2022年BSLABSL生物安全實驗室病毒實驗室培訓(xùn)知識點

1、學(xué)問點大全 BSL-2/ABSL-2 生物安全試驗室 /病毒試驗室 培訓(xùn)學(xué)問點 基本要求 BSL-2 試驗室培訓(xùn) 申請人具備 3 個月以上的細(xì)胞室工作體會；能夠嚴(yán)格遵守本單位及試驗室生物安全規(guī)程；既往無不良安 全行為記錄； 特殊要求 BSL-2+ 試驗室培訓(xùn) 除中意基本要求外,仍應(yīng)具備以下條件：申請人參加過 室工作體會； 特殊要求 ABSL-2 試驗室培訓(xùn) BSL-2 試驗室培訓(xùn),并具備 3 個月以上 BSL-2 試驗 除中意 BSL-2+ 試驗培訓(xùn)要求外,仍應(yīng)具備以下條件：已取得上海市試驗動物上崗證；或參加過上海巴斯德 爭論所試驗動物上崗培訓(xùn)并考試合格 生物安全 狹義指現(xiàn)代生物技術(shù)的爭論,開

2、發(fā),應(yīng)用以及轉(zhuǎn)基因生物的跨國越境轉(zhuǎn)移可能對生物多樣性,生態(tài)環(huán)境 和人類健康產(chǎn)生潛在的不利影響；廣義指與生物有關(guān)的各種因素對社會,經(jīng)濟,人類健康及生態(tài)系統(tǒng)所產(chǎn) 生的危害或潛在風(fēng)險； 試驗室生物安全 1 防止發(fā)生病原體或毒素?zé)o意中暴露或意外釋放的防護原就,技術(shù)和行為； 2 試驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平,可防止試驗室人員,來訪人員,社區(qū)和環(huán)境受到不行接 受的損害,符合相關(guān)法規(guī),標(biāo)準(zhǔn)等對試驗室生物安全責(zé)任的要求； 生物安全 防止發(fā)生病原體或毒素?zé)o意中暴露或意外釋放的防護原就,技術(shù)和行為； 生物安全保證 單位和個人為防止病原體或毒素丟失,被竊,濫用,轉(zhuǎn)移或有意釋放而實行的安全措施； 試驗室相

3、關(guān)感染 試驗室感染主要途徑 注射器針頭或其他污染銳器意外接種；液體溢灑和噴濺到皮膚和粘膜；通過口吸移 液或用手指或污染的 物體觸摸口或眼睛從而攝入或接觸；動物咬傷和抓傷；吸入傳染性氣溶膠； 可明確感染的緣由； 80%是由工作人員操作失誤引起； 20%是由設(shè)備故障引起； 80%是不明緣由的感 染,可能為氣溶膠傳播感染； 實施試驗室生物安全治理的目的 愛惜人員和環(huán)境免受感染性生物因子的潛在暴露 試驗室生物安全治理體系目標(biāo) 保證明驗室設(shè)施,設(shè)備,個體防護裝備及相關(guān)物品符合國家有關(guān)的安全要求,定期檢查,愛惜,更新, 確保不降低其設(shè)計性能；保證明驗工作人員均可得到連續(xù)培訓(xùn)及連續(xù)訓(xùn)練；供應(yīng)必要的免疫方案,

4、定期健 康檢查和醫(yī)療保證； 治理體系文件 治理手冊,程序文件,標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程,安全手冊,記錄,標(biāo)識 第 1 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 試驗室生物安全治理員職責(zé) 針對技術(shù)方法,程序和方案,生物因子,材料和設(shè)備進行定期的內(nèi)部安全檢查；訂正違反生物安全操作規(guī) 程的行為；在發(fā)生感染性物質(zhì)泄露或其他事故時,幫忙事故處置和調(diào)查；檢查和監(jiān)督試驗室廢棄物的有效 治理與安全處置；檢查和監(jiān)督試驗室各項消毒滅菌措施的落實情形； 試驗室工作人員 充分熟識和懂得所從事工作的風(fēng)險；自覺遵守試驗室的治理規(guī)定和要求；在身體狀態(tài)許可的情形下,應(yīng)接 受試驗室的免疫方案和其他的健康治理規(guī)定；按規(guī)定正確使用設(shè)施,設(shè)備和個體防護裝備；主

