感受態(tài)細胞和質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化(C)課件

1、感受態(tài)細胞和質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化- 精品-導入大腸桿菌: 氯化鈣轉(zhuǎn)化法electroporation 電擊法又叫電穿孔法 體外包裝感染法重組DNA導入哺乳動物細胞: DNA- 磷酸鈣共沉淀、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法脂質(zhì)體介導法、原生質(zhì)體融合法 酵母菌轉(zhuǎn)化法: 完整細胞轉(zhuǎn)化法 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法 電擊法- 精品-大腸桿菌(Escherichia coli)大腸桿菌(Escherichia coli)大約含3000kb的環(huán)狀染色體DNA的棒狀細菌。革蘭氏陰性、兼性厭氧。最適生長溫度37，PH7.07.6 (一般7.4)，保存加甘油，培養(yǎng)皿密封。 大腸桿菌的生長曲線可分為遲緩期(生長滯后期)、對數(shù)生長期(20

2、30min)、穩(wěn)定期(飽和期)，約1109 2108/mL和衰老期。 - 精品- 精品- 大腸桿菌的不同菌株的保存期差別較大。有些菌株在液體培養(yǎng)基中，4可保存幾個月，而有些菌株在相同條件下只能保存幾天。如在相同條件下，大腸桿菌K12株比大腸桿菌X1776株保存期長。 所以菌株首先應劃平板分離單個菌落，經(jīng)擴增后再做抗藥性等鑒定，然后應用或保存。保存一般用對數(shù)生長后期的細菌。根據(jù)不同需要做短期、中期或長期保存。2. 菌株的保存- 精品- LB瓊脂平板劃線，37，倒置平板培養(yǎng)(16-24hr)，形成單一菌落后，用石臘紙(parafilm)將平皿四周封嚴(使平皿隔絕空氣)，倒置放入4或-20冰箱中，可

3、保存數(shù)周。 E. coli菌株的生存期差別大：有些菌株在液體培養(yǎng)基中，4能存活幾個月。有些菌株只能活幾天。 穿刺瓊脂(stab agar)，室溫，避光可保存數(shù)年。 冰凍：單一菌落，液體培養(yǎng)基中擴增后，稀釋后倒入10-50%甘油培養(yǎng)基中，分裝，置-20 -70?？山?jīng)過30次凍融，細菌仍然存活。 菌LB中過液培養(yǎng)，加入等體積2冰凍培養(yǎng)基。液氮速凍后置-70，可經(jīng)15次凍融，保存5年以上。具體保存方法：- 精品-瓊脂穿刺培養(yǎng)基 2冰凍培養(yǎng)基 瓊脂（Difco） 6g K2HPO4 12.6g細菌胰蛋白胨（Difco） 10gN+-檸檬酸 0.19g NaCl 8gMgSO4H2O 0.18g HCl

4、 20mg(NH4)2SO4 1.8g ddH2O 至1LKH2PO4 3.6g 甘油 88g dH2O 至1L 菌株保存液的配制- 精品-高壓滅菌 Phagemid -20 Enzyme -20 Buffers -20 Primer -4 Thiodeyivatives -20 Ribonucleotides-20 Helper phage -4 置于20或80，并一個月檢查一次 - 精品-抗生素工作濃度 松馳型質(zhì)粒 嚴緊型質(zhì)粒 氨芐青霉素(Amp) 50mg/mL（水） 60ug/mL20ug/mL 氯霉素(Cm) 34mg/mL（乙醇）170ug/mL 25ug/mL 卡那霉素(Kan)

