新編第三章-藥物的雜質(zhì)檢查醫(yī)學(xué)課件

1、第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 藥 物的雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用、或影響藥物穩(wěn)定性和療效、甚至對人體健康有害的物質(zhì)。對藥物所含雜質(zhì)進行檢查可保證用藥的安全、有效，同時也為生產(chǎn)、流通過程的質(zhì)量保證和企業(yè)考核提供參考。一、 概述二、 一般雜質(zhì)的檢查方法三、 特殊雜質(zhì)檢查方法第一節(jié) 概述 一、藥物的純度及要求：即藥物的純凈程度及要求雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素，如超過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的純度要求，就可能使藥物活性降低，毒副作用增加。對雜質(zhì)的認識：是在防治疾病的實踐中逐漸積累起來的,并隨分離檢測技術(shù)的提高進一步發(fā)現(xiàn)藥物中新的雜質(zhì)。藥物的純度是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中“檢查”項下雜質(zhì)檢查來控制，內(nèi)容：雜質(zhì)名稱、檢查項目、 檢

2、查方法、允許的限量.藥用規(guī)格純度與化學(xué)試劑純度藥用規(guī)格：符合純度要求的藥品，考慮的是對生物體引起的生理和毒副作用的雜質(zhì)化學(xué)試劑：對化學(xué)使用的目的考慮，對生物體引起的生理和毒副作用不考慮。二、雜質(zhì)的來源與種類（一）來源：1.生產(chǎn)過程引入的雜質(zhì)： 合成藥生產(chǎn)過程中：原料不純、未反應(yīng)的原料藥、反應(yīng)中間體和副產(chǎn)物在精制時未完全除去；所用試劑、溶劑、還原劑等的殘留。 藥物制成制劑過程中：可能產(chǎn)生新的雜質(zhì)（鹽酸普魯卡因注射劑在滅菌過程中，可能水解為對氨基苯甲酸） 2.儲藏過程引入的雜質(zhì)：外界條件（溫度、濕度、日光、空氣、微生物等）可導(dǎo)致藥品水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解、發(fā)霉產(chǎn)生雜質(zhì)（二）

3、雜質(zhì)的種類 按來源可分為1.一般雜質(zhì)：自然界分布廣泛、在多種藥物的生產(chǎn)和儲藏過程中容易引入的雜質(zhì)。（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等）2.特殊雜質(zhì)：特定藥物的生產(chǎn)和儲藏過程中容易引入的雜質(zhì)。（如阿司匹林中游離的水楊酸） 按毒性可分為： 1. 信號雜質(zhì):（如氯化物、硫酸鹽）本身無害，但其含量反映藥物的純度水平，如含量過多，提示藥物的生產(chǎn)工藝不合理或生產(chǎn)控制存在問題。 2. 有害雜質(zhì)：（如重金屬、砷鹽、氟化物）對人體有害，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)嚴(yán)格控制，以保證用藥安全。三、雜質(zhì)的限量1.雜質(zhì)的限量：藥物中的雜質(zhì)不可能也沒必要完全除去。在不影響藥物療效和不發(fā)生毒性的前提下，允許藥物中有一定量的

4、雜質(zhì)。藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。其檢查多數(shù)為限量檢查。2 .雜質(zhì)的限量表示：百分之幾（%）、 百萬分之幾（ppm） 雜質(zhì)的最大允許量 雜質(zhì)限量（%）= 100% 供試品量3.雜質(zhì)限量的控制方法 限量檢查： 不要求測定雜質(zhì)的含量，而只檢查其是否超過限量，常采用對照法，此外還可采用靈敏度法和比較法。 定量測定：測出雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量藥物雜質(zhì)限量的計算式 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 雜質(zhì)限量（%）= 100% 供試品量 C V L= 100% S例題 1. 對乙酰氨基酚中氯化物的檢查 取對乙酰氨基酚2.0g，加水100ml,加熱溶解后冷卻，濾過，取濾液25ml, 檢查氯化物，所發(fā)生的混濁與

