動物細(xì)胞和組織培養(yǎng)

1、關(guān)于動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)第一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 動物組織細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)一、動物細(xì)胞特點動物細(xì)胞屬于真核細(xì)胞，與細(xì)菌等原核細(xì)胞比進(jìn)化程度更高，結(jié)構(gòu)、成分更復(fù)雜，功能更全面。動物細(xì)胞的連接：封閉連接：緊密連接、間壁連接 錨定連接：粘合帶與粘合斑，橋粒與半橋粒通訊連接：間隙連接，胞間連絲，化學(xué)突觸第二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3 .動物細(xì)胞的特點及生長特性動物細(xì)胞大，無細(xì)胞壁動物細(xì)胞生長緩慢，倍增時間長，易受污染需氧量少，對機械攪拌或剪切力敏感動物細(xì)胞間主要以聚集體形式存在原代細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡第三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一些不同

2、形狀的人體細(xì)胞第四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月Hepatocytes(肝)第五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 第六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月血液凝塊 第七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月白血球 巨噬細(xì)胞 纖滅癌細(xì)胞 細(xì)胞與細(xì)胞 免疫細(xì)胞第八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月樹突細(xì)胞: 第九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月嗜中性粒細(xì)胞吞噬志賀桿菌 第十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月巨核細(xì)胞 第十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月骨細(xì)胞 第十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月成骨細(xì)胞 第十三張，P

3、PT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月破骨細(xì)胞(紫色) 第十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月膠質(zhì)細(xì)胞第十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月正常衰老細(xì)胞第十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月正常衰老細(xì)胞（紅色）和死亡細(xì)胞第十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞凋亡的核變 第十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月癌癥細(xì)胞 第十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 大片自由基和被其污染至病的細(xì)胞 細(xì)胞變異，增大的癌癥細(xì)胞 第二十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月乳腺癌細(xì)胞第二十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月腦部細(xì)胞癌變

4、第二十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月由于營養(yǎng)過剩導(dǎo)致的細(xì)胞和由此導(dǎo)致死亡第二十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月病死的肌細(xì)胞 第二十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月SEM of retina of eye showing rod cells (photoreceptors）掃描電鏡的眼睛顯示視網(wǎng)膜視桿細(xì)胞第二十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月Scanning electron micrograph of a human sperm contacting a hamster egg. 第二十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月人上皮細(xì)胞培養(yǎng)

5、7 d尿路上皮細(xì)胞第二十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 第二十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞 第二十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月黑色素細(xì)胞第三十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié)動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)基本概念 一 分類:動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)： (Cell and Tissue Culture) 指的是從動物組織或細(xì)胞從體內(nèi)取出，在模擬體內(nèi)生理環(huán)境，無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下，使之生存和生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。 細(xì)胞培養(yǎng)(Cell Culture) 培養(yǎng)物是單個細(xì)胞和細(xì)胞群。 器官培養(yǎng)（Orga

6、n Culture） 培養(yǎng)的是器官的原基、器官的一部分或整個器官，使之在體外生存、生長和保持一定功能的方法。第三十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月Classification of Cell CulturesPrimary CultureCells taken directly from a tissue to a dish原代培養(yǎng)：直接取自動植體的組織或細(xì)胞的培養(yǎng)。Secondary CultureCells taken from a primary culture and passed or divided in vitro.傳代培養(yǎng)：從原代培養(yǎng)的細(xì)胞的繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)

7、。These cells have a limited number of divisions or passages. After the limit, they will undergo apoptosis.Apoptosis is programmed cell death第三十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月Contact inhibitionWhen cells contact each other, they cease their growth.Cells arrest in G0 phase of the cell cycleTransformed cells wi

8、ll continue to proliferate and pile upon each other第三十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月Primary Cultureretention of the 3D shapeoutgrowth and migration of cells第三十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞系(cell line)：原代細(xì)胞經(jīng)第一次傳代后，形成的細(xì)胞群體，即具有增殖能力，類型均勻的培養(yǎng)細(xì)胞，一般為有限細(xì)胞系。細(xì)胞株：細(xì)胞系經(jīng)過克隆或其他方法而得的單一類型的細(xì)胞群體。第三十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二 發(fā)展歷史動物細(xì)胞組

