生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本知識匯編課件

1、生物化學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本知識教學(xué)目的和要求：1、掌握實(shí)驗(yàn)用純水的三級標(biāo)準(zhǔn)；實(shí)驗(yàn)方法的分級、標(biāo)準(zhǔn)品分級及相互之間的聯(lián)系；實(shí)驗(yàn)誤差的定義、分類和表示方法；方法評價(jià)實(shí)驗(yàn)尤其是回收實(shí)驗(yàn)和干擾實(shí)驗(yàn)的原理和操作；診斷性能評價(jià)的指標(biāo)。2、熟悉純水的制備方法；實(shí)驗(yàn)方法選擇的的原則和步驟；方法評價(jià)的基本內(nèi)容和步驟；方法評價(jià)的指標(biāo)；參考值和醫(yī)學(xué)決定水平的概念。3、了解水的純度檢查；方法性能判斷的指標(biāo)；受試者工作曲線的應(yīng)用和用途。2第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)用純水天然水 自來水 實(shí)驗(yàn)用純水 經(jīng)簡單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機(jī)鹽 經(jīng)蒸餾、電滲析等處理，除去雜質(zhì) (懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì))3一、純水的制備方法 蒸餾

2、法:優(yōu)點(diǎn):設(shè)備簡單缺點(diǎn):1、揮發(fā)性物質(zhì)難以去除；2、耗能大，耗能水多； 3、需注意管道清潔 純度： 25時(shí)1105cm如何安裝：4離子交換法：氫型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂(RSO3H，R為母體)，其中的H+與Ca2+、Na+等金屬離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將鈣、鎂離子除去 氫氧型強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂(RNOH，R為母體)，其中的OH-與水中的CL-、碳酸根等陰離子發(fā)生交換反應(yīng)，而將它們除去：5優(yōu)點(diǎn): 除了可去除雜質(zhì)離子以外兼具吸附電中性雜質(zhì)和過濾顆粒雜質(zhì)的作用。缺點(diǎn): 純度： 25時(shí)5106cm2、由于離于交換為可逆反應(yīng)，故去離子水并非絕對不含離子 1、設(shè)備較復(fù)雜，成本較高；6電滲透法 在電場作用下水中

3、各種陽離子趨向陰極，各種陰離子趨向陽極但陽離子只能透過陽膜而被相鄰的陰膜所阻，陰離子與此相反這樣，在一些隔間內(nèi)集中了陽離子和陰離子，即形成含鹽多的濃水，在另一些隔間內(nèi)由于陰、陽離子的遷出降低了含鹽量形成淡水 71、不需要消耗化學(xué)藥品，設(shè)備簡單，操作方便。消耗電能，當(dāng)原水中鹽濃度過低時(shí)，溶液電阻大，用電滲析也不經(jīng)濟(jì) 純度:25時(shí)104105cm2、對于含鹽量高的海水等用此法比用離子交換法更為經(jīng)濟(jì)優(yōu)點(diǎn):缺點(diǎn):8炭吸附法:活性炭是一種非常優(yōu)良的吸附劑，它是利用木炭、各種果殼和優(yōu)質(zhì)煤等作為原料，通過物理和化學(xué)方法對原料進(jìn)行破碎、過篩、催化劑活化、漂洗、烘干和篩選等一系列工序加工制造而成。91、設(shè)備簡單

4、，操作方便。純水制備效率低.,僅作為各種制備純水配套的一種措施. 2、它具有物理吸附和化學(xué)吸附的雙重特性,可以有選擇的吸附氣相、液相中的各種有機(jī)物質(zhì).優(yōu)點(diǎn):缺點(diǎn):10超濾膜法特點(diǎn):僅能除去膠體細(xì)菌等大分子物質(zhì)和懸浮物,所得水還需進(jìn)一步純化.也是作為各種制備純水配套的一種措施.11混合純化系統(tǒng)醫(yī)用超純水設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng) 櫥下式全自動逆滲透純水機(jī)特點(diǎn):多種方法混合純化,可獲得純度很高的二級甚至一級純水.12二、水的純度檢查 用電導(dǎo)儀或兆歐表測定其電導(dǎo)率或電阻率用特定試劑檢測水中殘留的Ca2+、Mg2+、CI-、SO42- 、硅酸鹽等成分的含量微生物含量檢測單位：電導(dǎo)：西門子（s）電導(dǎo)率： sc