5、標(biāo)準(zhǔn)氯化納溶液5.0ml（每1ml相當(dāng)于10g的Cl-）制成的對照液比較，不得更濃。問氯化物的限量是多少。 C V L= 100% S 0.015 = = 0.01% 2 103 25/1002. 葡萄糖中重金屬檢查 取葡萄糖4.0g,加水23ml溶解后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml,檢查重金屬含量，含重金屬不得過百萬分之五。問應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多少毫升（每1ml相當(dāng)于 10g的Pb）? L S 5 10-6 4.0V = = C 10 10-6 = 2.0(ml)第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法一、氯化物檢查法 (作為信號雜質(zhì)，反映 純凈程度和生產(chǎn)過程是否正常)1.原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液

6、中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉在相同條件下生成的渾濁比較，不得更大。2.方法：供試 50ml納氏比色管 （規(guī)定量供試品依法溶解+10ml稀硝 酸+水使成40ml）+硝酸銀試液1ml+水使成50ml 標(biāo)準(zhǔn) 50ml納氏比色管 （規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液+ 10ml稀硝 酸+使成40ml）+硝酸銀試液1ml+水使成50ml 5min后比較兩者濁度，供試不得超過標(biāo)準(zhǔn)。3.討論：(1). 酸性：（硝酸酸性可以避免弱酸銀鹽如碳酸鹽、磷酸鹽沉淀而干擾檢查）硝酸、酸度：加稀硝酸10ml(2). 標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉：每ml相當(dāng)10ug的CL-、濃度以50ml中含50ug-80ug的CL-（所顯

7、示梯度明顯，便于比較）.(3). 觀察前在暗處放置5min（避免單質(zhì)銀析出），黑色背景從上向下觀察、比較。4.供試品處理：(1). 供試液如不澄清：需過濾。濾紙先用含稀硝酸的水洗滌出去氯化物。(2). 供試液如帶顏色：按藥典規(guī)定的方法處理（常用內(nèi)消色法）。(3). 不溶于水的藥物：加水振搖使氯化物溶解濾去不溶物、或加熱溶解供試品、也可加稀乙醇、丙酮溶解二、硫酸鹽檢查法1.原理：藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質(zhì)中生成硫酸鋇白色沉淀，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的混濁比較，濁度不得更大2.方法：（藥典規(guī)定）供試 50ml納氏比色管 供試溶液（規(guī)定量供試品依法溶解使成40ml

8、+稀鹽酸2ml）+25%氯化鋇溶液5ml+水使成50ml 標(biāo)準(zhǔn) 50ml納氏比色管 對照溶液（規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液使成40ml +稀鹽酸2ml）+ 25%氯化鋇溶液5ml +水使成50ml 10min后比較兩者濁度，供試不得超過標(biāo)準(zhǔn)。3.討論： 酸度為50ml中含稀鹽酸2ml（酸性條件可防止碳酸鋇或磷酸鋇沉淀生成，但酸度不能過大會導(dǎo)致硫酸鋇溶解）； 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液相當(dāng)于100 ugSO4/ml4.供試品的處理(1). 供試品需要過濾：濾紙先用鹽酸的稀溶液洗滌。(2). 供試品如有色：可采用內(nèi)消色法處理三、鐵鹽檢查法鐵鹽可能會加速藥物的氧化和降解，因此要控制其含量硫氰酸鹽法（Ch.P及USP采

9、用，BP采用巰基醋酸法，這里只講硫氰酸鹽法）1.原理：鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸鹽生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，再與一定標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進行比較，顏色不得更深。 Fe3+ + 6SCN- Fe(SCN)6 3- H+2.方法：供試 50ml納氏比色管 供試溶液（規(guī)定量供試品依法溶解使成25ml+稀鹽酸4ml及過硫酸銨50mg，使成35ml+30%硫氰酸銨3ml并使成50ml）標(biāo)準(zhǔn) 50ml納氏比色管 對照溶液（規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液使成25ml+稀鹽酸4ml及過硫酸銨50mg，使成35ml+30%硫氰酸銨3ml并使成50ml） 比較兩者顏色，供試不得超過標(biāo)準(zhǔn)。3.討論（1）標(biāo)準(zhǔn)鐵

