大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的制備

1、大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解細(xì)菌生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)及測(cè)定原理；2學(xué)習(xí)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。二、基本原理將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中， 在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，定時(shí)測(cè)定培養(yǎng)液中的菌量，以菌 量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長(zhǎng) 曲線。它反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng) 時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長(zhǎng)規(guī)律。依據(jù)其生長(zhǎng)速率的不同，一般 可把生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四 個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而 有所改變。因此通過(guò)測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線，可了解各菌的 生長(zhǎng)規(guī)律，對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。測(cè)定微生物

2、的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實(shí)驗(yàn)室 條件選用。本實(shí)驗(yàn)采用比濁法測(cè)定，由于細(xì)菌懸液的濃度與 光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸 液的光密度來(lái)推知菌液的濃度，并將所測(cè)的OD值與其對(duì)應(yīng) 的培養(yǎng)時(shí)間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長(zhǎng)曲線， 此法快捷、簡(jiǎn)便。三、器材1菌種：大腸桿菌2培養(yǎng)基：LB培養(yǎng)基（蛋白胨10g酵母膏5g Nacl 10g pH7.07.2）3儀器和器具：721分光光度計(jì)，比色杯，恒溫?fù)u床，無(wú)菌 吸管，試管，三角瓶。四、方法與步驟1種子液制備取大腸桿菌斜面菌種1支，以無(wú)菌操作挑取1環(huán)菌苔， 接入LB培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)18h作種子培養(yǎng)液。2標(biāo)記編號(hào)取11支無(wú)

3、菌試管，分別編號(hào)為0、1.5、3、4、6、8、 10、12、14、16、20h。3接種培養(yǎng)吸取2.5ml種子液加入裝有60mlLB培養(yǎng)基的錐形瓶 中，混勻。分別取5ml加入到11根試管，于37C下振蕩 培養(yǎng)。然后分別按對(duì)應(yīng)時(shí)間將試管取出，立即放冰箱中貯存, 待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)一同測(cè)定OD值。4生長(zhǎng)量測(cè)定將未接種的LB培養(yǎng)基傾倒入比色杯中，選用600nm 波長(zhǎng)分光光度計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)，作為空白對(duì)照，并對(duì)不同時(shí)間 培養(yǎng)液從0h起依次進(jìn)行測(cè)定，對(duì)濃度大的菌懸液用未接種 的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其OD值在 0.10.0.65以內(nèi)，經(jīng)稀釋后測(cè)得的OD值要乘以稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實(shí)際的OD值。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1將測(cè)定的OD值填入下表:時(shí)間01.534681012141620光密度值（OD600）2以上述表格中的時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600值為縱坐標(biāo)，繪 制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。3思考：（1）用本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定微生物生長(zhǎng)曲線