5、m-1電阻：電阻率：cm13CAP:美國病理學(xué)家學(xué)會實(shí)驗(yàn)用純水標(biāo)準(zhǔn)14NCCLS:美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會15級水:臨床實(shí)驗(yàn)室用水,一般實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn);級水:特殊實(shí)驗(yàn)如酶活性測定、電解質(zhì)分析等;級水:用做儀器、器皿的自來水清潔后沖洗. 實(shí)驗(yàn)用純水的用途16實(shí)驗(yàn)用純水的貯存、運(yùn)輸和使用: 一般選用聚乙烯或聚丙烯桶（瓶）貯存，貯存時(shí)間不宜太長，使用時(shí)應(yīng)避免一切可能的污染，切勿用手接觸純水或容器內(nèi)壁. 盛裝藥品,試劑17第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)用玻璃儀器(了解) 18第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的選擇 選擇準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)方法為臨床提供準(zhǔn)確可靠的信息臨床生化檢驗(yàn)分析實(shí)驗(yàn)方法選擇的目的實(shí)驗(yàn)方法的分級 標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級保證19一、實(shí)驗(yàn)

6、方法選擇的目的根本目的：各實(shí)驗(yàn)室按照方法選擇的原則結(jié)合自身?xiàng)l件，確定合適的某項(xiàng)目的檢測方法。保證擬使用的檢測方法在正式應(yīng)用于臨床分析病人標(biāo)本之前，對方法性能及可能引入的誤差進(jìn)行了解，作出初步評估。20二、實(shí)驗(yàn)方法的分級分級依據(jù)：IFCC根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與精密度的不同。決定性方法 參考方法 常規(guī)方法 分為三級：21（一）決定性方法definitive method定義： 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測定結(jié)果與真值最為接近。主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）22應(yīng)用： 由于技術(shù)要求太高，費(fèi)

7、用昂貴，這類方法不直接用于鑒定常規(guī)方法的準(zhǔn)確性，只用于評價(jià)參考方法與一級標(biāo)準(zhǔn)品。儲氫重量分析儀 (北京英格海德分析技術(shù)有限公司)23（二）參考方法reference method定義： 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實(shí)，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機(jī)構(gòu)（國家主管部門、相關(guān)學(xué)術(shù)團(tuán)體和國際性組織等）頒布的方法。這類方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復(fù)測定中的隨機(jī)誤差可以忽略不計(jì)。主要方法： 原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等24應(yīng)用： 能在條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室作常規(guī)分析，主要用于鑒定常規(guī)方法，評價(jià)其誤差大小、干擾因素并決定是否可以被接受；用

8、于鑒定二級標(biāo)準(zhǔn)品和為質(zhì)控血清定值；用于商品試劑盒的質(zhì)量評價(jià)。25（三）常規(guī)方法（routine method ）定義： 應(yīng)具有足夠的精密度、準(zhǔn)確度和特異度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，?jīng)濟(jì)實(shí)用，其性能指標(biāo)符合臨床或其它目的的需要。主要方法： 溴甲酚綠法、雙縮脲法、J-G法等。應(yīng)用： 臨床常規(guī)檢驗(yàn)使用，常規(guī)方法在作出評定以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法（recommended method ） 。偏差已知方法偏離未知方法26項(xiàng)目決定性方法參考方法鈣ID-MS原子吸收分光光度法氯電量滴定法、中子活化法電流滴定法鎂ID-MS原子吸收分光光度法磷ID-MS鉀ID-MS、中子活化法火焰光度法鈉重量分析法

9、、中子活化法火焰光度法白蛋白免疫化學(xué)法總蛋白雙縮脲法肌酐ID-MS、離子交換層析法離子交換層析法尿素ID-MS尿素酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法）膽紅素重氮反應(yīng)法葡萄糖ID-MS己糖激酶法膽固醇ID-MSAbell-Kendall法，膽固醇氧化酶法甘油三酯ID-MS酶法AST（GOT ） MDH-NADH法ALT（GPT）LDH-NADH法轉(zhuǎn)肽酶（r-GT）連續(xù)監(jiān)測產(chǎn)物生成法肌酸激酶 NAD+偶聯(lián)法27三、標(biāo)準(zhǔn)試劑的分級標(biāo)準(zhǔn)試劑（標(biāo)準(zhǔn)品）的定義： 國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會將標(biāo)準(zhǔn)品（參考物， reference material）的定義暫定為：它的一種或幾種物理或化學(xué)性質(zhì)已經(jīng)充分確定；被用于校正儀器