5、 50ug/mL（水）50ug/mL10ug/mL 鏈霉素(Sm) 10mg/mL（水）50ug/mL10ug/mL 四環(huán)素(Tc) 5mg/mL（乙醇） 50ug/mL10ug/mL抗生素的配制- 精品-大腸桿菌感受態(tài)細胞制備和貯存 在基因工程研究過程中，常常需要將外源DNA與載體DNA連接，重組后，導入大腸桿菌受體細胞中，進行DNA復制，擴增或表達，噬菌體單鏈或雙鏈DNA導入大腸桿菌宿主菌中復制擴增。但很久以前人們就試圖將DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌但都沒有成功。因此長期以來人們一直認為大腸桿菌缺乏天然的轉(zhuǎn)化機理。1970年M. Mandela 和A. Higa提出，在轉(zhuǎn)化DNA之前，預先用氯化鈣溶

6、液處理大腸桿菌，能夠人為地誘導這些大腸桿菌細胞呈現(xiàn)感受態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。從而提高重組DNA轉(zhuǎn)化入大腸桿菌的轉(zhuǎn)化頻率。目前對這種機制尚不清楚。 - 精品-感受態(tài)細胞(Compenent cells)：將質(zhì)粒DNA或重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化到宿主菌中之前，必須使細菌呈感受狀，即有能力攝取DNA的狀態(tài)。(主要介紹用氯化鈣溶液處理大腸桿菌制備感受態(tài)細胞的方法) 取出大腸桿菌HB101菌種管劃LB瓊脂平板，-70保存，37過夜(一般16小時)。 取一個菌落接種于35mlLB培養(yǎng)管中，37振 培養(yǎng)，過夜(816小時)。 取出1mL過液菌加入新鮮配制的LB培養(yǎng)液50mL中(2%接種量)。37振蕩培養(yǎng)，2

7、4小時。測定光密度值(約5107個細胞/mL)，OD550達0.30.5。注意：不同的大腸桿菌菌株，每mL培養(yǎng)物中細菌存活數(shù)與光密度值間關(guān)系不同。 HB101，OD600=0.5（約107個細胞/mL） X1776，OD600=0.2（約107個細胞/mL）- 精品- 細菌培養(yǎng)管取出置水浴中，1015分鐘。 細菌移入預冷的離心管中，44000GSA轉(zhuǎn)頭，轉(zhuǎn)離心5分鐘；棄上清，留沉淀置于冰浴中。 加0.1mol/L CaCl2(預冷)溶液25mL，將沉淀充分懸浮，置冰浴中2030分鐘。延長CaCl2處理時間，可增加感受態(tài)，所以也可在0過夜。 4，40002500rpm轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，留沉淀

8、，置冰浴中。 用預冷的0.1mol/L CaCl2溶液2.5mL，小心輕輕懸浮沉淀，4過夜?？芍苯邮褂?。 次日加20%(最終濃度)滅菌預冷甘油。 分裝成每Eppendorf管200uL。 新鮮感受態(tài)細胞用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化最好。但新鮮感受態(tài)細胞0 4貯存不超過3天。長期保存，必須將細胞在-70干冰或液氮氣體部分速凍5分鐘，再置于-80冰箱中保存，一般可保存1年。- 精品- CaCl2處理4，0.1M低滲CaCl2處理使細菌表面的細胞壁結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，即局部失去細胞壁或局部溶解細胞壁，俗稱“打孔”，使DNA分子能夠進入細胞內(nèi)。 CaCl2處理使感受態(tài)細胞的表面形成一種能接受DNA的酶位點，使DNA分

9、子能進入細胞。在細菌中能發(fā)展為感受態(tài)細胞占極小數(shù)，只有感受態(tài)的細胞才能穩(wěn)定的攝取外來DNA分子。保持感受態(tài)的時間約12天，一般出現(xiàn)在生長對數(shù)期的后期。兩種假設(shè)：- 精品-5 . DNA轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 抗生素 抽濾除菌并均置 -20保存?？股夭荒蜔?，在加入到瓊脂板中時，應等瓊脂冷至4850時再加入抗生素 Mg+是四環(huán)素拮抗物， 需加MgCl2時改加NaCl(6g/L) 四環(huán)素光敏感應避光保存（1）抗性瓊脂板中抗生素的配制- 精品- 感受態(tài)細胞新鮮配制的或從-80凍存取出后置于冰水中融化。 取出分裝到Eppendorf管中，每管100200uL。 加入需轉(zhuǎn)化的DNA溶液25ul充分混勻(15ug

