生物危害性項(xiàng)目策劃?rùn)z測(cè)實(shí)習(xí)報(bào)告

1、實(shí) 習(xí) 報(bào) 告實(shí)習(xí)名稱 食品安全檢測(cè)技術(shù)課程實(shí)習(xí)-生物危害性項(xiàng)目檢測(cè) 系 不 生 物 與 化 學(xué) 工 程 年級(jí)專業(yè) 食品工程(本科） 學(xué)生姓名 XXX 指導(dǎo)老師 XXX X X X XXX年 XX月 XX 日奶粉中生物危害性項(xiàng)目的檢測(cè)一、實(shí)習(xí)時(shí)刻、地點(diǎn)和實(shí)習(xí)單位實(shí)習(xí)時(shí)刻：2010年12月06日2010年12月19日（二周）。實(shí)習(xí)地點(diǎn)：生物與化學(xué)工程系微生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)習(xí)單位：食品科學(xué)與工程第六組二、實(shí)習(xí)過(guò)程起止日期實(shí)習(xí)單位和部門要緊實(shí)習(xí)內(nèi)容和方式組不指導(dǎo)老師11.18生物與化學(xué)系微生物實(shí)驗(yàn)室動(dòng)員大會(huì)各組成員12.612.8查找資料，制定方案，老師審定方案后，學(xué)生預(yù)備儀器、材料12.9-12.12食

2、品變質(zhì)前后菌落總數(shù)檢測(cè)12.13革蘭氏染色法檢測(cè)菌落總數(shù)中陰陽(yáng)性菌數(shù)量的變化12.14-12.18食品變質(zhì)前后霉菌總數(shù)檢測(cè)12.19書寫實(shí)習(xí)報(bào)告以及實(shí)習(xí)筆記三、實(shí)習(xí)目的與要求1、實(shí)習(xí)目的：食品安全檢測(cè)技術(shù)實(shí)習(xí)是不可缺少的實(shí)踐性教學(xué)環(huán)節(jié)，是食品科學(xué)與工程、食品質(zhì)量與安全專業(yè)的必修課。依照教學(xué)大綱要求，通過(guò)二周的實(shí)習(xí)，學(xué)生對(duì)食品的生物安全性及其操縱技術(shù)應(yīng)加深理解，熟悉試樣的采集、保存、制備方法，了解常規(guī)生物性危害項(xiàng)目，掌握常見(jiàn)分析檢測(cè)方法及其操作，熟悉有關(guān)儀器設(shè)備的使用方法，并初步具有分析解決實(shí)際遇到的具體問(wèn)題的能力。實(shí)習(xí)中應(yīng)注重培養(yǎng)和提高動(dòng)手能力，進(jìn)一步鞏固和深化課堂理論知識(shí)，達(dá)到理論與實(shí)踐相輔

3、相成，融會(huì)貫穿，為今后參加工作奠定一定基礎(chǔ)，并通過(guò)實(shí)習(xí)培養(yǎng)學(xué)生良好的職業(yè)道德觀。2、實(shí)習(xí)要求：1、對(duì)待測(cè)樣品的生物危害性項(xiàng)目檢測(cè)能制訂出詳細(xì)的方案。2、合理地選擇和使用所需的儀器。3、能合理、準(zhǔn)確地配制各種試劑并滅菌。4、能在無(wú)菌室中正確地進(jìn)行各項(xiàng)無(wú)菌操作。5、能在規(guī)定的時(shí)刻內(nèi)完成危害性項(xiàng)目的檢測(cè)。6、實(shí)習(xí)筆記每天記錄及時(shí)、清晰、真實(shí)。7、各組內(nèi)成員要相互配合，有問(wèn)題應(yīng)主動(dòng)向老師請(qǐng)教。8、每次（天）操作完成后，要對(duì)工作區(qū)域進(jìn)行清理整潔工作。9、愛(ài)惜儀器、節(jié)約試劑和水電，注意安全，防止意外事故發(fā)生。10、實(shí)習(xí)結(jié)束一周后寫出實(shí)習(xí)報(bào)告。四、實(shí)習(xí)內(nèi)容1、分析檢驗(yàn)的依據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目引用標(biāo)準(zhǔn)植物蛋白飲料衛(wèi)生標(biāo)