5、動報告可能 不適于從事特定任務(wù)的個人狀態(tài)；不應(yīng)因人事,經(jīng)濟等任何壓力而違反治理規(guī)定；有責(zé)任和義務(wù)防止因個 人緣由造成生物安全大事或事故；假如懷疑個人受到感染,應(yīng)馬上報告；主動識別任何危險和不符合規(guī)定 的工作,并馬上報告； 風(fēng)險評估與把握 危險 可能導(dǎo)致死亡,損害或疾病,財產(chǎn)缺失,工作環(huán)境破壞或這些情形組合的根源或狀態(tài)； 風(fēng)險 危險發(fā)生的概率及其后果嚴(yán)肅性的綜合； 風(fēng)險評估 評估風(fēng)險大小及確定是否可接受的全過程； 風(fēng)險把握 為降低風(fēng)險而實行的綜合措施； 危險度分級 Risk GroupRisk GroupIndividual RiskCommunity Risk I No or LowNo or

6、 LowII ModerateLow III High Low IV High High 病原微生物分類與防護水平 第一類 能夠引起人類或者動物特殊嚴(yán)肅疾病的微生物,以及我國尚未發(fā)覺或者已經(jīng)宣布?xì)绲奈⑸铮?Smallpox 其次類 能夠引起人類或者動物嚴(yán)肅疾病,比較簡潔直接或者間接在人與人,動物與人,動物與動物間 傳播的微生物； HIV 第三類 能夠引起人類或動物疾病,一般情形下對人,動物或環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)肅危害,傳播風(fēng)險有限,實 驗室感染后很少引起嚴(yán)肅疾病,并具備有效治療和預(yù)防措施的微生物； HBV 第四類 在通常情形下不會引起人類或者動物疾病的微生物； Mouse Leukemia Vir

7、us 病毒培養(yǎng) ：指病毒的分別,培養(yǎng),滴定,中和試驗,活病毒及其蛋白純化,病毒凍干以及產(chǎn)生活病毒的重 組試驗等操作；利用活病毒或其感染細(xì)胞（或細(xì)胞提取物） 學(xué)檢測等操作視同病毒培養(yǎng)； （如大量活菌操作） 動物感染試驗 ：指以活病毒感染動物的試驗； ,不經(jīng)滅活進行的生化分析,血清學(xué)檢測,免疫 動物感染試驗未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料的操作 ：指未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在接受牢靠的方法滅活前進行的病 毒抗原檢測,血清學(xué)檢測,核酸檢測,生化分析等操作；未經(jīng)牢靠滅活或固定的人和動物組織標(biāo)本因含病 毒量較高,其操作的防護級別應(yīng)比照病毒培養(yǎng)； （樣本檢測） 滅活材料的操作 ：指感染性材料或活病毒在接受牢靠的方法滅活后

8、進行的病毒抗原檢測,血清學(xué)檢測,核 酸檢測,生化分析,分子生物學(xué)試驗等不含致病性活病毒的操作； 無感染性材料的操作 ：指針對確認(rèn)無感染性的材料的各種操作,包括但不限于無感染性的病毒 DNA 或 第 2 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 cDNA 操作；（非感染性材料的試驗） 生物安全屏障 一級屏障 即生物安全設(shè)備,包括：個體防護裝備,生物安全柜,動物隔離箱,安全離心杯 二級屏障 即試驗室設(shè)施設(shè)計和結(jié)構(gòu),包括：圍護結(jié)構(gòu),通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng),供水供氣系統(tǒng),電力供應(yīng)系統(tǒng), 照明系統(tǒng),監(jiān)控報警系統(tǒng),消毒滅菌系統(tǒng) 生物安全防護 （三要素試驗室操作技術(shù),安全設(shè)備（一級屏障） ,設(shè)施設(shè)計和結(jié)構(gòu)（二級屏障） ） 一級防護