10、溶液是硫酸鐵銨配制、需加入硫酸防止鐵鹽水解。（2）鐵溶液每1ml相當(dāng)于10gFe（3）酸性：稀鹽酸、50ml溶液中含4ml為宜(防止鐵離子水解)。（4）加入過硫酸銨的目的： 氧化供試品中的二價鐵為三價 防止硫氰酸鐵分解腿色。4.供試品處理(1). 兩管色調(diào)不一致：移至分液漏斗，加正丁醇或異戊醇提取，分取醇層比色（硫氰酸鐵配位離子在醇中溶解度大，可增加顏色深度；同時可排除某些干擾物質(zhì)的影響）(2). 具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機藥物：需熾灼破壞，使鐵鹽轉(zhuǎn)變?yōu)槿趸F留于殘渣再依法檢查。四、重金屬檢查法重金屬：實驗條件下能與硫離子作用顯色的金屬離子。如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等。 （影響藥物的穩(wěn)定性與

11、安全性） 中國藥典對重金屬的檢查共收載四種方法。第一法 硫代乙銑胺法1.原理：硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5）條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物均勻混懸液，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，不得更深。CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2SH2S + Pb2+ PbS + 2H + pH3.52.方法：除另有規(guī)定外，取25ml納氏比色管兩只，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml后，加水或各藥品項下規(guī)定的溶劑稀釋使成25ml，乙管加入按各藥品項下按規(guī)定方法制成的供試液25ml；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置

12、2min，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯示的顏色與甲管比較，不得更深。3.討論(1). 適宜目視比色濃度：25ml溶液相當(dāng)加入標(biāo) 準(zhǔn)鉛溶液1-2ml（ 每1ml相當(dāng) 于10 gPb2+ ）。(2). 弱酸性：PH 3.0-3.5醋酸鹽緩沖液（硫化鉛 沉淀較完全）。(3).供試品如是強酸溶解、或用過強酸處理過：在加硫代乙酰胺試液前,應(yīng)先加氨水成呈中性再加PH 3.5醋酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)溶液酸度。4.供試品處理1.溶液如有色：（1）在對照管中加入少量稀焦糖溶液，使之與供試品顏色一致。（2）供試品加硫代乙酰胺試液后用微孔濾膜過濾，加入規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛液作對照液2.供試品如有微量高鐵鹽：高鐵氧化硫化氫析

13、出硫，產(chǎn)生渾濁干擾測定。 加入抗壞血酸0.51.0克第二法 熾灼后硫代乙銑胺法適用于在水、乙醇中難溶，或能與重金屬形成配位化合物的有機藥物。1.原理：將供試品熾灼破壞后，加硝酸加熱處理，使有機物分解、破壞完全后，再按第一法進行檢查。2.方法：3.注意事項： 熾灼溫度應(yīng)控制在500-600，溫度越高，重金屬損失越多； 熾灼殘渣加硝酸加熱后，必須蒸干、除盡氧化氮，否則亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色 含鈉鹽或氟的有機物在熾灼時能腐蝕瓷坩堝而引入重金屬，改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。第三法 硫化鈉適用于難溶于稀酸而溶于堿性水溶液的藥物。1. 原理：堿性介質(zhì)中，硫化鈉為顯色劑，使Pb2+生成PbS微粒

14、的混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理后所呈顏色比較，不得更深。2. 方法：第四法、微孔濾膜法 適用于重金屬含量低的藥物 1. 原理：使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理產(chǎn)生的色斑比較，確定重金屬是否超標(biāo)。2. 裝置：2. 方法：4. 注意事項：供試品如有顏色或渾濁，應(yīng)進行預(yù)濾，更換濾膜，直至濾膜無污染。再制備鉛斑，檢查。五.砷鹽檢查法（一）古蔡(Gutzeit)氏法原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色砷斑，與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液比較，不得更深。裝置：醋酸鉛棉花C 導(dǎo)氣管A 砷化氫發(fā)生瓶標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備： 在A瓶中