10、或用于評價(jià)一種測定方法的物質(zhì)，并將其分成三級。標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用：方法評價(jià)、儀器校正、常規(guī)分析的質(zhì)量控制28標(biāo)準(zhǔn)品的分級：一級標(biāo)準(zhǔn)品 二級標(biāo)準(zhǔn)品 控制物 29（一）一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物）定義： 是已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，其數(shù)值已由決定性方法確定或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)已經(jīng)定量。應(yīng)用： 用于校正決定性方法，評價(jià)和校正參考方法以及為“二級標(biāo)準(zhǔn)品”定值。30（二）二級標(biāo)準(zhǔn)品（次級參考物）定義： 這類標(biāo)準(zhǔn)品可以是純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C(jī)溶劑的溶液），也可以存在于相似基質(zhì)中?？捎蓪?shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐?，其中有關(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級標(biāo)準(zhǔn)品比較而確定。應(yīng)用： 主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化和控制物的定

11、值。31（三）控制物（質(zhì)控物） 用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定，用于常規(guī)質(zhì)量控制，以控制病人標(biāo)本的測定誤差。控制物不能用于標(biāo)定儀器或方法。 定值血清：在發(fā)生問題時(shí)查找原因 未定值血清：一般情況下使用 另：用二級標(biāo)準(zhǔn)品和常規(guī)方法測定，然后定值經(jīng)過修正后得到校準(zhǔn)品。32決定性方法 一級標(biāo)準(zhǔn)品參考方法 二級標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)方法 控制物33四、實(shí)驗(yàn)方法選擇的原則總原則： 從實(shí)際出發(fā)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件和檢測要求確定適當(dāng)?shù)姆椒?。條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室：參考方法一般臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室：常規(guī)方法或使用方便的參考方法34 盡量選用國內(nèi)外通用方法或推薦方法，便于方法的規(guī)范化和質(zhì)量控制，重點(diǎn)考慮實(shí)用性和可靠性。常規(guī)方法選擇時(shí)的原

12、則：35（一）實(shí)用性微量快速、方法簡便、安全可靠、成本低廉（二）可靠性 所選方法具有較高的精密度、準(zhǔn)確度和較大的檢測能力，保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性能滿足方法允許誤差限度的要求。標(biāo)本l、試劑ml36五、實(shí)驗(yàn)方法選擇的步驟（一）廣泛查閱文獻(xiàn)：（二）選定侯選方法：全面認(rèn)識該法。（三）侯選方法的初步試驗(yàn)：根據(jù)方法選擇的要求，比較各種方法37初步試驗(yàn)包括：簡單 標(biāo)準(zhǔn)曲線和重復(fù)性 質(zhì)控血清和新鮮標(biāo)本的重復(fù)實(shí)驗(yàn) 析濃度不同的標(biāo)本，并與公認(rèn)的參考方法的結(jié)果對比.初步試驗(yàn)?zāi)康? 使工作者熟悉有關(guān)技術(shù),掌握各分析步驟要點(diǎn),判斷能否適合本室條件要求.根據(jù)所獲得的資料確定是否有必要作進(jìn)一步研究。初步試驗(yàn)38第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)方

13、法的評價(jià) 初步試驗(yàn)判斷符合實(shí)驗(yàn)要求系統(tǒng)評價(jià)決定該方法是否可接受分析評價(jià)試驗(yàn)測得結(jié)果和比較方法性能判斷的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)評價(jià)的過程:對實(shí)驗(yàn)誤差的測定39一、實(shí)驗(yàn)誤差定義:指量值的給出值與其客觀真值之差.(一)實(shí)驗(yàn)誤差的分類:依據(jù)來源性質(zhì)實(shí)驗(yàn)誤差系統(tǒng)誤差 SE隨機(jī)誤差 RE恒定系統(tǒng)誤差 CE比例系統(tǒng)誤差 PE廣泛性不可求另：粗大誤差40系統(tǒng)誤差（systematic error， SE） 定義:指一系列測定值對真值存在同一傾向的偏差。特點(diǎn):具有單向性，而沒有隨機(jī)性，常有一定的大小和方向； 一般由恒定的因素引起，并在一定條件下多次測定中重復(fù)出現(xiàn)；當(dāng)找到引起誤差的原因，采取一定措施即可糾正，消除系統(tǒng)誤