10、/mLDNA)。 冰水中放置30分鐘。 37或42水浴2分鐘。(熱休克) 冰浴2min。 每管再加入1mL LB培養(yǎng)基，37振蕩培養(yǎng)1小時。 取出后稍加離心，去掉部分上清，留500uL或250mLLB則全部鋪板。（2） 轉(zhuǎn)化步驟- 精品- 取100200uL，置于有選擇性標記的瓊脂培養(yǎng)皿上，用無菌玻璃棒涂勻；靜置510分鐘。 倒置37培養(yǎng)1218小時(一般過夜)；次日，挑選單菌落，擴增，提取DNA酶切，電泳檢測，篩選重組子。 并設(shè)下列對照：A不加需轉(zhuǎn)化的DNA溶液（用蒸餾水或LB培養(yǎng)基代替）。B用普通LB瓊脂平板代替有選擇性標記的瓊脂平板。 DNA超螺旋轉(zhuǎn)化最好 DNA環(huán)狀 次之 DNA線狀

11、有干擾作用 1ug pBR322DNA轉(zhuǎn)化入HB101可得：5106/2107轉(zhuǎn)化子。 DNA分子量小比分了量大的轉(zhuǎn)化率高，一般不超過10kb，最高限為15kb。一般1ug DNA可得51071108個轉(zhuǎn)化菌。- 精品-（3）注意事項 宿主菌取出時應注意菌株名及編號。 檢查宿主菌，應無質(zhì)粒污染，無抗菌素抗性。 整個操作過程應保持無菌狀態(tài)。 LB培養(yǎng)液中不能有抗生素。 不同受體菌，培養(yǎng)要求不同。如 K802株，OD550=0.5 最好，而X1776株，OD550=0.20.3最好。 質(zhì)粒的DNA比較小，有助于其轉(zhuǎn)于宿主細胞中的效率。轉(zhuǎn)化效率與質(zhì)粒大小成反比。而質(zhì)粒大于15kb時，轉(zhuǎn)化率成為限制因

12、素。同時質(zhì)粒大，復制的拷貝數(shù)低。- 精品-（4）質(zhì)粒的三種構(gòu)型 超螺旋閉合環(huán)狀DNA，cccDNA。 開環(huán)DNA，至少一股DNA上有缺口，一處或多處使DNA鮮旋。 線狀DNA 瓊脂糖(Agrose)電泳可將這三種構(gòu)型的DNA分開，Agrose電泳中 cccDNA位置最前。- 精品-二、閱讀微生物的基因型符號 在描述一個微生物的品系時，最重要的事就是區(qū)分它的基因型和表現(xiàn)型。基因型說明它的遺傳決定子，這是看不見的特性；而表現(xiàn)型反映的是可觀察到的特性。 1由于一個微生物的基因組中有成百個基因。因此，一般而言，在描述一個品系的基因型時只給出它與野生型有所不同的等位基因，而不必一一描述那些與野生型相同的

13、基因。也就是說，在它們名稱后面所給出的是這些品系的基因組中發(fā)生了突變的基因。如：某菌，trp、his和metA，是表示它的trp、his和metA基因座是突變了的，其他基因組仍然正常。在上下文貫通地具體描述微生物的某個基因 (如trp) 時，可以用trp+，或者只是簡單地用“+”表示它的野生型品系，而不必在每次提到它時都寫作trp+。有些突變型是缺失突變，就用表示，如lon表示lon基因的缺失突變。- 精品- 2有些細菌中有附加體或者其他特殊的傳導噬菌體。最常見的是性因子F。細菌中有F因子的描述為F+；沒有的為F-。有些F因子上面帶有細菌的某些基因，這樣的F因子寫作F，它所帶基因的描述方法同上