15、 加2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 5ml鹽酸，21ml水 5ml碘化鉀試液酸性氯化亞錫試液5滴 （室溫10min）加鋅粒2g，立刻連上導(dǎo)氣管C 將A瓶置于25-40度水浴45min，取出溴化汞試紙即得。標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備： 在A瓶中 加規(guī)定量供試品溶液 5ml鹽酸，21ml水 （照標(biāo)準(zhǔn)的步驟）注意事項：1.標(biāo)準(zhǔn)液 三氧化二砷配制儲備液，臨用前取儲備液新鮮制備標(biāo)準(zhǔn)砷溶液，每1ml標(biāo)液相當(dāng)于1g的As2.加入試劑的作用：氯化亞錫與碘化鉀還原五價砷為三價，提高生成砷化氫速度；氯化亞錫與碘化鉀抑制銻化氫生成，排除干擾；醋酸鉛棉花吸收產(chǎn)生的硫化氫氣體，排除干擾。供試品處理 1. 若是硫化物： 會生成硫化氫，加硝酸處理，

16、氧化成硫酸鹽排除干擾。 2. 若是鐵鹽：（氧化砷化氫干擾測定） 加酸性氯化亞錫，將高價鐵離子還原為低鐵離子 3. 環(huán)狀有機藥物（砷共價結(jié)合）： 先進行有機破壞，在進行測定。（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag（DDC）法）1.原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與微量砷反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的砷化氫；砷化氫遇二乙基二硫代氨基甲酸銀，使其還原產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀，用目視比色法或在510nm處測定吸收度，在與一定量標(biāo)準(zhǔn)液用同法處理后得到的有色溶液進行比較。2.裝置與方法：方法：在砷化氫發(fā)生瓶A中，供試品溶液（或標(biāo)準(zhǔn)砷溶液）的實驗條件均同古蔡氏法，加鋅粒后立即將生成的砷化氫導(dǎo)入盛有Ag(DDC)溶液5ml

17、的D管中，將A瓶置25-40水浴中，反應(yīng)45min后，取出D管，添加氯仿至刻度線，混勻。將供試溶液D管和對照溶液D管同置白色背景，自上向下觀察比色，或在510nm波長處測定吸收值。六 溶液顏色檢查法控制有色雜質(zhì)的含量（一）目視比色法：（二）分光光度法（三）色差計法：方法：標(biāo)準(zhǔn)比色液： 比色用重鉻酸鉀、比色用氯化鈷、比色用硫酸銅液，按一定比例配制成黃綠、黃、橙黃、橙紅和棕紅五種不同色調(diào)的儲備液；再用不同量的水稀釋成10個色號標(biāo)準(zhǔn)比色液。 檢查時，取藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解，置于25ml納氏比色管中，加水稀釋至10ml,與規(guī)定色調(diào)和色號的標(biāo)準(zhǔn)比色液比較不得更深。（一）目視比色法：方法：取規(guī)

18、定量的供試品，加水溶解使成10ml，必要時過濾，濾液于規(guī)定波長處測定，吸收度不得超過規(guī)定。（二）分光光度法原理：自然界中的每種顏色都可以用紅、綠、藍三原色按適當(dāng)?shù)谋壤旌隙?。色差計的工作原理是模擬人的視覺系統(tǒng)，利用儀器內(nèi)部的模擬積分光學(xué)系統(tǒng)，把光譜光度數(shù)據(jù)的三刺激值進行進行積分而得到顏色的數(shù)學(xué)表達式，從而計算出對比色的色差。方法： 用水對儀器進行校準(zhǔn)，取按各品種項下規(guī)定方法分別制得的供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)比色液，置儀器上進行測定，供試品與水的色差值E*不得超過相應(yīng)色調(diào)的比色液與水的色差值E*o（三）色差計法：七.易炭化物檢查法檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質(zhì)（易炭化物雜質(zhì)）.取內(nèi)

19、徑一致的比色管兩只：甲管中加各品種項下規(guī)定的對照液5ml;乙管中加濃硫酸5ml后，分次緩慢加入規(guī)定量的供試品，振搖使溶解。除另有規(guī)定外，靜置15min后，將甲乙兩管同置白色背景前，平視觀察，乙管中所顯色不得較甲管更深。方法： 供試品為固體時，應(yīng)先研成細粉，以利于溶解、呈色和檢出； 需加熱才能溶解時，可取供試品與硫酸混合均勻，加熱溶解，放冷至室溫。注意事項：對照液有三類 溶液顏色檢查項下的不同色調(diào)色號標(biāo)準(zhǔn)比色液由比色用氯化鈷液，比色用重鉻酸鉀液和比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配置成的對照液高錳酸鉀八.溶液澄清度檢查法嚴(yán)查藥品溶液的渾濁程度，可以反映藥物中微量不溶性雜質(zhì)的存在情況。（特別是注射用原料）

