)菌的形狀、大小、細(xì)胞的排列狀態(tài)。3、在你所作的革蘭氏染色制片中，大腸桿菌和枯草芽孢桿菌各染成何色？它們是革蘭

2、氏陰性菌還是革蘭氏陽(yáng)性菌？繪出它們的形態(tài)圖。（圖見(jiàn)報(bào)告冊(cè)P2）大腸桿菌染成紅色革蘭氏陰性菌枯草芽孢桿菌染成紫色革蘭氏陽(yáng)性菌4、作為革蘭氏染色涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵是什么？不能過(guò)后的原因有兩點(diǎn)：脫色時(shí)間很短，若圖片很厚則脫色不充分。過(guò)于濃厚不利于觀察。酒精脫色是染色成敗的關(guān)鍵，若脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可以被脫色而染成革蘭氏陰性菌，若脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽(yáng)性菌。5、培養(yǎng)基的概念，培養(yǎng)基的類型，3種主要培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是用人工的方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按微生物生長(zhǎng)代謝的需要配制成的一種營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的類型:按照配制培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)源可將培養(yǎng)基分為天然培

3、養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可將培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。按培養(yǎng)基的功能和用途可將培養(yǎng)基分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。3種主要培養(yǎng)基的用途： = 1 * GB3 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)細(xì)菌以及測(cè)定其數(shù)目 = 2 * GB3 高十一號(hào)合成培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)放線菌 = 3 * GB3 馬丁孟加拉紅培養(yǎng)基：用于分離、培養(yǎng)真菌6、培養(yǎng)基配制好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的？培養(yǎng)基配置好后之所以要立即滅菌是因?yàn)槠渑渲七^(guò)程均沒(méi)有在無(wú)菌條件下進(jìn)行操作，因而培養(yǎng)基和盛放培養(yǎng)基的器皿（試管、三角瓶等）均有大

4、量細(xì)菌。這些細(xì)菌在豐富的培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件下會(huì)大量繁殖，消耗掉培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。若長(zhǎng)時(shí)間不滅菌，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分將在2h內(nèi)消耗殆盡，后面即使將其滅菌也不能再用于培養(yǎng)微生物。滅菌后的培養(yǎng)基可采用兩種方法進(jìn)行無(wú)菌操作：在28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h；在37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后觀察培養(yǎng)基表面是否有菌落形成，若無(wú)則無(wú)污染，若有則培養(yǎng)基已污染，不能用于培養(yǎng)微生物。7、為什么高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌所需的時(shí)間短，溫度低？高壓蒸汽滅菌對(duì)細(xì)胞成分的破壞作用更強(qiáng)，水分子的存在有助于破壞維持蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的氫鍵和其他相互作用弱鍵，更易使蛋白質(zhì)變性。高壓蒸汽滅菌存在潛熱，當(dāng)氣體轉(zhuǎn)變成液體時(shí)可放出大量熱量，故可迅

5、速殺滅細(xì)菌。高壓蒸汽比熱空氣穿透力更強(qiáng)，更能有效殺滅微生物。8、當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠。將未知菌株培養(yǎng)12-16h，時(shí)間不能太長(zhǎng)（太長(zhǎng)易長(zhǎng)芽孢）選用大腸桿菌和枯草芽孢桿菌作對(duì)照染色如果對(duì)照組中紫色和紅色同時(shí)出現(xiàn)，說(shuō)明染色技術(shù)操作正確9、繪出你所觀察到的霉菌、放線菌菌絲體和孢子形態(tài)圖。各形態(tài)圖的比較，請(qǐng)參照?qǐng)?bào)告冊(cè)P4.放線菌，油鏡觀察，放大倍數(shù)10100， 霉菌，放大倍數(shù)104010、將各種細(xì)菌對(duì)大分子物質(zhì)的水解結(jié)果填入下表。菌名淀粉水解試驗(yàn)明膠液化試驗(yàn)枯草芽孢桿菌陽(yáng)性（無(wú)色）陽(yáng)性大腸桿菌陰性（藍(lán)色）陰性普通變性桿菌陰性（藍(lán)色）陽(yáng)性記錄平板菌落

6、計(jì)數(shù)結(jié)果，并分析土壤微生物分布狀況（數(shù)量、顏色）采用稀釋平板計(jì)數(shù)法分離土壤中的微生物。實(shí)驗(yàn)方法：滅菌及實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備A、配置培養(yǎng)基：根據(jù)要實(shí)驗(yàn)預(yù)期要分離的微生物種類配置相應(yīng)的培養(yǎng)基，如分離放線菌的高氏一號(hào)瓊脂培養(yǎng)基、分離霉菌的馬丁氏培養(yǎng)基等。B、將配置好的培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)所需的器材在高溫高壓下滅菌（100mL三角瓶、平皿、100mL無(wú)菌水、1mL吸管、試管數(shù)支、刮鏟等）樣品稀釋液的制備準(zhǔn)確稱取待測(cè)樣品5g，放入裝有45mL無(wú)菌水并放有小玻璃珠的100mL三角瓶中，用手或搖床上振蕩20min，使微生物細(xì)胞分散，靜置2030s，即成10-1稀釋液；再用1mL無(wú)菌吸管，吸取10-1稀釋液1mL，已入裝有9mL