14、。例如Flac+，proA+，B+表示F因子上面帶有細菌的lac和proA，B基因。又如，F(xiàn)lacZ，proA+，B+表示F因子上面帶有l(wèi)ac和proA，B基因，但是，其中的Z基因是突變的基因。 3校正基因(sup)座位的描述常常令人眼花繚亂。因為野生型品系雖然不帶有校正基因，它的基因型卻理所當然地應當寫作sup+，表現(xiàn)型則應該寫為Sup-。可是，帶有sup基因的突變型品系的基因型必需寫為sup-或者sup，它的表現(xiàn)型是Sup+。也就是說，字面上的概念與實際上的情況正好倒了一個個兒。因此，在閱讀它時要特別小心，以免搞錯。此外，在談到特殊的校正基因時，它的表現(xiàn)型常用數(shù)字來表示，如Sul；但是，它

15、的基因型卻用字母來表示supD。鑒于這種情況，有人建議對校正基因野生型(Su-)的品系干脆不用任何符號，只標出突變型品系(Su+)的特殊基因座位符號，如supD和supE等。 - 精品- JM83，F(xiàn)-，ara，(lac-proAB)，rpsL，80d，lacZ M15是這樣一個品系：不帶F因子，ara基因座突變(因此不能代謝阿拉伯糖)，lac操縱子缺失(因此不能利用乳糖)，30S核糖體的S12亞基突變(因此有鏈霉素抗生)，-D-半乳糖苷酶基因部分缺失(因此在含X-gal的平板中有-互補作用。如果將克隆的pUC質(zhì)粒的重組DNA轉(zhuǎn)化入這個細菌，就可以通過藍/白菌斑來篩選出轉(zhuǎn)化子)。 野生的大腸桿

16、菌具有大約4700kbp的DNA分子，上面有約2800個基因。當這些基因中有突然變異發(fā)生時，基因產(chǎn)物隨之變化，并且有可能給大腸桿菌帶來可以觀察到的變化。這種能夠觀察到的特征叫做大腸桿菌的表現(xiàn)型(Phenotype)，而把基因的構(gòu)成叫做大腸桿菌的基因型(Genotype)。試舉一例來說明上述概念：- 精品- 通常情況下，基因工程中使用的大腸桿菌的基因型只有在基因發(fā)生變異，表現(xiàn)型發(fā)生變化時才被表示。但是需要特別的表示時，則在野生的基因型上加“+”，在變異的基因型上加“-”以示區(qū)別。表示方法是用基因產(chǎn)物或其作用的名稱的三個斜體字素表示(如 DNA Aednine methylase-dam)。如果不

17、同的基因變導致相同的作用結(jié)果，則加上一個大寫字母(如Recombination- recA、recB、recC)。 某個基因或者是某領(lǐng)域缺失時，在基因型前向加上“”表示，如“從lac到proAB基因缺失時表示為(lac-proAB)。 野生的大腸桿菌本來還有具有F因子等的質(zhì)粒DNA，并且感染噬菌體。把被野生的大腸桿菌感染的噬菌體特稱為原噬菌體(Prophage)，例如 e14。一般當這些質(zhì)?；蛟删w缺失或變異時也用“()”或“/”等加以區(qū)別表示。- 精品-表現(xiàn)型是用羅馬字母體表示(第一個字母大寫)。一般通過變異而獲得了能夠觀察到的抗藥性或者活性表達等特征時，用“+”表示(Steptomyci

18、n抗性：Str+)；相反地當成為藥物敏感性或者活性喪失時，用“-”表示(Ampicillin敏感性：Amp-)?；蛐捅憩F(xiàn)容易混淆，使用時注意。 *基因工程中經(jīng)常使用的大腸桿菌幾乎都來自于K-12菌株，最近也常使用由B株及C株來源的大腸桿菌。 *大腸桿菌B株原來就為lon-，另外MV1184株不具有琥柏抑制基因(Amber suppressor free)，由于這些都是原始菌株所不具備的基因，因此不在基因型中加以表示，要注意。- 精品- supE (suppressor) 抑制基因 supE變異時，即使存在終止密碼UAG，此處也會插入谷氨酰胺 (Glutamine) ，從而可使蛋白質(zhì)繼續(xù)合成。