20、Ch.P采用比濁法。 烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成不溶于水的甲醛腙白色混濁。原理：方法：室溫條件下，將用水稀釋至一定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對的比濁用玻璃管中，在濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備后5min，在暗室內(nèi)垂直同置于傘棚燈下，照度為1000Lx，從水平觀察、比較，以檢查溶液的澄清度。九.熾灼殘渣檢查法中國藥典殘渣定義：有機藥物經(jīng)炭化或揮法性無機藥物加熱分解后，高溫?zé)胱扑a(chǎn)生的非揮發(fā)性的無機雜質(zhì)的硫酸鹽。注意事項：取規(guī)定重量的供試品，置已熾濁至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾濁至完全炭化，放冷至室溫；除另有規(guī)定外，加硫酸0.5-1ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸汽除盡

21、后，在700-800熾濁使完全灰化，移至干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700-800熾濁之恒重。 殘渣及坩堝重-空坩堝中熾濁殘渣%= 100% 供試品重方法：十.干燥失重測定法指藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率計。減失的量：恒重（干燥或熾灼后稱重差異在0.3mg以下）檢查對象：主要指水分、也包括揮發(fā)性物質(zhì)。測定方法（一）常壓恒溫干燥法：適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。將供試品置于相同條件下已干燥至恒重的扁形稱量瓶中，在烘箱內(nèi)于規(guī)定溫度下干燥至恒重，由減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。（二）干燥劑干燥法：適用于受熱分解，或易于揮發(fā)的供試品方法：將供試品至于干燥器中，利用干燥

22、器內(nèi)的干燥劑吸收水分，干燥至恒重。適用于熔點低、受熱不穩(wěn)定或難驅(qū)除水分的藥物。方法：在一定溫度下，采用減壓干燥器或恒溫減壓干燥箱干燥，壓力應(yīng)控制在2.67kPa以下。（三）減壓干燥法：（四.）熱分析法 在程序控制溫度的情況下，測定物質(zhì)物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類儀器分析方法稱為熱分析法?？捎糜谒幬锏娜埸c、多晶型、純度、溶劑化物、水分及熱解產(chǎn)物的測定。.熱重分析法（TGA） 是測量物質(zhì)的質(zhì)量隨溫度變化的熱分析技術(shù)。 儀器是在程序升溫爐中的微量分析組成。十一 水分測定法費休氏法，另有甲苯法。原理：利用碘將二氧化硫氧化為三氧化硫時，需要一定量的水分參與反應(yīng)，根據(jù)消耗的碘量來測定水分。 I +SO

23、+H O 2HI+ SO 供試品中水分含量（%）=100%A 供試品消耗費氏試液的容積（ml）B 空白消耗費氏試液的容積（ml）F 每ml費氏試液相當(dāng)于水的重量（mg）費氏試液的配制：測定方法：（A-B）FW2223十二.有機溶劑殘留量測定法指合成原料藥，輔料和制劑的生產(chǎn)過程中使用的，但在生產(chǎn)工藝中未除盡的有機溶劑 2019版附錄中殘留溶劑的控制種類及限度與 人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范的國際協(xié)調(diào)會一致。按有機溶劑毒性的大小分為三類，具體名稱及限度見表3-2（p62）十二.有機溶劑殘留量測定法中國藥典2019版規(guī)定殘留溶劑采用氣相色譜法測定，可采用填充柱，也可毛細管柱 色譜系統(tǒng)應(yīng)符合：1. 理論塔板數(shù)