14、差能提高測定的準(zhǔn)確度。41分類: CE：指由干擾物引起的使測定值與真值存在恒定大小的誤差，誤差大小與被測物濃度無關(guān)，而與干擾物濃度相關(guān)。 PE：指相對于被測物濃度有相同的百分比誤差，誤差的絕對量與被測物濃度成正比。 引起誤差的原因： 方法誤差：最嚴(yán)重，最難避免； 儀器和試劑誤差：可以采取措施避免。42隨機(jī)誤差（random error，RE） 特點(diǎn):誤差沒有一定的大小和方向，可正可負(fù)，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布； 具有不可預(yù)測性，不可避兔，但可控制在一定范圍內(nèi)； 當(dāng)分析步驟越多，造成種誤差的機(jī)會越多； 隨測定次數(shù)增加，其算術(shù)均數(shù)就越接近于真值。定義:指在實(shí)際工作中，多次重復(fù)測定某一物質(zhì)時(shí)引起的誤差。43

15、由測定儀器、試劑、環(huán)境等實(shí)驗(yàn)條件的改變以及分析人員操作習(xí)慣等因素的變化而引起。系統(tǒng)誤差 隨機(jī)誤差引起誤差的原因引起誤差的原因：44(二)實(shí)驗(yàn)誤差的表示方法：平均誤差：算術(shù)平均偏差，用dm表示標(biāo)準(zhǔn)偏差（標(biāo)準(zhǔn)差）：表示精密度的較好的指標(biāo)。絕對誤差和絕對偏差：dm=di/n=X- /ndi2=N-1絕對誤差=X-T絕對偏差=X-X45相對誤差和相對偏差：變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）相對誤差=X-TT100%相對偏差=X-X X100%CV= S X100比較各組數(shù)據(jù)間的變異情況CV 離散度 精密度4647二、方法評價(jià)的基本內(nèi)容和步驟(一)方法評價(jià)的基本內(nèi)容基本內(nèi)

16、容:通過實(shí)驗(yàn)途徑，測定并評價(jià)方法的精密度和準(zhǔn)確度。評價(jià)試驗(yàn)的過程:就是對誤差的測定。精密度和準(zhǔn)確度誤差方法評價(jià)指標(biāo)不可直接測定 實(shí)際測定可直接測定方法評價(jià)試驗(yàn)48(二)方法評價(jià)步驟評價(jià)前實(shí)驗(yàn):研究候選方法的最適條件。 初步評價(jià):批內(nèi)和日內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)、回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn) 最后評價(jià):依順序作日間重復(fù)性試驗(yàn)，方法比較試驗(yàn)和總體判斷方法是否可接受 。評價(jià)后實(shí)驗(yàn):如方法可接受，則進(jìn)行臨床相關(guān)研究.方法應(yīng)用:建立質(zhì)控系統(tǒng)，培訓(xùn)操作者，引人常規(guī)工作等 。 隨機(jī)誤差系統(tǒng)誤差方法性能判斷診斷學(xué)評價(jià)49三、方法評價(jià)指標(biāo) 精密度、準(zhǔn)確度、特異度和干擾以及檢測能力等（一）精密度（Precision）定義:表示測定結(jié)果

