組織學(xué)和胚胎學(xué)的學(xué)案

1、組織學(xué)和胚胎學(xué)的學(xué)案組織學(xué)緒論Introduction of Histology第1章一、組織學(xué)研究?jī)?nèi)容和意義1 、組織學(xué)研究?jī)?nèi)容組織學(xué)：研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)和相關(guān)功能。研究水平：組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子細(xì)胞：是人體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理功能、 和生長(zhǎng)發(fā)育的基本單位。組織：細(xì)胞群細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix) 四大基本組織(basic tissue) 上皮組織(epithelial tissue) 結(jié)締組織(connective tissue) 肌 組 織(muscular tissue) 神經(jīng)組織(nerve tissue) 器官:各種基本組織按一定的規(guī)律有機(jī)地結(jié)合在一起,具有

2、一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)。系統(tǒng):功能相關(guān)的器官組成系統(tǒng),完成連續(xù)的生理過程.2.組織胚胎學(xué)與其他學(xué)科間的關(guān)系生理學(xué)病理學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)外科學(xué)從哲學(xué)角度看：洞察人體自身的微觀世界，其完美、巧妙、精細(xì)、豐富，令人嘆為觀止，能極大滿足我們求職和視覺欣賞欲望二、組織學(xué)的研究方法和技術(shù)顯微鏡的發(fā)明于16世紀(jì)末的荷蘭。1665年Hooke提出“細(xì)胞”，開創(chuàng)了用顯微鏡研究生物構(gòu)造的先河。 透射電子顯微鏡(Electron Microscope EM) 最大分辯率為0.2nm. 超微結(jié)構(gòu)顯微鏡觀察常用的長(zhǎng)度計(jì)量單位 1微米(micrometer m )=1/1000毫米(mm) 1納米(nanometer nm)=1/100

3、0微米(m) 光學(xué)顯微鏡(Light Microscope)最大分辨率為0.2m .光鏡結(jié)構(gòu)(一)普通光鏡組織標(biāo)本的制備方法1. 石蠟切片術(shù)(paraffin sectioning) 取材、固定脫水、包埋切片、染色封片 甲醛 酒精復(fù)合固定劑酒精石蠟5-10mHE特殊染色 目的:使組織切片著色,便于觀察. 常用HE染色蘇木精(hematoxylin):堿性染料 染細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)核糖體 成紫蘭色。伊 紅(eosin):酸性染料 染細(xì)胞質(zhì)及膠原纖維成粉紅色染 色染色嗜堿性(basophilia ):易被堿性染料著色嗜酸性(asidophilia):易被酸性染料著色中 性(neutrophilia)

4、:與兩種染料的親和力 都不強(qiáng)。親銀性，嗜銀性：銀染Silver staining 異染性：甲苯氨藍(lán)染色2、其他組織切片的制作方法冰凍切片：:可保存蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)取材速凍冰凍切片染色封固鋪片：疏松CT或腸系膜等涂片：體液標(biāo)本：如血液、精液、腦脊液等磨片：如牙、骨等堅(jiān)硬組織可磨成薄片骨磨片bone ground sectionsilver stain血涂片blood smearWright staining 鋪 片Stretched preparation特殊顯微鏡（1）熒光顯微鏡:(fluorescence icroscope）紫外線為光源，紫外光激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)產(chǎn)生各種顏色的熒光（2）

5、相差顯微鏡(phase contrast microscope)觀察體外培養(yǎng)的活細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)光細(xì)胞內(nèi)不同折射率結(jié)構(gòu)時(shí), 速度和方向發(fā)生變化特殊物鏡轉(zhuǎn)化為光密度差異.普通光鏡圖像相差顯微鏡圖像（3）激光共聚焦顯微鏡: (Confocal laser scanning microscope)組成:激光光源 共聚焦掃描系統(tǒng)電子光學(xué)系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)圖象分析系統(tǒng).對(duì)細(xì)胞非侵入式光學(xué)斷層掃描成像 (二維或三維分析).Practical arrangement of a confocal microscope. Light from a laser source hits the specimen and is

6、 reflected. A beam splitter directs the reflected light to a pinhole and a detector. 1932年Ruska;Knoll發(fā)明了電子顯微鏡（electron microscope)，使觀察工具的分辨率由0.2m提高到0.2nm.1.透射電鏡-transmission electron microscope TEM 分辯率為0.2nm固定包埋切片染色戊二醛、 樹脂包埋 超薄切片 醋酸鈾鋨酸雙重固定 （5080nm 厚） 檸檬酸鉛2.掃描電鏡 (scanning electron microscope SEM)(二)電

7、子顯微鏡術(shù)電鏡圖透射電鏡圖，漿細(xì)胞電鏡掃描圖掃描電鏡圖，血細(xì)胞(三)組織化學(xué)(histochemistry) 與細(xì)胞化學(xué)(cytochemistry) 組織化學(xué)術(shù)：應(yīng)用化學(xué)、物理、生物化學(xué)、免疫學(xué)或分子生物學(xué)的原理和技術(shù)與組織學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的技術(shù)，能在組織切片定位、定性、定量地顯示某種物質(zhì)的存在與否、以及分布狀況。 細(xì)胞化學(xué)術(shù)：應(yīng)用于游離細(xì)胞的樣品。 1.一般組織化學(xué) 在切片上加某種試劑，與組織中的待檢物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，在原位形成有色沉淀物。例：顯示糖原或蛋白多糖的 過碘酸-雪夫氏反應(yīng)(PAS反應(yīng)) （periodic acid Schiff reaction) 多 糖 + HIO4多醛

8、+ Shiff試劑 （乙二醇基) (乙二醛基） 紫紅色沉淀物 PAS貓小腸上皮的PAS 染色(immunocytochemistry）定義:利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)及膜表面受體、抗原等大分子物質(zhì)的存在和分布。組織切片 標(biāo)記了的抗體 2.免疫組織化學(xué)抗原抗體復(fù)合物酶標(biāo)抗體鐵蛋白或膠體金標(biāo)記抗體熒光素標(biāo)記的抗體抗原核酸分子雜交技術(shù) 是通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)基因(DNA)的有無,及在轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)基因的活性(mRNA),原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá). 利用帶有標(biāo)記物的已知鹼基順序的核酸探針與細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸按鹼基配對(duì)的原則進(jìn)行特異性原位結(jié)合雜交3.原位雜交（in situ hybridization）(六)細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)及組織工程細(xì)胞培養(yǎng)（cell cultrue)是把從機(jī)體取的得的細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)（in vitro).組織工程（ti