19、 supF (suppressor) 抑制基因 supF變異時，即使存在終止密碼子UAG，此處也會插入酪氨酸 (Tyrosine) ，從而可使蛋白質(zhì)繼續(xù)合成。停止密碼回復- 精品- recA (recombination) 重組 相同的DNA重組活性缺失 由于導入DNA與宿主DNA的重組受到阻害，可以保持插入DNA的穩(wěn)定性。與recA13宿主菌相比，recA1宿主菌能夠使插入DNA穩(wěn)定存在。 recB，C (recombination) 重組 內(nèi)切核酸酶V變異。 抑制重組并能影響放射線損傷的修復。 traD (transmissibility) 遺傳穩(wěn)定性 在質(zhì)粒F因子內(nèi)部，與大腸桿菌的結(jié)合有

20、關(guān)。 TraD變異后，F(xiàn)因子自身的傳遞能力顯著下降。重組機能缺失- 精品- dam (DNA adenine methylase) DNA腺嘌呤甲基化酶 宿主菌來源的腺嘌呤甲化酶 (GmATC) 缺失 dcm (DNA cytsine methylase) DNA胞嘧啶甲基化酶 宿主菌來源的胞嘧啶甲基化酶（CmCWGG）缺失 hsdR (host specificity defective) 宿主特異性缺陷 宿主菌來源的I型限制酶Ecok (或EcoB) 的切斷部位蛋白變異 轉(zhuǎn)化的外源DNA不被限制酶EcoK切斷，可以進行克隆 hsdM (host specificity defective)

21、 宿主菌來源的I型限制酶EcoK (或EcoB) 的甲基化酶部位蛋白變異 hsdS（host specificity defective） 宿主菌來源的I型限制酶EcoK (或EcoB) 的識別部位蛋白變變異 轉(zhuǎn)化的外源DNA不被限制酶EocK切斷，可以進行克隆對插入DNA具有直接作用因子的缺失- 精品- endA (endonuclease) 內(nèi)切核酸酶 宿主菌來源的非特異性內(nèi)切核酸酶I活性缺失，可以 提高純化的質(zhì)粒DNA的質(zhì)量。 NcrA (methylcytsine restriction) mCG序列的甲基化活性缺失。 mcrB，C (methylcytsine restriction

22、) GmC序列的甲基化活性缺失。 mrr (methylation requiring restricion) mA以及mC序列的甲基化活性缺失。- 精品- rpsL (ribosomal protein small subunit) 由30S核糖體蛋白變異而獲得鏈霉素 (Steptomycine)抗性 (Strr)。 gyrA (gyrase) 由DNA回旋酶亞基A的變異而獲得的萘啶酮酸(Nalidxic acid) 抗性 (Nalr)。 Tn5 (transposon) 轉(zhuǎn)座子變異，獲得卡那霉素 (Kanamycine) 抗性(Kmr)。 Tn10 (transposon) 轉(zhuǎn)座子變異，獲

23、得四環(huán)素（Tetracycline）抗性（Tetr）?？顾幮缘淖儺? 精品- lon (long form) 分解異型蛋白質(zhì)的ATP依賴型蛋白分解酶活性缺失。大腸桿菌B株原來就為lon-?？梢种破浔磉_的融合蛋白質(zhì)的分解。 omp (outer membrane protein) 外膜蛋白 膜結(jié)合性蛋白分解酶活性缺失。抑制表達的融合蛋白質(zhì)的分解。宿主蛋白酶缺失- 精品- lac Iq (lactose) 乳糖操縱子中控制-半乳糖苷酶表達的調(diào)節(jié)蛋白基因。由于lacIq變異，表達調(diào)節(jié)蛋白過量形成，因此從乳糖啟動子開始的轉(zhuǎn)錄過程完全受到抑制。 lacZ (lactose) -半乳糖苷酶活性缺失 lac