4、準(zhǔn) GB 163222010食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測(cè)定引用GB 4789.22010奶粉中霉菌和酵母計(jì)數(shù)引用GB 4789.1520102、分析檢測(cè)的方法與內(nèi)容一：原理菌落總數(shù)：食品檢樣通過(guò)處理，在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)刻等)培養(yǎng)后，所得每g (mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。二：設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下:2. 1恒溫培養(yǎng)箱:36 士1，30 士1 2. 2冰箱:2 5 2. 3恒溫水浴箱:46 士1 。2. 4天平:感量為0.1 g2. 5均質(zhì)器。2. 6振蕩器。2. 7無(wú)菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0

5、.1 mL刻度)或微量移液器及吸頭。2. 8無(wú)菌錐形瓶:容量250 mL, 500 mL2. 9無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑90 mm2. 10 pH計(jì)或pH比色管或周密pH試紙。2. 11放大鏡或/和菌落計(jì)數(shù)器。三：培養(yǎng)基和試劑3. 1平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基:1成分胰蛋白陳5.0 g 酵母浸膏2.5 g 葡萄糖1.0 g瓊脂 15.0 g 蒸餾水1000 mL pH 7.0士0.22制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶，121高壓滅菌15 min3.2 磷酸緩沖液: 1成分磷酸二氫鉀(KH2P04) 34.0 g 蒸餾水500 mL pH 7.22制法 貯存液:稱取34.0 g的

6、磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175ml的1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL)u貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 高壓滅菌15 min3.3無(wú)菌生理鹽水1成分 氯化鈉8.5 g 蒸餾水1 000 mL2制法 稱取8.5 g氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 高壓滅菌15 min 菌落總數(shù)的檢測(cè)程序4操作步驟4. 1樣品的稀釋4.1.1固體和半固體樣品:稱取25 g樣品置盛有225 mL磷酸緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min-10000 r/min均質(zhì)1 min-2

7、 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min-2 min制成1:10的樣品勻液。4.1.2液體樣品:以無(wú)菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶 (瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。4.1.3用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL沿管壁緩慢注于盛有9 mL稀釋液的無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。4.1.4按6.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1

8、 mL無(wú)菌吸管或吸頭。4.1.5依照對(duì)樣品污染狀況的可能，選擇2個(gè)一3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 mL樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分不吸取1 mL空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)比。4.1.6及時(shí)將巧15mL-20 mL冷卻至46 的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46 士1 恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。4. 2培養(yǎng)4. 2. 1待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 士1 培養(yǎng)48 h士2h。水產(chǎn)品30 士1 培養(yǎng)72 h士3 h4.2.2假如樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面布滿生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊

9、脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4 mL)，凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。4. 3菌落計(jì)數(shù) 可用肉眼觀看，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units CFU)表示。4. 3. 1選取菌落數(shù)在30 CFU-300 CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采納兩個(gè)平板的平均數(shù)。4.3.2其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采納，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半，而其

10、余一半中菌落分布又專門均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。4.3.3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。5結(jié)果與報(bào)告5. 1菌落總數(shù)的計(jì)算方法若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g （mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。5.1.1若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式(1)計(jì)算:、式中:N一樣品中菌落數(shù);C一平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;n1第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);n2第一稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);d一稀釋因子(第一稀釋度)。5.1.2

11、若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。5.1.3若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。5.1.4若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。5.1.5若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU-300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于30FU時(shí)，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。5. 2菌落總數(shù)的報(bào)告5. 2. 1菌落數(shù)小于100 CFU時(shí)，按“四舍五入”原

12、則修約，以整數(shù)報(bào)告。5.2.2菌落數(shù)大于或等于100 CFU時(shí)，第3位數(shù)字采納“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù);也可用10的指數(shù)形式來(lái)表示，按“四舍五入”原則修約后，采納兩位有效數(shù)字。5.2.3若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。5. 2. 4若空白對(duì)比上有菌落生長(zhǎng)，則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。5.2.5稱重取樣以 CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。稀釋度計(jì)數(shù)10-1無(wú)法計(jì)數(shù)10-23810-34空白06奶粉中霉菌總數(shù)的測(cè)定6、1檢驗(yàn)原理食品檢樣通過(guò)處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)刻等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌

13、落總數(shù)。6、2檢驗(yàn)儀器和試劑除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：6、2、1 冰箱：2 5 。6、2、2 恒溫培養(yǎng)箱： 28 1 。6、2、3 均質(zhì)器。6、2、4 恒溫振蕩器。6、2、5 顯微鏡：10100。6、2、6 電子天平：感量0.1 g。6、2、7 無(wú)菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。6、2、8 無(wú)菌廣口瓶：500 mL。6、2、9 無(wú)菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。6、2、10 無(wú)菌平皿：直徑90 mm。6、2、11 無(wú)菌試管: 10 mm75 mm。6、2、12 無(wú)菌牛皮紙袋、塑料袋。6、2、13 馬鈴薯-葡