24、填充柱應(yīng)大于1000。毛細管柱應(yīng)大于50002. 分離度大于1.5。3.內(nèi)標(biāo)法時進樣5次、兩者的相對 標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于 5%， 外標(biāo)法時，待測物A的相對 標(biāo)準(zhǔn)偏差不應(yīng)大于10%測定方法1.填充柱采用溶液直接進樣法：2.毛細管柱采用頂空進樣法雜質(zhì)與藥物有著物理性質(zhì)的差異： 如外觀、形狀、分配和吸收以及對光的吸收等性質(zhì)上的差異雜質(zhì)與藥物有著化學(xué)性質(zhì)的差異： 兩者對某一化學(xué)反應(yīng)的差別，一般雜質(zhì)與某一試劑反應(yīng)，藥物則無。方法的選擇 利用雜質(zhì)與藥物在物理性質(zhì)與化學(xué)性質(zhì)上的差異選專屬性強的分析方法。第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法一 色譜分析法優(yōu)點：高分離效能，可有效地檢查有關(guān)物質(zhì)，廣泛用于藥物的雜質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)：

25、藥物中可能存在的的原料、中間體、降解物、異構(gòu)體、聚合體、副反應(yīng)產(chǎn)物等，這類物質(zhì)通常結(jié)構(gòu)未明。（一）薄層色譜法（TLC）雜質(zhì)對照品法 （A）供試品自身稀釋對照法（高低濃度法）（B）雜質(zhì)對造品與供試溶液自身稀釋對照法并用（C）對照藥物法（D）雜質(zhì)對照品法 （A）適用條件：已知雜質(zhì)且有雜質(zhì)對造品方法：根據(jù)雜質(zhì)限量，分別取供試品溶液及一定濃度對造品溶液，點樣、展開、斑點定位，供試品的雜質(zhì)斑點不得深于對造品斑點 樣 對A 供試品自身稀釋對照法（高低濃度法）（B）適用條件：雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不確定，無雜質(zhì)對造品方法：配制一定濃度供試品溶液，再將其稀釋至一定濃度作對造液，點樣、展開、斑點定位，供試品的雜質(zhì)斑點不得深于

26、對造品主斑點 樣 對 B 雜質(zhì)對造品與供試溶液自身稀釋對照法并用（C）適用條件：多種雜質(zhì)并存，部分雜質(zhì)有對造品方法：見課本硫酸奈替米星的有關(guān)物質(zhì)檢查。對照藥物法（D）適用條件：無雜質(zhì)對造品，或雜質(zhì)斑點與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量，用與供試品相同的藥物作對造品，其所含待測雜質(zhì)符合限量要求。方法：見馬來酸麥角新堿中有關(guān)物質(zhì)檢查（二）高效液相色譜法（HPLC）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定法 （A）外標(biāo)法測定法（B）加校正因子的主成分自身對造測定法（C）不加校正因子的主成分自身對造測定法（D）面積歸一化法內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定法適用于有對造品的雜質(zhì)校正因子測定液=雜質(zhì)對照品內(nèi)標(biāo)樣品測定液=樣品同樣的內(nèi)標(biāo)

27、 分別進樣，記錄色譜圖。C雜=fA雜/ A內(nèi)C內(nèi)A內(nèi)/C內(nèi) A雜/C雜 校正因子（f）=F=(A內(nèi)/A對)(C對/C內(nèi))C雜=F(A雜/ A內(nèi)) C內(nèi)對照樣品外標(biāo)法有雜質(zhì)對造品，進樣量可精確控制C雜= A雜/ A對C對雜質(zhì)對照品樣品加校正因子的主成分自身對照法 測定時不用雜質(zhì)對造品，建立方法時需要 方法建立： 取雜質(zhì)對照品和藥物對照品配成一定濃度的混合溶液，進行色譜分離，記錄色譜峰面積，按下式計算雜質(zhì)相對于藥物的濃度校正因子：A對/C對 A雜/C雜 校正因子（f）=將f值載入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。雜質(zhì)含量檢查： 將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限量相當(dāng)?shù)娜芤鹤鲗υ煲海⊿） 分別進樣供試品溶液(X)與對造品溶液