24、Z M15 -半乳糖苷酶蛋白的w-fragment得到表達。當與多數(shù)載體質(zhì)粒中所具有的-fragment共同存在時，可使-半乳糖苷酶的活性回復 (-互補性)。在含有X-gal的平板培養(yǎng)基上，可以通過藍白菌的差別選擇重組體。 deoR deoR變異，可以選擇性地改善大分子DNA的轉(zhuǎn)化。有利于選擇轉(zhuǎn)化體的基因- 精品- dut (dUTPase) dUTP酶 dUTP分解酶活性缺失，當dUTP分解酶存在時， dUTP不能摻入到DNA鏈中。 ung (Urasil-N-glycosylase) 尿嘧淀-N-糖苷酶 尿嘧啶-N-糖苷酶活性缺失。 當具有這種基因時，可以特異性地分解DNA含U的那條鏈。

25、mutS (mutator) 突變子 未被甲基化的新合成DNA鏈的錯配序列修復受到阻礙。有利于點突變的基因- 精品- leuB (leucine) 亮氨酸 在最小培養(yǎng)基中必須添加亮氨酸 (Leu) proAB (proline) 脯氨酸 脯氨酸代謝基因變異。在最小培養(yǎng)基中只有添加脯氨酸才能生長。用于確認JM109等大腸桿菌菌株的F因子是否脫落。 Thi-1 (thiamine) 硫胺素 硫胺素代謝基因變異，在最小培養(yǎng)基中必須添加硫胺素。菌株篩選用基因- 精品-LacZ、lac5、trpE、bio、bio256從大腸桿菌lac、trp和bio區(qū)置換而來imm80、QSR80從80噬體置換而來im

26、m434從434噬菌體置換而來imm21從21噬菌體置而來int29從29噬菌體置換而來b2、b1007、b527、b189B域的缺失突變，使att位點受破壞并因而阻止溶源化KH5280噬菌體DNA的缺失突變KH53類似于噬菌體cI區(qū)域的80噬菌體區(qū)域的缺失突變，可有效地防止溶源化KH54RexcI區(qū)域的缺失突變，可有效地防止溶源化nin5轉(zhuǎn)錄終止位點tR2的缺失突變，可使延遲早期轉(zhuǎn)錄不依賴于N基因產(chǎn)物，并且也刪除了ral基因附近的BamH I位點ninL44轉(zhuǎn)錄終止位點tR2的缺失突變，可使延遲早期轉(zhuǎn)錄不依賴于N基因產(chǎn)物，并且也刪除了ral基因附近的BamH I位點。WL113從33 240

27、位的SalI到34 500位的BamH I之間的1，3kb缺失突變，不損傷gam基因，但kil，c、ssb和ral基因被刪除。sslI1-2從第一到第二個SalI之間的0.5kb缺失突變，gam基因和部分bet基因被刪除。- 精品-續(xù) 上 表 shnd 2-3噬菌體第二與第三個Hind 之間的2.3kb缺失突變，部分b區(qū)被刪除 sxI1oXbaI酶切后經(jīng)外切核酸酶消化而造成的0.5kb缺失突變 鼠填充片段 大腸桿菌填充片段 lac操縱基因+ 腺病毒DNA在重組體中將被置換的載體DNA片段 Bluescript M13-重組入ZAP載體的噬菌粒，當用M13輔助噬菌體感染后，噬菌粒部分可在體內(nèi)被切

