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文檔簡介
1、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基選修一 專題二:微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用 2.2&2.3學(xué)習(xí)目標(biāo)1.說出選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別;2.設(shè)計(jì)出尿素分解菌和和纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基;3.說出尿素分解菌和纖維素分解菌的應(yīng)用價(jià)值?!締⒚伤伎肌縋21 DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù),此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫(930C)的DNA聚合酶。 如果請你來尋找這種耐高溫的酶,你會(huì)去哪里尋找?依據(jù):在尋找目的菌種時(shí),要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。啟示:實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理 人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括 等),同時(shí) 或 其它微生物生長。營養(yǎng)、溫度、pH抑制阻
2、止選擇培養(yǎng)基:允許特定種類的微生物生長,同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基的制作(金牌學(xué)案P22)(1)利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物。如以石油是唯一碳源,篩選出能利用石油的微生物生長。(2)通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí),可篩選出固氮微生物。(3)通過某些特殊環(huán)境分離微生物。如在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物。(4)依據(jù)某些微生物對某種物質(zhì)的抗性,在培養(yǎng)基中加入此種物質(zhì),以抑制對該物質(zhì)不具抗性的微生物生長,而不影響對該物質(zhì)具有抗性的微生物生長。如培養(yǎng)基中加入青霉素,可篩選出酵母菌和霉菌。選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基加入某種化學(xué)物
3、質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,只生長具有特定目的的微生物。在培養(yǎng)基中加入某種指示劑,鑒別特定的微生物,可以存在其他微生物。含青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌含高濃度食鹽的培養(yǎng)基: 分離金黃色葡萄球菌無氮培養(yǎng)基: 分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物含四環(huán)素等抗生素的培養(yǎng)基: 分離導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞 尿素的利用:尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。 尿素分解菌分解尿素的原因:土壤中的細(xì)菌能合成脲酶分解尿素。 研究背景P21CO(NH2)2脲酶 + H2O+ CO22NH3篩選出尿素分解菌的應(yīng)用價(jià)值:1.研
4、究其生活習(xí)性,為提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)設(shè)條件;2.挑選與培養(yǎng)優(yōu)良菌種,服務(wù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn).【尿素分解菌的選擇培養(yǎng)】P22該培養(yǎng)基的配方中,為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)?碳源:葡萄糖氮源:尿素此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌?為什么?尿素是唯一氮源,原則上只有能夠產(chǎn)生脲酶、利用尿素的細(xì)菌才能生長。提示:在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中,細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。 1.氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,故可通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷?!灸蛩胤纸饩蔫b別】P262.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,觀察顏色的變化。鑒別培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入某種指示劑,以鑒別特定的微生物。 纖維素的分布
5、:纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì),大量分布在植物的根、莖、葉等中。其中,棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸。 纖維素的分解:某些微生物能夠產(chǎn)生纖維素酶(復(fù)合酶),分解利用纖維素。 研究背景P27篩選出纖維素分解菌的應(yīng)用價(jià)值:1.對該類微生物的研究和應(yīng)用,使人們能夠利用秸稈等廢棄物生產(chǎn)酒精;2.用纖維素酶處理服裝面料.纖維素纖維二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶【纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)】P291.纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于_(固體、液體)培養(yǎng)基,原因是_閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基”,回答以下問題:液體沒有添加瓊脂2.該培養(yǎng)基對微生物_(具有/不具有)選擇作用