9、織培養(yǎng)的奠基人是美國生物學(xué)家哈里森，1907年蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法。1923年，法國學(xué)者卡勒爾（Carrel）設(shè)計了卡氏瓶培養(yǎng)法，擴(kuò)大了組織生存空間。 1951年， 厄爾 （Earle） 發(fā)明了體外培養(yǎng)動物細(xì)胞的人工合成培養(yǎng)基。卡瑞爾把無菌技術(shù)帶到組織培養(yǎng)中。第三十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三 動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用 a.生物制品的生產(chǎn)b.轉(zhuǎn)基因動物的培養(yǎng)c.檢測有毒物質(zhì)d.醫(yī)學(xué)研究第三十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月四 培養(yǎng)細(xì)胞按生長方式分:（一 ）貼附型細(xì)胞 （1）成纖維細(xì)胞型細(xì)胞： （2）上皮型細(xì)胞: （3）游走型細(xì)胞 （4）多形型細(xì)胞（二）非貼附型細(xì)

10、胞 (懸浮型) 但有些細(xì)胞既可貼附生長，也可懸浮生長。第三十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（一 ）貼附型細(xì)胞貼附生長是大多數(shù)細(xì)胞在體內(nèi)生長的基本存在方式。貼附型細(xì)胞在培養(yǎng)時能貼附在支技物表面生長。如羊水細(xì)胞為貼附型細(xì)胞，常表現(xiàn)為成纖維型細(xì)胞和上皮細(xì)胞生長。第三十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）成纖維細(xì)胞型細(xì)胞：長梭形或不規(guī)則，細(xì)胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長，細(xì)胞中央有卵園形核，胞質(zhì)向外伸出2-3個長短不同的突起，生長時呈放射狀、漩渦狀走向。第四十二張，PP

11、T共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月成纖維型細(xì)胞在培養(yǎng)中的細(xì)胞凡形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似時，皆可稱之為成纖維細(xì)胞。本型細(xì)胞由形態(tài)與體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài)相似而得名. 除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間質(zhì)起源的組織細(xì)胞常呈本類形態(tài)生長。人胚肺細(xì)胞在顯微鏡下呈現(xiàn)為典型的成纖維細(xì)胞型。第四十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月成纖維細(xì)胞第四十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 （2）上皮型細(xì)胞:此類型細(xì)胞在培養(yǎng)器皿支持物上生長具有扁平狀，細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長時彼此緊密連接成單層細(xì)胞。生長時呈膜狀移動，處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨行動。

12、起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。Hela細(xì)胞呈現(xiàn)為典型的上皮細(xì)胞型。第四十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月上皮型細(xì)胞第四十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（ 100 倍） 第四十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）游走型細(xì)胞本型細(xì)胞在支持物上散在生長，一般不連成片。細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運動，速度快且不規(guī)則。此型細(xì)胞不很穩(wěn)定，有時亦難和其它型細(xì)胞區(qū)別。在一定的條件下，由于細(xì)胞密度增大聯(lián)成片后，可呈類似多角型或成纖維細(xì)胞形態(tài)。第四十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2

13、022年6月體外培養(yǎng)的游走型細(xì)胞具有類似巨噬細(xì)胞樣的特征。主要是：單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞。第四十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月單 核 巨 噬 細(xì) 胞1、游走型細(xì)胞在支持物上分散生長，一般不連接成片、形成群落；2、細(xì)胞胞質(zhì)常伸出偽足和突起。3、生長位置不固定，呈游走和變形運動，速度快、方向不規(guī)則。4、細(xì)胞內(nèi)易出現(xiàn)色暗的吞噬性顆粒。第五十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（4）多形型細(xì)胞形態(tài)上不規(guī)則的細(xì)胞，一般分胞體和胞突兩部分,如神經(jīng)組織細(xì)胞.第五十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）非附型細(xì)胞懸浮生長細(xì)胞：血液白細(xì)胞、淋巴組織細(xì)胞、某些腫

