14、供閱讀范例工作基礎(chǔ)

1、1、工作基礎(chǔ)（與本項(xiàng)目相關(guān)的工作積累和已取得的工作成績(jī)）申請(qǐng)者所在為心黑龍江省國(guó)家科技部共建，長(zhǎng)期從事心疾病的機(jī)制，承擔(dān)多項(xiàng)國(guó)家科技部，國(guó)家自然基金和課題。本課題申請(qǐng)人和項(xiàng)目組成員一直致力于心肌缺血和周圍病機(jī)制的。項(xiàng)目一直從事 CaR 與相關(guān)文章 20 篇，其中 SCI 12心疾病之間的關(guān)系。本人已取得一定的成績(jī)，共篇，作為課題承擔(dān)國(guó)家自然基金 1 項(xiàng)，作為主要參與者參加國(guó)家自然基金 3 項(xiàng)，2008 年獲得黑龍江省科學(xué)進(jìn)步二等獎(jiǎng)項(xiàng)（第二名）。有關(guān)工作的積累：CSE 野生型小鼠（4 周）H2S 的預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示，與正常 CSE 野生型小鼠比較，產(chǎn)生明顯減低。20151050CSE WTCSE WT

2、diabetesCSE KO圖 4.檢測(cè) CSE 野生型對(duì)照組、及 CSE 敲除鼠造模 4 周 H2S 的產(chǎn)生率（n=2）。的前期工作已證實(shí)在 25mM 葡萄糖處理小鼠腸系膜平滑肌細(xì)胞，CSE 的表達(dá)下調(diào)（見(jiàn)圖 7），同時(shí)在相同的處理?xiàng)l件下，發(fā)現(xiàn) CaR 的表達(dá)也下調(diào)（見(jiàn)圖 8），以上結(jié)果初步證實(shí)了的假設(shè)。actinH2S production rate(nmol/g/min圖 5. 在 25mM 葡萄糖作用腸系膜平滑肌細(xì)胞時(shí) CSE 的表達(dá)變化 （control 組為 5mM 葡萄糖）作用72 小時(shí) CSE 的表達(dá)明顯降低 * p 0.05 vs control （n=3）。圖 6. 在 2

3、5mM 葡萄糖作用腸系膜平滑肌細(xì)胞時(shí) CaR 的表達(dá)變化 （control 組為 5mM 葡萄糖）作用72 小時(shí) CaR 的表達(dá)明顯降低 * p 0.05 vs control （n=3）為了進(jìn)一步證實(shí) CSE 對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的影響，課題組觀察了 CSE 敲除鼠和野生型鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的變化。發(fā)現(xiàn)，CSE 敲除鼠平滑肌細(xì)胞增殖率明顯高于野生型鼠。第 28 頁(yè)WTKO圖 7. CSE 敲除鼠和野生型鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的變化* p 0.05 vs control ,p0.05 vs CSE 野生型鼠（n=3）。已成功構(gòu)建了含有 CSE 全序列的帶有綠色熒光蛋白的質(zhì)粒（pCSE-GFP）

4、，將空質(zhì)粒（pGFP，只含有綠色熒光蛋白）和 pCSE-GFP 轉(zhuǎn)染腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。已檢測(cè)到綠色熒光，A 圖顯示是 pCSE-GFP 的轉(zhuǎn)染結(jié)果；同時(shí)，Western blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在 pCSE-GFP 轉(zhuǎn)染的平滑肌細(xì)胞可檢測(cè)到 CSE-GFP 融合蛋白，CSE 和 GFP 的表達(dá)；空質(zhì)粒（pGFP）轉(zhuǎn)染可檢測(cè)到 GFP 和 CSE 的表達(dá)，未見(jiàn)融合蛋白的表達(dá)；非轉(zhuǎn)染組只檢測(cè)到 CSE 的表達(dá)（見(jiàn)圖 B）。AB圖 8. 構(gòu)建的 CSE-GFP 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。A：熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染后綠色熒光蛋白的表達(dá)；B:Western blot 檢測(cè) CSE-GFP 融合蛋白，CSE