17、中隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。它表示同一標(biāo)本在一定條件下多次重復(fù)測定所得到的一系列單次測定值的符合程度。 表示方法:自身無量度指標(biāo)，常用標(biāo)準(zhǔn)差（S）或變異系數(shù)（CV）表示。（n，X）（n，X）50分類：連續(xù)測定的精密度 重復(fù)性精密度 （了解）再現(xiàn)性精密度 （了解）51連續(xù)測定的精密度： 在相同條件下，對同一標(biāo)本連續(xù)進(jìn)行n次重復(fù)測定結(jié)果的符合程度。在有限次測定情況下，一般用 （總體標(biāo)準(zhǔn)差）的估計(jì)值S（樣本標(biāo)準(zhǔn)差）來表達(dá)這種精密度。定義：52重復(fù)性精密度： 又稱室（批）內(nèi)精密度，指在相同條件下（同樣方法、同一種試劑和標(biāo)準(zhǔn)品、同樣儀器、在同一實(shí)驗(yàn)室由同一人操作，并要保持實(shí)驗(yàn)期間準(zhǔn)確性不變）對同一標(biāo)本在盡

18、可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪n次重復(fù)測定結(jié)果之間相互接近的程度。重復(fù)性（批內(nèi)）精密度（S）Si2mS=Si=(xt-xt)2n-1CV= S X100定義：53再現(xiàn)性精密度定義： 又稱室（批）間精密度，指在不同條件下（不同操作者，用不同儀器，在不同實(shí)驗(yàn)室和不同時(shí)間）采用同一方法對同一標(biāo)本所獲得的單次測定結(jié)果之間彼此符合程度。應(yīng)用：多用于實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量估計(jì)，其標(biāo)準(zhǔn)差常稱為室間標(biāo)準(zhǔn)差。室（批）間標(biāo)準(zhǔn)差，是在對室（批）間重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析后進(jìn)行計(jì)算。54（二）準(zhǔn)確度：定義: 指測定結(jié)果與真值接近的程度，一般用偏差和偏差系數(shù)表示。表示方法: 偏差為重復(fù)測定均值（ X）與真值之差。

19、偏差系數(shù)（CB）= 100 。真值-X真值定量的標(biāo)準(zhǔn)品確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法或55影響因素：系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差（了解）表示已定系統(tǒng)誤差的綜合。A=+（不確定度） 不確定度（uncertainty）是表達(dá)測定結(jié)果的一個(gè)組成部分，它表明被測標(biāo)本中真值存在的范圍56（三）特異度和干擾 即專一性，是指在特定實(shí)驗(yàn)條件下分析試劑只對待測物質(zhì)起反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)相似的非被測物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。分析方法特異度越高，則測定結(jié)果越準(zhǔn)確。特異度（specificity） 是指標(biāo)本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低，這些非被測物質(zhì)稱為干擾物。干擾（interference）特異度干擾方法的準(zhǔn)

20、確性側(cè)面指標(biāo)正面指標(biāo)57（四）檢測能力 定義：即檢測限度或檢出限（detection limit），是指能與適當(dāng)?shù)摹翱瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的待測物的最小值?？瞻鬃x數(shù)： 指由基質(zhì)、試劑所得的讀數(shù)和結(jié)果，以及由儀器或測定過程所產(chǎn)生的影響測定步驟的殘余偏差。試劑空白：試劑+D.W檢出限TTT B 58四、評價(jià)試驗(yàn) 評價(jià)試驗(yàn)包括重復(fù)性試驗(yàn)回收試驗(yàn)于擾試驗(yàn)方法比較試驗(yàn) 59（一）重復(fù)性試驗(yàn)試驗(yàn)的目的: 試驗(yàn)的方法: 對同一材料（標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控液、標(biāo)本等）分成數(shù)份試驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行多次分析測定，并計(jì)算其均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。檢測候選方法的隨機(jī)誤差（1）批內(nèi):標(biāo)準(zhǔn)液 （2）日內(nèi): （3）日間:質(zhì)控液 （4）平行雙份:試

21、驗(yàn)的形式:應(yīng)注意的問題:（1）分析標(biāo)本選擇（2）被測物濃度60(二)回收試驗(yàn)試驗(yàn)的目的: 試驗(yàn)的方法: 將被測物標(biāo)準(zhǔn)液加人病人標(biāo)本中，成為分析標(biāo)本；原病人標(biāo)本中加人等量的無被測物的溶劑作基礎(chǔ)標(biāo)本；然后用候選方法測定并得到各自濃度。檢測候選方法的比例系統(tǒng)誤差?；厥?指候選方法準(zhǔn)確測定加入常規(guī)分析標(biāo)本的純分析物的能力。61回收濃度=分析標(biāo)本測得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測得濃度（實(shí)際測得值）計(jì)算:加入濃度= 標(biāo)準(zhǔn)液量病人樣品量（ml）標(biāo)準(zhǔn)液量（ml） 標(biāo)準(zhǔn)液濃度（理論真實(shí)值）回收率（%）=回收濃度加入濃度 100（理想值為）比例系統(tǒng)誤差回收率真實(shí)值測定值真實(shí)值誤差值真實(shí)值62注意事項(xiàng)：吸量準(zhǔn)確；加入標(biāo)準(zhǔn)液