14、瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系等。 這類細(xì)胞特點：胞體始終是球形、密度較高，培養(yǎng)效率高、易大規(guī)模生產(chǎn)。第五十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月五.影響細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征的因素 血清成分、培養(yǎng)基成分、添加成分、培養(yǎng)基的酸堿度、氣相環(huán)境、溫度等。 如,Hela細(xì)胞原本是一種上皮型癌細(xì)胞,但在過酸或過堿的條件下培養(yǎng),可以呈現(xiàn)梭形,當(dāng)酸堿度適中時又可以恢復(fù)上皮型特征。第五十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié)動物組織細(xì)胞培養(yǎng)要求一 體外培養(yǎng)特點: 大多數(shù)動物細(xì)胞要附在物體上表面生長，動物細(xì)胞培養(yǎng)對營養(yǎng)要求更嚴(yán)格，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血清。對環(huán)境適應(yīng)性差，對環(huán)境敏

15、感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。第五十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月二培養(yǎng)工具:培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)管、多孔培養(yǎng)板等。細(xì)胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主。器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。第五十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細(xì)胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位。 第五十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月三、培養(yǎng)條件細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同?！居懻摗慷嗉?xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中

16、，討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要提供哪些物質(zhì)？ 提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 提示：無菌、無毒的環(huán)境。第五十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1）恒定的溫度:37 ，維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.50.5，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。 培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39時，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-401小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-411小時，細(xì)胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42

17、1小時，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43以上1小時，細(xì)胞全部死亡。低溫下會使細(xì)胞代謝速率降低第五十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2）PH：7.2-7.當(dāng)PH低于6或高于7.6時的生長會受到影響，甚至死亡。 用來檢測PH的變化：紅色-pH7.4，橙色-pH7.0，黃色-pH6.5，藍(lán)紅色-pH7.6，紫色-pH7.8。第五十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3) 氣體：有調(diào)節(jié)PH的作用。氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)

18、時一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。第六十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月4）營養(yǎng)培養(yǎng)基： 在保證細(xì)胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細(xì)胞進(jìn)行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物及無機鹽類等。只有滿足了這些基本條件，細(xì)胞才能在體外正常存活、生長。 動物細(xì)胞的培養(yǎng)基一般分為天然、合成、無血清培養(yǎng)基幾種，此外細(xì)胞培養(yǎng)還需要一些常用的溶液。第六十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月合成培養(yǎng)基 1951年厄爾開發(fā)了供動物細(xì)胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實

19、驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。人工合成培養(yǎng)基，如109培養(yǎng)液、DMEM、199、RPMI-1640，IMEM，MEM培養(yǎng)液等。第六十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月天然培養(yǎng)基 直接采用取自動物體液或從組織中提取的成分作培養(yǎng)液，主要有血清、組織提取液、雞胚汁等。 血清是天然培養(yǎng)基中最有效和最常用的培養(yǎng)成分。它含有許多維持細(xì)胞生長繁殖和保持細(xì)胞生物學(xué)性狀不可缺少的未知成分。 使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛

20、血清最普遍。血清由于含有多種細(xì)胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞碩利增殖生長。第六十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。第六十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，氨基酸中有12種是細(xì)胞本身不合成的，必須由培養(yǎng)液提供。激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞

21、生長因子、增殖刺激因子(MSA)、類胰島素生長因子(IGFl、IGF2)等。 水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成05溶液，微酸性。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長的作用。第六十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月無血清培養(yǎng)基動物血清成分復(fù)雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細(xì)胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質(zhì)量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。 無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長有

22、效因子，激素等。第六十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月5) 細(xì)胞培養(yǎng)溶液平衡鹽水（BSS）： Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液： NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）細(xì)胞消化液: 胰蛋白酶溶液EDTA溶液膠原酶溶液第六十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月抗生素溶液：1)青、鏈霉素:每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素.2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。第六十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月6)、無污染環(huán)境培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存

23、的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。第六十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月四細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施1、實驗室設(shè)計細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計實施原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。第七十張

