大鼠皮膚痛閾測定實驗報告結(jié)果分析內(nèi)容

1、大鼠皮膚痛閾測定實驗報告結(jié)果分析1.實驗材料1.1實驗動物選用SD大鼠(SpragueDawleyrat,Inbredstrain),清潔級合格動物,體重161.63g24.92g,2月齡,雌雄各半,由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供(合格證號:川實動管質(zhì)第9號)。所有動物在實驗前適應(yīng)性馴養(yǎng)10天,進(jìn)行痛閾篩選,其標(biāo)準(zhǔn)是:痛闡測定在515s左右能引起甩尾反應(yīng)者用于實驗,凡痛閾值高于15s或低于5s者,表示動物反應(yīng)遲鈍或過敏,則不納入實驗對象。本實驗所有納入實驗動物的平均痛閾為8.15s2.58s。實驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)時間醫(yī)學(xué)測試室進(jìn)行,隔音、通風(fēng)、恒溫(221)、相對濕度60%65%、自動光暗控

2、制。所有動物均自由飲水?dāng)z食。馴養(yǎng)10天后用于實驗。1.2主要器械及儀器設(shè)備7360型疼痛甩尾痛閾測定儀(核定電壓220V,頻率50Hz,電流1.25A,UGOBASILES.R.L,BiologicalResearchApparatus,意大利)。2.實驗方法2.1動物分組及處理2.1.1動物分組實驗開始前,將經(jīng)過痛閾篩選符合實驗標(biāo)準(zhǔn)的96只大鼠分別稱重后,將痛閾和體重作為雙重選擇指標(biāo),利用SPSS12.0軟件,將動物隨機(jī)分為12組,每組8只,雌雄各半。其中每2組作為1個觀察時間點,分別于6個相應(yīng)的時間點對不同組的動物進(jìn)行相應(yīng)處理。所有動物提供8am8pm的人工光照,時間點分別為8am(ZT0

3、,ZT即zeitgebertime,12am(ZT4),4pm(ZT8),8pm(ZT12),12pm(ZT16),4am(ZT20)。每次實驗時注意控制聲、光等因素的干擾。動物適應(yīng)性馴養(yǎng)10天后,于實驗開始812點內(nèi)測定所有動物的痛閾作為基礎(chǔ)痛閾;在以上6個時間點分別對每16只大鼠進(jìn)行痛閾測定,測得值作為相應(yīng)時間點的術(shù)前痛閾;第三天進(jìn)行動物處理,每個時間點的4個組的動物的手術(shù)及痛閾測定(術(shù)后痛閾)均同時開始進(jìn)行。2.1.2動物處理每個時間點的2組動物分別作以下處理。每個時間點的動物在同一時間點同時開始進(jìn)行處理?？瞻讓φ战M(簡稱空白組):不造模,于實驗開始后與其他各組用同樣的方法、同樣的時間捆

4、綁固定。動物總的固定時間為30min.固定結(jié)束后立即測定痛閾。截肢模型組(簡稱截肢組):將大鼠固定于自制固定器上,固定10min后行截肢手術(shù),手術(shù)結(jié)束后繼續(xù)固定動物,至總固定時間滿30mn.固定結(jié)束后立即測定痛閾,測定痛閾完畢將動物放回籠內(nèi)精心飼養(yǎng)。2.1.3造模方法參照文獻(xiàn)的方法進(jìn)行:右后肢皮膚,在踝關(guān)節(jié)下約0.5mm處截斷右后肢,縫合皮膚。2.2痛閾測定方法篩選動物時,基礎(chǔ)痛閾測定在上午8-12點進(jìn)行。納入實驗的動物,分別在相應(yīng)的時間點1h內(nèi)進(jìn)行痛閾測定。測定時均在同一室溫條件下,分別在6個時間(08:00、12:00、16:00、20:00、24:00、04:00)對處理前后的動物的痛閾