5、 和 GFP 的表達(dá)。第 29 頁(yè)（6）在 CSE 敲除小鼠的中，已經(jīng)篩選到受 CSE 調(diào)節(jié)的，為下一步工作提供了較為可靠的證據(jù)。圖 9.顯示受 CSE 調(diào)節(jié)的。與本課題相關(guān)的主要論著：1. Luhao, Tian zhiliang, Zhang WH et al Calcium-sensing receptors regulatecardiomyocyte Ca2+ signaling via the sarcoplasmic reticulum-mitochondrionhypoxia/reoxygenation J. Biomed Sci. 2010 Jun 17;17:50（責(zé)任作者）

6、erface during2. Shiyun Dong，Zongyan Teng, Zhang WH et alt-conditioning protects cardiomyocytesfrom apoptosis via PKCe-eracting with calcium-sensing receptors to inhibitendo(sarco)plasmic reticulummitochondria crosstalk Mol Cell Biochem(2010) 341:195206（責(zé)任作者）3. Ya-Jun Zhao，Zhang WH Chang-Qing Xu Invo

7、lvement of the ornithine decarboxylase/polyamine system in precondition-induced cardioprotection through aneraction with PKC in rat hearts. Mol Cell Biochem(2009) 332:135144 (并列第一作者)4. Luhao, Tian zhiliang, Zhang WH et al Calcium-sensing receptors induce apoptosis inrat cardiomyocytes viao(sarco)pla

8、smic reticulum pathway duringhypoxia/reoxygenation Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology（2009）106：, 396405（責(zé)任作者）Zhang WH, Fu SB, Lu FH, Wu B, Gong DM, Pan ZW, Lv YJ, Zhao YJ, Li QF, Wang R, BF , Xu CQ. Involvement of calcium sensing receptor in ischemia/ reperfuinduced apoptosis in racardiomyoc

9、ytes. Biochemical and Biophysical Research Communications 2006, 347: 872-881 (第一作者)Zhang WH, Lu FH , Zhao YJ, Wang LN, Tian Y, Pan ZW , Lv YJ, Wang YL, Du LJ, Sun第 30 頁(yè)國(guó)家自然科學(xué)基金申請(qǐng)書2011 版ZR,BF, Wang R, Xu CQ,t-conditioning protects rat cardiomyocytes viaPKCe-mediated calcium-sensing receptors Biochemi

10、cal and Biophysical ResearchCommunications 2007, 361: 659-664 (第一作者)7. Yu-hui Xi Hong-zhu Li Wei-hua Zhang The functional expresof calcium-sensingreceptorhe differentiated THP-1 cells Mol Cell Biochem (publish on line) （第三作者）8. Xing W, Li G, Xi Y, Guo J, Li H, Li H, Zhang WH, Zhang L, Wu L, Wang R,

11、Xu C.The functional expresof calcium-sensing receptors in BRL cells and related signaltransduction pathway responsible forOct;343(1-2):13-9.（第五作者）racellular calcium elevation. Mol Cell Biochem. 20109. Jin Guo, Hong-zhu Li, Wei-huaZhang, Increased expresof calcium-sensing receptorsinduced by ox-LDL a

12、mplifies apoptosis of cardiomyocytes during simulatedischaemiareperfuline) （第三作者）Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology (publish on10. LN Wang, C Wang,Y Lin, YH Xi, Zhang WH Involvement of calcium-sensing receptor incardiac hypertrophy-induced biotensithrough calcineurin pathway in cu

13、ltured neonatalrat cardiomyocytes, Biochem. Biophys. Res. Commun. 369 (2008) 584589. (第五作者)11.G, Wu L, Jiang B,W, Qi J, Cao K, Meng Q, Mustafa AK, Mu W, Zhang S,Snyder SH, Wang R. H2S as a physiologic vasorelaxant: hypertencyshionine gamma-lyase. Science. 2008, 322:587-90. (第一作者)ice with deletion of12.G, Wu L, Bryan S, Khr N, Mani S, Wang R.Cyshionine gamma-lyase deficiency andovroliferation of smooth muscle cells. Cardiovasc