7、無(wú)菌水的試管中，吸吹3次，讓菌液混合均勻，即成10-2稀釋液；以此類推，連續(xù)稀釋，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等一系列稀釋菌液。平板接種培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)采用平板計(jì)數(shù)法的涂抹平板計(jì)數(shù)法，用無(wú)菌吸管吸取0.1mL不同稀釋濃度的菌液接種在對(duì)應(yīng)的瓊脂平板上（每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)重復(fù)），再用無(wú)菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，更換刮鏟時(shí)需在酒精燈上灼燒滅菌，低濃度向高濃度涂抹時(shí)，可以不更換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上2030min。培養(yǎng)：將上述接種過(guò)土壤懸液的平板倒置，于 2830培養(yǎng)45d。計(jì)數(shù)并計(jì)算：選取每皿菌落數(shù)為30300的平板進(jìn) 行計(jì)數(shù)，算出每個(gè)濃度的平均數(shù)帶入下面公式計(jì)算出微生物的數(shù)

8、量： M（億/克）=菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù)（濕樣重/干樣重）10-812、血球記數(shù)板的結(jié)構(gòu)特征。圖：9個(gè)大方格正中的大方格（計(jì)數(shù)區(qū)）球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上游4條槽所構(gòu)成的3個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)。一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格，即計(jì)數(shù)區(qū)由400個(gè)小方格組成。計(jì)數(shù)區(qū)邊長(zhǎng)為1mm，則計(jì)數(shù)區(qū)面積為1mm2；個(gè)小方格的邊長(zhǎng)為1/20mm，面積為1/400mm2。計(jì)數(shù)區(qū)高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)區(qū)體積為0.1mm3，小方格體積為1/4000mm3。血球計(jì)數(shù)板表示菌體大小時(shí)，用（寬長(zhǎng)）表示

9、，不能用乘積表示，且小的數(shù)字在后面菌個(gè)數(shù)（個(gè)/mL）=平均數(shù)稀釋倍數(shù)4000100013、試比較細(xì)菌與酵母菌、放線菌與霉菌的菌落形態(tài)差異。A細(xì)菌與酵母菌的比較顏色：細(xì)菌菌落顏色多樣而酵母菌顏色較單一；氣味：細(xì)菌為腐臭味，酵母則為酒香味；菌落大?。航湍妇漭^細(xì)菌大而豐厚；菌體形態(tài)：酵母細(xì)胞多呈圓形、橢圓形或臘腸形，較單一，有子囊的產(chǎn)生，少數(shù)種有不發(fā)達(dá)的假菌絲；而細(xì)菌除了球狀、桿狀、螺旋狀外，還有許多形態(tài)。B放線菌與霉菌的比較氣味：放線菌為泥腥味，霉菌為霉臭味；菌落：霉菌菌落較放線菌大，菌絲更長(zhǎng)且蓬松。菌體形態(tài)：放線菌的形態(tài)最簡(jiǎn)單的為桿狀或原始菌絲，大部分則由分枝發(fā)達(dá)的菌絲組成，菌絲無(wú)隔膜；霉菌體

10、則由長(zhǎng)管狀的菌絲構(gòu)成，有隔或無(wú)隔。14、血球記數(shù)板計(jì)數(shù)法與稀釋平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行區(qū)別。對(duì)同一種菌液，用這兩種方法測(cè)出的結(jié)果不一致，血球計(jì)數(shù)板法較多。這是因?yàn)橛醚蛴?jì)數(shù)板記錄的為活菌與死菌的總數(shù)目，而平板菌落計(jì)數(shù)法則只能記錄活菌的數(shù)目。15、繪出你所觀察到的細(xì)菌的菌體和莢膜的形態(tài)。(見(jiàn)圖P3) 鞭毛運(yùn)動(dòng)器官；莢膜糖被；芽孢（休眠體）繁殖器官。 重鉻酸鉀抑制細(xì)菌； 孟加拉紅抑制放線菌； 鏈霉素抑制細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用及簡(jiǎn)單染色1、使用油鏡觀察細(xì)菌染色標(biāo)本片時(shí)為何要加香柏油？ 答：增加亮度：香柏油的折光率與玻璃折光率相近似，因此在物鏡與標(biāo)本載片之間加香柏油可以使光線不致因從一個(gè)介質(zhì)進(jìn)入另一個(gè)折光率

