幾丁質(zhì)培養(yǎng)基制備

1、、幾丁質(zhì)分解菌的分離幾丁質(zhì)也稱殼多糖或稱甲殼素，廣泛地分布于海沙、海泥、海水、 淡水和土壤，以及吃幾丁質(zhì)的頭足類動(dòng)物的胃腸，蝦、蟹體表中.如 幾丁色色桿菌、嗜幾丁桿菌、呈色幾丁桿菌和蝕幾丁芽泡桿菌等。它 們將幾丁質(zhì)分解成中間產(chǎn)物醋酸與還原糖，最終產(chǎn)物為二氧化碳與 氨.1 .幾丁質(zhì)培養(yǎng)基制備幾丁質(zhì)的制?。合磧粜窔せ?qū)⒋蠛Ｎr殼浸泡在l%HCl中7 天，(2天換鹽酸溶液1次)脫去殼的鈣質(zhì)，使殼變得柔軟而有韌 性。然后用水洗凈外殼，剪成1X3厘米殼條。用2 %氫氧化鉀溶液浸泡殼條10天，每2天加熱一次，加熱的 溫度低于沸點(diǎn)為宜，借以除去幾丁質(zhì)以外的其他物質(zhì)，如色素和蛋白 質(zhì)等。用蒸餾水洗凈殼條上的堿，

2、然后用乙醇抽提數(shù)次.直到全部顏色 脫凈為止。這樣的幾丁質(zhì)適用于液體培養(yǎng)基培養(yǎng)未純化的細(xì)菌，和保存幾丁 質(zhì)分解菌.如用于瓊脂培養(yǎng)基中的幾丁質(zhì)，必須將這種去凈雜質(zhì)的幾丁質(zhì)研 細(xì)分散于培養(yǎng)基中.這可用去雜質(zhì)的若干幾丁質(zhì)條放于3升的瓶中， 在另一個(gè)燒瓶中準(zhǔn)備好1500毫升冷水，用100毫升5%的硫酸加到裝 幾丁質(zhì)條的燒瓶中，當(dāng)幾丁質(zhì)剛?cè)芙馔陼r(shí)，迅速加入已準(zhǔn)備好的1500 毫升冷水將酸稀釋，靜置過夜，使幾丁質(zhì)重新沉淀出來，輕輕倒出上 清液.反復(fù)離心，洗滌沉淀至使石蕊呈中性?；?qū)锥≠|(zhì)放在一個(gè)透 水的玻璃紙袋里懸掛在流水中，使酸透析完全。按1： 10，使幾丁質(zhì)重新懸浮于水中。取5毫升懸液于直徑10厘 米培

3、養(yǎng)皿時(shí)，以仍呈輕微而又清晰的乳白色為宜。將懸液分裝于試管中，每管10毫升，于121笆下滅菌15分 鐘。幾丁質(zhì)無機(jī)鹽培養(yǎng)基制備：K2HPO41.0 克MgSO4 7H2O 0.5 克NaCl海水菌用30克 淡水菌0.5克CaCl2 2H2O0.1 克FePO4 2H2O 0.001 克NHCl 1.0 克4HO 1000毫升2溶解上列無機(jī)鹽類，調(diào)pH為7. 0分裝于試管中，每管10毫升, 各管加l條去雜質(zhì)的幾丁質(zhì)條，于121笆蒸汽下滅菌15分鐘，冷后 保存待用，無機(jī)鹽瓊脂培養(yǎng)基：將上述培養(yǎng)基的無機(jī)鹽成分全部溶于 水后，加入2%的瓊脂(不加幾丁質(zhì))加熱溶解之，調(diào)pH為7.0， 分裝于試管中，分與每

4、管5毫升和10毫升的兩種，在121笆蒸汽 中滅菌15分鐘.(1)幾丁質(zhì)瓊脂培養(yǎng)基：K2HPO4 0.7 克KH2PO40.3 克MgSO4 7H2O 0.5 克FeSO4 7H2O0.01 克ZnSO40.001 克瓊脂10克蒸餾水1.0升Ph7.0以上為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以121 C蒸汽滅菌20分鐘、每100毫升 加20毫升膠體幾丁質(zhì)懸浮液和5毫克放線菌酮，或制成用于分離放 線菌的雙層平板.底層用基礎(chǔ)瓊脂和放線菌酮，上層用膠體幾丁質(zhì)培 養(yǎng)基。(2)膠體幾丁質(zhì)的制備：取凈幾丁質(zhì)15克加濃鹽酸100毫升， 于冰浴中攬拌20分鐘，離心，將上清液倒入冷蒸餾水中使再沉淀， 同時(shí)將沉淀物用濃鹽酸再行處理，如此重復(fù)數(shù)次。最后加足蒸餾水于 沉淀物中，攪拌，便成奶油狀，再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.0，分 裝入廣口瓶，每瓶20毫升121 C蒸汽下滅菌20分鐘。二將5g細(xì)粉幾丁質(zhì)溶于88ml濃鹽酸中，此幾丁質(zhì)成膠狀，在4