28、下。 lacY、lacZ、lacPO 、lacIq、ampr插入OPF8的lac和氨芐青霉素抗生基因 Aam、Bam、Eam、 Wam、gamam可被supE和（或）supF抑制的琥珀突變。 int amInt基因內(nèi)的BamH I位點被消除后形成的琥珀突變。 Sam7、Sam100參與溶解細菌細胞膜的一個基因內(nèi)的琥珀突變。該突變可被supF抑制，但不被supE抑制，失卻野生型S基因產(chǎn)物后，引起感染性噬菌體顆粒在細胞內(nèi)發(fā)生積累。 cIts857使cI基因產(chǎn)物對熱不穩(wěn)定的溫度敏感突變 chi促進噬菌體定向重組的特定八核苷酸序列 gamGam基因編碼大腸桿菌recBC外切核酸酶的抑制物，因此可使Q型

29、DNA復制有效地轉(zhuǎn)向滾環(huán)復制。Gam基因產(chǎn)物對于噬菌體有recA-菌株（Fec表型）和P2噬菌體溶源的recA+菌株（Spi表型）內(nèi)的生長非常重要。 exo bet (red)Exo和bet是位于噬菌體red區(qū)域的兩個基因（red表示兩個基因或任一個基因）。這兩處基因產(chǎn)物參與當從Q型DNA復制向滾環(huán)復制轉(zhuǎn)變時的重組過程。這兩個基因產(chǎn)物對于噬菌體在recA-菌株（Fec表型）和P2噬菌體溶源的recA+菌株（Spi表型）內(nèi)的生長非常重要。- 精品-常用細菌菌株 C600F-thi-1 thr leuB6 lacY1 ton21 supE44-常用于制備裂解物及增殖gt10的抑制型菌株 該菌株也叫

30、CR34 C600: HflA150 (Y1073)F-thi-1 thr leuB6 lacY1 tonA21 supE44- hflA150(chr:Tn10)host for repressing background plaques of gt10 when establishing cDNA libraries DH5F-endA1 recA1 hsdR17(rk-mk+)deoR thi-1 supE44-gyrA96 relA1host for pBR322 or other non-Puc vectorsuseful for cDNA cloning DH5F-80dlacZM

31、15(lacZYA-argF)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-mk+) deoR thi-1 supE44-gyrA96relA1host for pUC and other - complementation vectors;pBR322useful for cDNA cloning DH5FF-80dlacZ(lacZYA-argF)U169 endA1 hsdR17(rk-mk+) deoR thi-1 supE44-gryA96relA1Host for growth of M13, phagemids, or other male-specific bacter

32、iophageprovides -complementation for M13mp vectors- 精品-續(xù) 上 表 DH5F IQFproAB+lacIqZM15zzf:Tn5Kmr/ 80dlacZM15(lacZYA-ARGf)U169 andA1 recA1hsdR17(rk-mk+) deoR thi-1 supE44-gyrA96 relA1host ofr expression from the lac promotherhost for growth of M13, phagemids, or other male-specific bacteriophageprovide

33、s -complementation for M13mp vectors DH5- MCRF-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80dlacZM15(lacZYA-argF)U169 endA1 recA1 deoR thi-1supE44-gyrA96 relA1host for pUC and other - complementation vectors;pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues DH10BF-mcrA(mrr-

34、hsdRMS-mcrBC)80dlacZM15lacX74 endA1recA1 deoR (ara,leu)7697araD139 galU galK nupG rpsL-host for pUC and other - complementation vectors;pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residuesusful for plasmid rescue procedures DH10BACF-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)8

35、0dlacZM15lacX74 endA1recA1 deoR (ara,leu)7697araD139 galU galK nupG rpsL-/bmon14272/Pmon7124host for pEASTtBAC vectorsuseful for generating recombinant bacmid DNA for use in BEVS technology- 精品-續(xù) 上 表 DH10B (ZIP)F-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80dlacZM15lacX74 endA1recA1 deoR (ara,leu)7697araD139 galU galK nupG rpsLxisb ind-pZIP1(P1 ori-kanr-cre)host for ZIPLox ve