14、萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：6、2、13、1 成分馬鈴薯(去皮切塊) 300 g；葡萄糖 20.0 g；瓊脂 20.0 g；氯霉素 0.1 g蒸餾水 1000 mL6、2、13、2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL 蒸餾水，煮沸10 min20 min。用紗布過(guò)濾，補(bǔ)加蒸餾水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。6、2、14 孟加拉紅培養(yǎng)基：6、2、14、1 成分蛋白胨 5.0 g；葡萄糖 10.0 g；磷酸二氫鉀 1.0 g；硫酸鎂（無(wú)水） 0.5 g瓊脂 20.0 g；孟加拉紅 0.033 g；氯霉素 0.1

15、 g；蒸餾水 1000 mL6、2、14、2 制法上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補(bǔ)足蒸餾水至1000 mL，分裝后，121滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。6、3操作方法6.3.1 樣品的稀釋6.3.1.1 以無(wú)菌吸管吸取25 mL 樣品至盛有225 mL 無(wú)菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。6.3.1.2 取1 mL 1:10 稀釋液注入含有9 mL 無(wú)菌水的試管中, 另?yè)Q一支1 mL 無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸,此液為1:100 稀釋液。6.3.1.3 按2.3.3.1.2 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品

16、勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無(wú)菌吸管。6.3.1.4 依照對(duì)樣品污染狀況的可能，選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分不吸取1 mL 樣品勻液于2 個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分不取1 mL樣品稀釋液加入2 個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)比。6.3.1.5 及時(shí)將15 mL20 mL 冷卻至46 的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。6.3.2 培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，281培養(yǎng)5d，觀看并記錄。6.3.3 菌落計(jì)數(shù)肉眼觀看，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的

17、霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colonyforming units，CFU）表示。選取菌落數(shù)在10 CFU150 CFU 的平板，依照菌落形態(tài)分不計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采納兩個(gè)平板的平均數(shù)。6、4記錄與數(shù)據(jù)處理6、4、1奶粉變質(zhì)前實(shí)驗(yàn)記錄： 10-3稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為2個(gè) 10-2 稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為38個(gè)數(shù)據(jù)處理：奶粉中霉菌總數(shù)：由10-2 稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為20個(gè)可知?jiǎng)t奶粉中霉菌總數(shù)為（2.0103個(gè)/ mL ） 同理，由10-3稀釋度平板上只長(zhǎng)了2個(gè)菌落可知奶粉中霉菌含量為（2.0103個(gè)/ mL ）結(jié)論：取平均值

18、可知：奶粉中霉菌含量為2.0103個(gè)/ mL6、4、2 奶粉變質(zhì)后實(shí)驗(yàn)記錄：10-5稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為4個(gè) 10-4 稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為37個(gè)數(shù)據(jù)處理：奶粉中霉菌總數(shù)：由10-4稀釋度平板上的平均菌落數(shù)為37個(gè)可知奶粉中霉菌總數(shù)為（3.7105個(gè)/ mL ） 同理，由10-5 稀釋度平板上只長(zhǎng)了4個(gè)菌落可知奶粉中霉菌含量為（4.0105個(gè)/ mL ）結(jié)論：取平均值可知：奶粉中霉菌含量為3.85105個(gè)/ mL五、實(shí)習(xí)收獲和重要心得體會(huì) 本次生產(chǎn)實(shí)習(xí)對(duì)我們這些立即融入社會(huì)的大學(xué)生來(lái)講，起到了舉足輕重的作用，它使我們對(duì)以后的工作方向有了一個(gè)大致的了解。隨著實(shí)驗(yàn)的接著即霉菌含量的測(cè)定的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步加強(qiáng)了我的經(jīng)歷，鞏固了我的知識(shí)?，F(xiàn)在我不僅會(huì)制備培養(yǎng)基、用十倍稀釋法稀釋樣液，還能特不熟練的倒平板、通過(guò)平板上的菌落數(shù)計(jì)算微生物的含量，并能熟練使用革蘭氏染色法檢測(cè)細(xì)菌中的陰性菌與陽(yáng)性菌。總的來(lái)講，有以下幾點(diǎn)收獲：第一，掌握了一些培養(yǎng)基的配置方法，例如細(xì)菌用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、可用于食品中霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)、分離的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）等。第二，學(xué)