5、進(jìn)行測定。測定痛閾時由固定人員測量動物甩尾反應(yīng)潛伏期,所有動物均以流水編號進(jìn)行痛閾測試。本實驗采用輻射熱甩尾法測定痛閾,每個時間點測試時,所有動物按照流水號測定一次后,再按照流水號重復(fù)測定3次、第三次,保證每只動物每次測試間隔均在10min以上。取3次測定的平均值作為痛閾。處理前后2次測定共得到兩個痛閾值,分別稱為術(shù)前痛閾和術(shù)后痛閾。以痛閾變化率作為衡量針刺抗創(chuàng)傷痛的效應(yīng)的指標(biāo)之一。痛閾變化率=(術(shù)后痛閾-術(shù)前痛閾)/術(shù)后痛閾100%.創(chuàng)傷痛大鼠痛閾的晝夜節(jié)律實驗研究。2.3統(tǒng)計學(xué)處理統(tǒng)計分析采用SPSS12.0軟件進(jìn)行,另外,所有數(shù)據(jù)還采用Halberg余弦法進(jìn)行生物節(jié)律分析。3.結(jié)果3.1

6、截肢手術(shù)前后大鼠痛閾的總體變化情況將95只納入實驗的大鼠(馴養(yǎng)過程中1只大鼠死亡),分別于實驗前、后分6個時間點測定其在相應(yīng)時間點的痛閾,計算其痛閾變化率。截肢、電針后,在相應(yīng)時間立即測定大鼠痛閾。3.2空白對照組大鼠實驗處理前后痛閾的晝夜節(jié)律變化情況對截肢手術(shù)前后空白對照組大鼠各時間點的痛閾利用Halberg余弦軟件單個余弦法程序進(jìn)行余弦函數(shù)擬合,并分別計算其P值(P0.05表示具有明顯的節(jié)律性)、中值、振幅及峰相位,結(jié)果顯示大鼠痛閾具有明顯的晝夜節(jié)律。由于空白對照組的痛閾變化率沒有明顯變化,所以不對其作節(jié)律分析。從以上圖表可以看出,空白對照組大鼠痛閾在實驗前后的24小時周期中具有明顯的晝夜

7、節(jié)律,且與實驗前的總體變化節(jié)律接近,均為白天痛閾高,夜間痛閾低,其中16點時高,0點(24點)、4點低。4.討論早在19世紀(jì),人類就已發(fā)現(xiàn)疼痛反應(yīng)具有晝夜節(jié)律性。大量的臨床和實驗研究表明,在不同的時辰,機(jī)體對疼痛的反應(yīng)性的高低并不是恒定不變的。機(jī)體的痛閾具有明顯的以24h為周期的晝夜節(jié)律,如Li G等對小鼠的痛閾研究顯示,夜間小鼠甩尾潛伏期更長(痛閾更高),且受體拮抗劑納洛酮(10mg/kg,i.p.);KochHJ等研究了13例21、27歲健康受試者在6點、12點、18點和24點4個時間點對止血帶壓迫所致疼痛的耐受性,研究顯示,24點時對壓迫性疼痛的耐受性高。而且隨著疼痛、鎮(zhèn)痛的基礎(chǔ)和臨床研究的逐漸深入,其對功能的影響也越來越受到人們的關(guān)注。手術(shù)、創(chuàng)傷等對機(jī)體造成功能的抑制已研究很多,這種疼痛及創(chuàng)傷等應(yīng)激所造成的機(jī)體抑制等效應(yīng),也具有明顯的晝夜節(jié)律特征。時間生物學(xué)研究表明,人及動物對疼痛的敏感性均存在時間節(jié)律性,而許多鎮(zhèn)痛*及鎮(zhèn)痛手段的鎮(zhèn)痛效應(yīng)也具有時間節(jié)律性,如類鎮(zhèn)痛劑夜間的鎮(zhèn)痛效應(yīng)明顯優(yōu)于白天