9、通過良好的試驗室操作技術(shù),合適的生物安全設(shè)備來防止工作人員或者試驗室環(huán)境對生物因子 暴露 二 級防護 防止試驗室外部環(huán)境對生物因子暴露 Bio-safety levelBSL 表示僅從事體外操作的試驗室的相應(yīng)生物安全防護水平； Animal bio-safety level ABSL 表示包括從事動物活體操作的試驗室的相應(yīng)生物安全防護水平； BSL-1 試驗室基本防護要求 在靠近試驗室出口處設(shè)置洗手裝置； 在試驗室出口處應(yīng)設(shè)存衣或掛衣裝置, 個人服裝與工作服分開放置； 人員工作時應(yīng)穿工作服,戴手套； BSL-2 試驗室基本防護要求 符合 BSL-1 試驗室的要求；試驗室進入把握措施；在試驗室或

10、其所在建筑內(nèi)配備高壓滅菌設(shè)備；病原微 生物應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作；工作區(qū)應(yīng)配備緊急洗眼裝置；人員工作時應(yīng)穿工作服,戴手套,口罩和帽子, 以防氣溶膠污染； 1 進入把握 試驗室門口應(yīng)張貼國際通用的生物危害標(biāo)識 僅授權(quán)人員可以進入試驗室 禁止兒童進 入試驗室 試驗室門應(yīng)保持鎖閉 應(yīng)標(biāo)明 試驗室操作的微生物 人員培訓(xùn)與考核 人員健康治理 出入記錄 2 操作規(guī)范 洗手 接觸感染性物質(zhì)后和離開試驗室工作區(qū)域前 禁止在試驗室工作區(qū)域內(nèi)從事以下行為（進食,飲 水,吸煙,處理隱形眼鏡,使用化妝品,儲存食品） 移液（禁止口吸移液,必需使用機械移液裝置） 銳器處置 禁止將銳器任憑棄置于塑料,必需使用專用銳器收集容器

11、 廢物包裝袋 把握濺出和氣溶膠產(chǎn)生 去除工作臺面污染或感染性物質(zhì)濺出后 使用適當(dāng)消毒劑 3 工作完成之后 廢棄物處置 分類收集,固體液體分開；收集于防漏包裝袋和容器；使用有生物危害的紅色或黃色可高壓 蒸汽滅菌包裝袋；廢棄物應(yīng)高壓滅菌； 第 3 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 4 工作過程中 必需穿著試驗室防護服以防污染個人衣物；工作時必需戴手套以愛惜雙手暴露于危險性材料；當(dāng)手套被污 染,破舊或必要時應(yīng)更換手套；每當(dāng)操作危險性材料的工作終止時離開試驗間前,除去手套并洗手；不要 清洗或重復(fù)使用一次性手套；假如有可能發(fā)生微生物或其他有害物質(zhì)濺出,要佩戴防護眼鏡；涉及感染性 物質(zhì)的全部操作均應(yīng)在生物安全柜或

12、其它防護裝置內(nèi)進行； 離心 1 使用密封轉(zhuǎn)頭或安全離心杯 2 確定要在生物安全柜內(nèi)打開 BSL-2 試驗設(shè)施及操作規(guī)程 試驗室分區(qū) 1 試驗室防護（工作）區(qū) 試驗室的物理分區(qū),該區(qū)域內(nèi)生物風(fēng)險相對較大,需對試驗室的平面設(shè)計,圍護結(jié)構(gòu)的密閉性,氣流,以 及人員進入,個體防護等進行把握的區(qū)域； 2 核心工作間（主試驗室） 防護區(qū)中直接從事高風(fēng)險操作的工作間； 3 幫忙工作區(qū) 生物風(fēng)險相對較小的區(qū)域,也指試驗室中防護區(qū)以外的區(qū) 消毒滅菌設(shè)備 （滅菌鍋,紫外燈,過氧化氫發(fā)生裝置） 常用消毒劑 2%戊二醛, 75%乙醇,二氧化氯,含氯消毒劑（三氯異氰尿酸等） 個體防護裝備 防護服,手套（雙層） ,口罩,