24、，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞培養(yǎng)實驗室1.準(zhǔn)備室2.緩沖室 準(zhǔn)備室風(fēng)淋3.培養(yǎng)室第七十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)室 專用于組織細(xì)胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣間、緩沖間、操作間。內(nèi)設(shè)超凈工作臺、培養(yǎng)箱等細(xì)胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，應(yīng)具備紫外消毒、通風(fēng)及溫控設(shè)施。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機及倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及毒好的無菌物品等第七十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月風(fēng)淋室： 風(fēng)淋室是生物潔凈室的理想配套設(shè)備，它不僅可以清除人體和物品表面附著的塵埃，減少帶入潔凈室的灰塵量，而且兼有氣閘室的功能，可防止非潔凈空氣的侵入。風(fēng)淋室

25、的板壁采用輕質(zhì)隔熱夾芯鋼板，吹淋板采用進(jìn)口不銹鋼制作，吹淋口方向可調(diào)，風(fēng)淋時間可在30-99秒間的調(diào)整。風(fēng)淋室可以配合加熱器，冬天可以加熱，溫度可調(diào)，一般控制溫度在30-35較為適宜。第七十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 超凈工作臺 也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。第七十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月CO2培養(yǎng)箱哺乳動物離體細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒足溫度下才能生存,溫差變化一般不應(yīng)超過0.5度，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有較高靈敏度。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應(yīng)一定量的CO2,一般5%即可維持培養(yǎng)液PH值穩(wěn)定。 第七十五張，PPT共九十九

26、頁，創(chuàng)作于2022年6月第七十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月冰箱細(xì)胞培養(yǎng)的冰箱應(yīng)特別注意清潔，防止污染。第七十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月水純化裝置細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。一般需要使用重蒸或三蒸水配置各種培養(yǎng)用液。 第七十八張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月過濾裝置各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進(jìn)行除菌消毒處理。微化濾膜濾器是目前應(yīng)用最廣泛的過濾裝置。第七十九張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞冷凍貯存器 細(xì)胞冷凍貯存具有經(jīng)濟(jì)、省力和較好保持細(xì)胞生物學(xué)特性的優(yōu)點，目前各實驗室主要使用液氮容器貯存細(xì)胞。第八十張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年

27、6月培養(yǎng)器皿 培養(yǎng)器皿包括各種規(guī)格的玻璃、塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿，吸管，離心管等。第八十一張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月洗刷消毒間： 烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。 分析間： 顯微鏡、計算機及打印機等。第八十二張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第八十三張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月無菌操作的要領(lǐng)由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏機體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。超凈工作臺消毒打開紫外線殺菌燈照射消毒2030分鐘，然后關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機，流入的空氣是經(jīng)過除菌板過濾的空氣，工作臺可保持無菌環(huán)境。洗手 操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一

28、定要刷洗到肘部，然后用0.2%新潔爾滅或75%的酒精棉球擦拭。第八十四張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月火焰消毒 所使用物品均應(yīng)經(jīng)過燒灼，所用瓶口等開啟或封蓋時均需迅速旋轉(zhuǎn)過火焰進(jìn)行消毒。注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過長。 燒過的用具均要待冷卻后再接觸組織細(xì)胞。 吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼,否則會燒焦形成炭膜,再用時會將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。第八十五張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月合理布局 右手使用方便的用品放右側(cè)，左手使用方便的用品放左側(cè)。 酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立,易增加落菌機會）。 吸取各種用液應(yīng)分別使用吸管，不能混用。 第八十六張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月五)、培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分析培養(yǎng)細(xì)胞隨貼附支持物形狀不同而形態(tài)各異，最常見的是貼附于平面支持物細(xì)胞。在一般光鏡下生存中的細(xì)胞是均質(zhì)而透明的，結(jié)構(gòu)不明顯。細(xì)胞在生長期常有1-2個核仁在細(xì)胞機能狀態(tài)不良時，細(xì)胞輪廓會增強，反差增大。若胞質(zhì)中時而出現(xiàn)顆粒、脂滴和腔泡等，表明細(xì)胞代謝不良。第八十七張，PPT共九十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第八十八張，PPT共九十