22、后，其實(shí)驗(yàn)樣品的被子測濃度最好達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平；總濃度必須在方法分析范圍內(nèi)；需加入高中低不同濃度回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率；加入標(biāo)準(zhǔn)液的體積一般在10%內(nèi)；重復(fù)2-3次。63(三)干擾試驗(yàn)試驗(yàn)的目的: 用來檢測候選方法的恒定系統(tǒng)誤差。干擾物濃度不同，誤差大小也不同干擾:指標(biāo)本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低。64試驗(yàn)的方法: 基本與回收試驗(yàn)一樣，但在病人標(biāo)本中加人的是疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。將可能引起干擾的物質(zhì)配成一定濃度的溶液，加到病人標(biāo)本中成為干擾分析樣本；原病人標(biāo)本加人相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣本；然后用候選方法對此兩種樣本同時(shí)測定，兩

23、者之差即表示該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾所引起的誤差，即干擾值干擾值=分析標(biāo)本測得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測得濃度計(jì)算:65注意事項(xiàng)被試驗(yàn)的物質(zhì)：膽紅素、溶血、防腐劑、抗凝劑、藥物等可疑干擾物的濃度：干擾物濃度有可能達(dá)到病理標(biāo)本最高濃度值。本試驗(yàn)檢測的誤差包括方法特異度不高和干擾物作用引起的誤差。消除干擾常用方法空白對照：試劑空白：常見標(biāo)本空白：內(nèi)空白法和外空白法物理、化學(xué)方法分離干擾物雙波長或多波長法檢測排除干擾誤差較大又無法消除，則改進(jìn)或更換方法。（分析標(biāo)本就是模擬實(shí)際標(biāo)本）66(四)方法比較試驗(yàn)（對比試驗(yàn)）（熟悉）試驗(yàn)的目的: 試驗(yàn)的方法: 對一組病人的標(biāo)本用候選方法和比較方法同時(shí)進(jìn)行分析測定，觀察二

24、者之間的差異。這是考驗(yàn)候選方法是否可采用的重要措施。 用于檢測候選方法的系統(tǒng)分析誤差。對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，可提供系統(tǒng)誤差的性質(zhì)（恒定或和比例誤差）67在進(jìn)行臨床化學(xué)常規(guī)方法的評價(jià)時(shí)，最好選擇參考方法作為比較方法若采用已知偏差法，則有部分誤差來自比較方法（與已知偏差 一致的那部分誤差），剩余的則屬于侯選方法。若采用未知偏差法，分析誤差可能來源于二者之一或兩者都有，難以分析。比較方法的選擇：應(yīng)注意的問題:統(tǒng)計(jì)處理：配對t檢驗(yàn)、相關(guān)和回歸分析。68方法學(xué)評價(jià)實(shí)驗(yàn)小結(jié)重復(fù)性試驗(yàn)：測定候選方法的偶然誤差，衡量精密度?；厥赵囼?yàn)：測定比例系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。干擾試驗(yàn)：測定恒定系統(tǒng)誤差，衡量準(zhǔn)確度。方法對比

25、試驗(yàn)：檢測候選方法的系統(tǒng)分析誤差。69五、方法性能判斷方法的選擇 方法的評價(jià)實(shí)驗(yàn)的診斷性能評價(jià)方法性能判斷建立質(zhì)控,引入常規(guī)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)誤差某一確定的允許誤差某一確定的允許誤差方法性能標(biāo)準(zhǔn)(PS):運(yùn)用統(tǒng)計(jì)方法制定出一系列醫(yī)學(xué)決定水平上的標(biāo)本允許誤差限度70（一）方法學(xué)性能指標(biāo)：、允許分析誤差：依據(jù)Westgard制定的標(biāo)本的允許誤差限度，或者的病人標(biāo)本其誤差應(yīng)小于這個(gè)限度，用表示。 是大量研究,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法制定出的。、醫(yī)學(xué)決定水平：對臨床病人的診療具有醫(yī)學(xué)判斷作用的臨界分析物濃度，用c表示。c代表一個(gè)閾值。每個(gè)檢測指標(biāo)有一個(gè)或多個(gè)閾值。性能指標(biāo):和c組成某方法的性能指標(biāo)。即某方法在一定XC下的