13、防護帽,防護鏡,鞋套,防水圍裙套袖； 在幫忙工作區(qū)無需使用 PPE； 進入防護區(qū)時應(yīng)使用第一層 污染區(qū)中操作超速離心機和 PPE,包括：一次性鞋套,工作服,第一層乳膠手套,帽子,口罩；在半 -80 冰箱必需戴其次層乳膠手套； 在核心工作間開展病原微生物試驗活動時應(yīng)增加其次層 PPE；包括：其次層乳膠手套,一次性圍裙套 袖或反穿衣,防護鏡； PPE 脫除程序 其次層 PPE 應(yīng)在離開核心工作間時脫下； 其次層手套應(yīng)先消毒再脫下； 第一層 PPE 應(yīng)在離開防護區(qū)時脫 下；離開試驗室時應(yīng)使用流水和洗手液洗手； 運輸包裝要求 在試驗室內(nèi)和本單位內(nèi)運輸感染性物質(zhì)標(biāo)本時必需遵守雙層防護原就, 使用兩層包裝

14、系統(tǒng)； 裝載感染 性物質(zhì)標(biāo)本的內(nèi)層容器必需放到一個外層容器中,并保持內(nèi)層容器固定直立；外層容器應(yīng)防破裂,防 泄漏,并可耐受高壓滅菌和化學(xué)消毒劑作用； 對外運輸包裝要求 對外運輸感染性物質(zhì)過程中應(yīng)使用三層包裝系統(tǒng),包括內(nèi)層容器,其次層包裝 容器及外層包裝材料；裝載標(biāo)本的內(nèi)層容器必需防水,防漏并貼上指示內(nèi)容物的適當(dāng)標(biāo)簽；內(nèi)層容器 外面要包裹足量的吸取性材料,以便內(nèi)層容器打破或泄漏時能吸取溢出的全部液體； 第 4 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 儲存與使用 感染性物質(zhì)應(yīng)貯存于指定的冰箱,冰箱門應(yīng)張貼生物危險標(biāo)識； 感染性物質(zhì)的監(jiān)管實行雙人負(fù)責(zé)制,由試驗室負(fù)責(zé)人和其指定的責(zé)任人共同治理；保藏冰柜實行雙鎖管

15、理；每次存取感染性物質(zhì)必需登記； 感染性物質(zhì)的全部操作必需在級生物安全柜中進行；開放式的工 作臺上不答應(yīng)操作這類物質(zhì)； 全部涉及感染性物質(zhì)的使用過程都應(yīng)照實記錄,包括領(lǐng)取和使用的時 間,感染性物質(zhì)名稱及數(shù)量；不經(jīng) 試驗室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn),不得將感染性物質(zhì)帶出試驗室； 試驗工作終止后,未用完的感染性物質(zhì)和使用后得 到的產(chǎn)物應(yīng)按要求進行處理,銷毀或儲存,并照實填 寫試驗記錄； 試驗室內(nèi)空氣的消毒和滅菌 試驗室房間,生物安全柜,傳遞窗內(nèi)的懸吊式紫外消毒燈等對上述空間內(nèi)的空氣進行消毒,安裝數(shù)量為 平均 ,照射時間 30-60 分鐘； 甲醛熏蒸可對試驗室空氣,設(shè)備以及物體表面的微生物實現(xiàn)有效滅菌； 二氧 化氯

16、噴霧可對試驗室空氣,設(shè)備以及物體表面的微物實現(xiàn)有效消毒滅菌； 物體表面消毒滅菌 試驗室地面應(yīng)濕式拖掃,禁止干拖干掃和使用吸塵器；可使用含氯消毒液（有效氯含量 1000-2000mg/L ） 噴灑后拖掃；拖把應(yīng)專用,污染區(qū)和清潔區(qū)不得混用；應(yīng)使用可裝配吸水布或紙巾的拖把,使用后用應(yīng)將 吸水布或紙巾作為感染性廢物處理； 試驗臺面,桌子,椅子,凳子,門把手,試驗記錄夾等可用 75%乙醇噴灑擦拭,消毒作用不少于 20min； 試驗材料的表面可用 75%乙醇擦拭或噴灑消毒； 儀器設(shè)備的消毒滅菌 顯微鏡,離心機,冰箱,培養(yǎng)箱,移液器等局部輕度污染時,可用先后用 2% 戊二醛和 75%乙醇擦拭；污 染嚴(yán)肅或