11、不同的介質(zhì)即空氣，而引起部分散射，造成光亮度不夠而觀察不清。增加數(shù)值孔徑：可見(jiàn)光的波長(zhǎng)平均為0.55m，當(dāng)使用數(shù)值孔徑為0.65的高倍鏡時(shí)，它能分辨兩點(diǎn)之間的距離為0.42m；而使用數(shù)值孔徑為1.25的油鏡時(shí)，分辨率可達(dá)0.22m。N.A=nsin/2 D=/(2sina/2)，由于入射角變小，數(shù)值孔徑即視野就變廣了。2、簡(jiǎn)單染色法有什么用途？ 概念：簡(jiǎn)答染色法是只用一種染料使細(xì)菌著色以顯示其形態(tài)的方法，一般難于辨別細(xì)菌細(xì)胞的構(gòu)造。 用途：可觀察細(xì)菌細(xì)胞的形態(tài)大小、排列、狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的革蘭氏染色法革蘭氏染色法 定義：革蘭氏染色是1884年由丹麥病理學(xué)家C. Gram所創(chuàng)，細(xì)菌先經(jīng)堿性染料

12、結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫去，再用番紅復(fù)染，因此可把細(xì)菌分為兩大類，呈紅色的為革蘭氏陰性菌（G-），呈藍(lán)色的為革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）。 步驟：涂片干燥固定結(jié)晶紫染色水洗碘液媒染水洗95%酒精脫色立即水洗番紅復(fù)染水洗干燥鏡檢2、作革蘭氏染色涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵是什么？ 因?yàn)槊撋珪r(shí)間一般只有17s左右，時(shí)間短，若染色濃厚會(huì)導(dǎo)致在規(guī)定時(shí)間內(nèi)無(wú)法較好的脫色，不利于脫色，會(huì)分不清紫色和紅色，不易觀察。 關(guān)鍵：酒精（75%）脫色，如果脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而染呈陰性菌；如果脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽(yáng)性菌。

13、3、芽孢是細(xì)菌的繁殖器官。4、大腸桿菌染色為紅色，是革蘭氏陰性菌；枯草芽孢桿菌染色為紫色，是革蘭氏陽(yáng)性菌5、當(dāng)你對(duì)一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，怎樣能確定你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠？ 答：先對(duì)未知菌培養(yǎng)12-16h，以大腸桿菌和枯草芽孢桿菌作對(duì)照，將二者混合涂片，未知菌另外涂片，當(dāng)對(duì)照組中紫色和紅色同時(shí)出現(xiàn)，在相同實(shí)驗(yàn)環(huán)境參數(shù)下觀察未知菌的顏色，這樣操作結(jié)果是可靠的。實(shí)驗(yàn)四 放線菌、霉菌形態(tài)的觀察放線菌應(yīng)在100倍鏡下觀察，繁殖器官為分生孢子呈桿狀，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。霉菌應(yīng)在40倍鏡下觀察，繁殖器官為孢囊孢子，呈球狀。實(shí)驗(yàn)五 微生物細(xì)胞大小測(cè)定和計(jì)數(shù)1、血球計(jì)數(shù)板有9個(gè)大方格，每個(gè)大方

14、格有25個(gè)中方格，每個(gè)中方格有16個(gè)小格（1/400mm2，50m，1/4000mm3）。接目鏡倍數(shù)目鏡測(cè)微尺格數(shù)血球計(jì)數(shù)板格數(shù)目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度/m低倍 105110高倍 402012.5油鏡 10050112、同一種菌液用血球計(jì)數(shù)板和平板計(jì)數(shù)同時(shí)計(jì)數(shù)，所測(cè)得的結(jié)果是否一樣？為什么？答：不一樣。因?yàn)槠桨逵?jì)數(shù)是活菌級(jí)計(jì)數(shù)，需要進(jìn)行無(wú)菌操作，而血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)是死、活菌共計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)量較多于平板菌落計(jì)數(shù)，并且也較準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)六 培養(yǎng)基的制備1、培養(yǎng)基概念：是用人工的方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)適合微生物生長(zhǎng)繁殖，并積累代謝產(chǎn)物營(yíng) 養(yǎng)基質(zhì)。 類型：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。（來(lái)源） 液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。（物理外觀狀態(tài)） 基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。（功能）2、選擇凝固劑的條件：不被微生物分解，性能穩(wěn)定，不易于與酸堿發(fā)生反應(yīng)，加熱不分解。加入重鉻酸鉀，定向分離放線菌；加鏈霉素和孟加拉紅抑制細(xì)菌和放線菌生長(zhǎng)，分離霉菌。滅菌 溫度：含乳糖時(shí)，113-115 20min；一般情