26、值。71制定性能標(biāo)準(zhǔn)，要反映臨床應(yīng)用與解釋結(jié)果的要求（醫(yī)學(xué)效用限度），又要基本符合實(shí)驗(yàn)室所能做到的技能狀態(tài)。方法學(xué)性能標(biāo)準(zhǔn)制定原則72（二）方法性能判斷指標(biāo)：判斷標(biāo)準(zhǔn)：各種誤差值確定的允許誤差值：方法可以接受任何一項(xiàng)各種誤差值確定的允許誤差值：方法不能接受性能判斷指標(biāo)：兩套（了解）第一套：單值判斷指標(biāo)：簡單，用于初步估量第二套：可信區(qū)間判斷指標(biāo)：復(fù)雜，對方法性能評價(jià)更客觀，用于最后判斷73、單值判斷指標(biāo) 誤差類別 判斷指標(biāo) 備注隨機(jī)誤差（RE） 1.96STMEA STM=重復(fù)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)差 比例誤差（PE）(|R-100|)(XC/100)EA R=平均回收率恒定誤差(CE) |偏差|EA 由

27、干擾試驗(yàn)測出系統(tǒng)誤差(SE) |(a+bXc)-Xc|EA 對比試驗(yàn)回歸方程總誤差(TE) RE+SEEA 包括偶然及系統(tǒng)誤差74（）可信區(qū)間、可信上限和可信下限：統(tǒng)計(jì)學(xué)的規(guī)律說明，每種測定結(jié)果的可靠性與測定次數(shù)有關(guān)，次數(shù)愈多，結(jié)果反映真實(shí)性愈強(qiáng)；但實(shí)際上，不可能進(jìn)行大量的測定。 在統(tǒng)計(jì)學(xué)中為了估量分析誤差的不確定性，對于每一誤差可計(jì)算其可信區(qū)間，用可信上限與可信下限代替單值的估量，u為誤差的可信上限，l為誤差的可信下限。west-gard推薦用90的可信區(qū)間，這樣，u將是誤差單側(cè)的95上限，用此判斷候選方法的可接受性比較可靠。75假如，u EA ，則方法性能為可接受；假如l EA，則方法必須

28、改進(jìn)，以減少誤差，否則排除。假如u EA ，但l EA ，說明僅有的數(shù)據(jù)不足以作出任何有關(guān)可接受性的結(jié)論，還需繼續(xù)實(shí)驗(yàn)以收集更多的數(shù)據(jù)，以便對分析誤差作出較好的估量 76、可信區(qū)間判斷指標(biāo)計(jì)算公式：誤差類別 實(shí)驗(yàn) 接受指標(biāo)EUEA隨機(jī)誤差 重復(fù)性 1.96STMUEA比例誤差 回收 |RU或L-100|U (XC /100)EA*恒定誤差 干擾 |d|+t(sd)/NUEA* 系統(tǒng)誤差 對比 | (a+bXcW)-XC| UEA*總誤差 重復(fù)性和 (1.96STMU)2+W2 (1.96STML)2+W2 方法對比 +|a+bXc)-XC|EA#*特例:當(dāng)RU100RL,PEL=0 *特例:當(dāng)t(sd)/NL/偏差/,CEL=0*特例:當(dāng)(a+bXc+W)XC (a+bXc-W),CEL=0# 特例:當(dāng)SEL=0,TEL=REL 77內(nèi)容原理、試劑配制、所用器材、操作步驟等結(jié)論可接受或不被接受后期工作評價(jià)后實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用階段。（三）評價(jià)實(shí)驗(yàn)書面報(bào)告78第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)的診斷性能評價(jià) 方法的選擇 方