28、記錄X雜質(zhì)峰面積，乘上相應(yīng)的校正因子，與自身對照溶液的主成分峰面積比較，計算雜質(zhì)含量。 Ax As/Cs 濃度（Cx）= f該方法優(yōu)點：并不需要雜志對造品，消除了雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子不一導(dǎo)致的測定誤差。缺點：雜質(zhì)的定位必須采用相對保留時間不加校正因子的主成分自身對照法適用條件：無雜質(zhì)對造品的情況方法：以供試品溶液的稀釋液作為對造液。分別進樣供試品液與對造液，供試品中各雜質(zhì)的鋒面積與對造液主成分鋒面積比較，計算雜質(zhì)含量。A雜總/A自C自/取樣100%=雜質(zhì)%不加校正因子的主成分自身對照法A雜總/A自C自/取樣100%=雜質(zhì)%樣品測定液 1 2 3A雜總=A1A2A3自身對照液（1%）峰面積歸一

29、化法適用：粗略測量雜質(zhì)的含量方法：供試液，進樣，色譜分離，測定后，計算雜志峰面積總和占總峰面積的百分率A雜總/A總100%=雜% A總=A雜1A雜2A樣 雜1 雜2 樣用于測定揮發(fā)性特殊雜質(zhì)。方法與HPLC相似，不同之處有標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法標(biāo)準(zhǔn)加入法：（三）氣相色譜法（GC）根據(jù)藥物與雜質(zhì)對光的選擇性吸收性質(zhì)的差異進行藥物的雜質(zhì)檢查二 光譜分析法（一） 紫外分光光度法利用雜質(zhì)與藥物在紫外區(qū)的吸收差異，選用適當(dāng)波長進行測定。例 1 地恩酚中二羥基蒽醌的檢查，后者的氯仿溶液在432nm處有最大吸收（E=495），而樣品在該波長處幾無吸收。故規(guī)定0.01%的樣品液在432nm處吸收度不得過0.12。例

30、2 苯丙醇中苯丙酮的檢查，前者由后者還原制得。兩者吸收峰重疊，但苯丙醇的A247nm/A258nm 比值（R）與苯丙酮的含量成直線關(guān)系，控制該比值即可限制苯丙酮的量(%)。247 258 nm苯乙醇苯乙酮R%0.790.5（二） 紅外分光光度法紅外分光光度法-主要用于藥物中低效或無效晶型的檢查。一些多晶型藥物的晶型結(jié)構(gòu)不同，導(dǎo)致紅外光譜圖中某些特征帶的頻率、峰形和強度出現(xiàn)顯著差異，因此可用IR光譜法檢查低效或無效晶型。例 甲苯咪唑中A晶型的檢查晶型 640cm-1 662cm-1 A型（無效） 強 弱 C型 弱 強當(dāng)樣品中含有A晶型時，兩波長處吸收度比值發(fā)生變化。 中國藥典方法：樣品25mg和

31、含10%A晶型對照品25mg，同法操作。記錄620-803cm范圍的IR圖譜，計算兩波數(shù)處吸收度比值R=D640/D662R樣R對，則樣品中A晶型含量在10%以下662640（三） 原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法由待檢元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過供試品蒸氣時，被蒸氣中待檢元素的基態(tài)原子所吸收，測定輻射光強度減弱的程度，求出供試品中待檢元素含量，其遵守一般分光光度法的吸收定律。本法含量測定方法有：標(biāo)準(zhǔn)曲線法，標(biāo)準(zhǔn)加入法雜質(zhì)限量檢查采用如下方法：供試品溶液等量供試品待檢元素對照品對照溶液取溶液噴入火焰，調(diào)節(jié)儀器有合適讀數(shù)a同樣條件下測定溶液，記錄讀數(shù)bb=供試品中待檢元素的量（a-b）=加入的待檢元素對照品的量若 b （a-b），合格若 b （a-b），不合格藥物雜質(zhì)與藥物化學(xué)性質(zhì)相差較大時，選擇合適的試劑，使之與雜質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生顏色、沉淀、氣體，藥物不發(fā)生該反應(yīng)，從而檢查雜質(zhì)的限量。三 化學(xué)分析法雜質(zhì)與試劑產(chǎn)生沉淀例 氯化鈉中鋇鹽的檢查Ba2+ SO42- BaSO4例 洋地黃毒