6、。如果具有,其選擇機(jī)制是_ 具有 以纖維素為主要碳源,能分解纖維素的微生物可以大量繁殖培養(yǎng)基組成纖維素粉5gNaNO31gKCl Na2HPO47H2O KH2PO4 MgSO4 7H2O 0.5g 1.2g0.9g0.5g酵母膏0.5g水解酪素0.5g溶解后,蒸餾水定容至1000mL3.你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對照實(shí)驗(yàn),說明選擇培養(yǎng)基的作用?提示:自變量為培養(yǎng)基的種類??捎闷胀ㄅ囵B(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基或?qū)⒗w維素改為葡萄糖)和選擇培養(yǎng)基作對比。2.原理是:剛果紅可以與纖維素形成_,當(dāng)纖維素被_分解后,紅色復(fù)合物無法形成,出現(xiàn)以_為中心的_,我們可以通過_來篩選纖維素分解菌。提示:剛果紅(CR)是一種染
7、料,可與纖維素形成紅色復(fù)合物,但不與水解后的纖維素二糖和葡萄糖發(fā)生此反應(yīng)。 【纖維素分解菌的鑒別】P291.篩選纖維素分解菌的方法是_。該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法顏色紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素分解菌 透明圈是否產(chǎn)生透明圈培養(yǎng)基組成CMC-Na 5-10g酵母膏 1gKH2PO4 0.25g土豆汁 100mL瓊脂 15g上述物質(zhì)溶解后,加蒸餾水定容至1000mL(水溶性羧甲基纖維素鈉)【資料三】剛果紅染色法(P29)方法一:先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng);方法二:在倒平板時(shí)就加入剛果紅。討論:剛果紅(CR)呢?【資料三】剛果紅染色法(P29)方法一:先培養(yǎng)微生物,再加入剛果
8、紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二:在倒平板時(shí)就加入剛果紅兩種方法均可出現(xiàn)明顯的透明圈!染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一 方法二 顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣,剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便,不存在菌落混雜問題產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈;有些微生物能降解色素,亦形成明顯的透明圈有些細(xì)菌可分解原油,從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株,請回答下列問題。(1)在篩選過程中,應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。(3)為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大小,分解圈大說明該菌株降解原油的能力。
9、在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長,同時(shí)又能抑制或者阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基稱做()A.鑒別培養(yǎng)基 B.加富培養(yǎng)基C.選擇培養(yǎng)基 D.基礎(chǔ)培養(yǎng)基【基礎(chǔ)鞏固】C選擇原油強(qiáng)請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題。(2)下表是某公司研發(fā)的一種檢測大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基的配方。成分含量/g蛋白胨10.0乳糖5.0 蔗糖5.0 K2HPO42.0 顯色劑0.2 瓊脂12.0 將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1 000 mL(2)根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基中的碳源是。 鑒別蛋白胨、乳糖、蔗糖剛果紅染色時(shí),加入剛果紅可在()制備培養(yǎng)基時(shí)梯度稀釋時(shí)倒平板時(shí)涂布時(shí)長出菌落
10、時(shí)A.B. C.D.下列關(guān)于纖維素酶的敘述,錯(cuò)誤的是()A.纖維素酶只有一種,只能將纖維素分解為葡萄糖B.纖維素酶是一種復(fù)合酶,至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三種組分C.纖維素可被纖維素酶水解成葡萄糖,為微生物提供營養(yǎng)物質(zhì)D.分解纖維素的細(xì)菌、真菌和放線菌,都是通過產(chǎn)生纖維素酶來分解纖維素的CA【對點(diǎn)檢測】在加入剛果紅的培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)如右圖所示的透明圈,產(chǎn)生的透明圈是()A.剛果紅與纖維素形成的復(fù)合物B.剛果紅被纖維素分解菌分解形成的C.纖維素分解后形成的葡萄糖導(dǎo)致的D.以纖維素分解菌為中心形成的D某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用?;卮鹣铝袉栴}。(1)有些細(xì)菌能分
11、解尿素,有些細(xì)菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是。但可用葡萄糖作為碳源,進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是 (答出兩點(diǎn)即可)。 (2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,在配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)選擇(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作為氮源,不選擇其他兩組的原因是 。 (3)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有(答出兩點(diǎn)即可)。 脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量,為其他有機(jī)物的合成提供原料尿素其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3,不能起到篩選作用為細(xì)菌生長提供無機(jī)營養(yǎng),
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