17、傳染性強的,半小時后重復(fù)擦拭一次；如需整體滅菌,應(yīng)使用甲醛熏蒸或二氧化氯噴霧； 手的清潔消毒 離開 BSL-2 試驗室污染區(qū),脫防護服前應(yīng) 75%乙醇洗手消毒； 試驗室工作完畢后應(yīng)馬上進行手部清洗和消毒；接受非自動洗手設(shè)備,水龍頭開關(guān)盡量應(yīng)用長柄式,腳 踏式或感應(yīng)式；使用瓶裝式液體皂,洗手后用一次性紙巾或烘干機烘干；在無流淌水情形下,可使用含乙 醇免洗消毒洗手液； 廢棄物處置程序 分類收集 試驗室廢物應(yīng)依據(jù)其特性分別依據(jù)感染性廢物,病理性廢物, 損耗性廢物 銳器 ,化學(xué)性廢物進行分類收集；危險廢物應(yīng)使用專用容器收集；在設(shè)有分區(qū)的試驗室中,不同區(qū)域的廢物應(yīng)分開收集；試驗廢物應(yīng)收集于所在區(qū)域的廢棄

18、收集容器內(nèi)；感染性試驗廢物應(yīng)使用專用 黃色包裝袋收集,包裝袋應(yīng)置于專用硬質(zhì)收集箱桶里； BSL-2 試驗室防護區(qū)中產(chǎn)生的試驗廢物均應(yīng)視為感染性廢物；核心工作間中可使用紅色高壓滅菌袋收 集；生物安全柜中產(chǎn)生的廢物應(yīng)在生物安全柜內(nèi)消毒,收集,包裝 后移出；損耗性廢物（銳器）應(yīng)使用有蓋,耐刺破的黃色利器盒收集,并按感染性材料處置；感染性液態(tài) 廢物應(yīng)收集于試驗室內(nèi)的可密閉收集桶中, 禁止直接向下水管道中排放； 收集容器內(nèi)試驗廢物超過容量 3/4 時必需進行清理；試驗廢物應(yīng)每天至少清運一次； 消毒滅菌 感染性廢物的消毒滅菌方式包括：化學(xué)消毒,高壓滅菌,高溫焚燒； 感染性廢物收集前應(yīng)先進行化學(xué)消毒； -2

19、 試驗室感染性廢物送出試驗室前應(yīng)高壓滅菌；照試驗室不具備高壓滅菌條件,可送至清潔室高壓 第 5 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 滅菌；試驗廢物送出 BSL-2 試驗室前應(yīng)消毒包裝袋外表面； 任何需重復(fù)使用的感染性材料必需在消毒滅菌后進行清洗,修復(fù)； -2 試驗室使用過的防護服,毛巾應(yīng)高壓滅菌后再送出洗滌； -2 試驗室產(chǎn)生的含有感染性物質(zhì)的液態(tài)廢物應(yīng)使用消毒劑處理后集中收集于密閉容器；移出試驗室 前應(yīng)使用含氯消毒劑處理；處理時間應(yīng)不少于 2 小時,有效氯含量應(yīng)大于 2000mg/L ,處理過程中容器應(yīng)保 持密封； BSL-2 試驗室廢液移出試驗室前應(yīng)對容器外表面進行化學(xué)消毒 離心預(yù)備工作要求 檢查轉(zhuǎn)

20、頭或離心杯密封圈 離心管內(nèi)液體不應(yīng)過量 密閉離心管 離心管放入轉(zhuǎn)頭或離心杯前應(yīng)去除表面污染 密閉轉(zhuǎn)頭或離心杯 去除轉(zhuǎn)頭或離心杯表面 污染 使用純水或酒精作為配平液體 應(yīng)在用 于配平的離心管蓋上作標(biāo)記 離心終止后的工作要求 在生物安全柜內(nèi)打開轉(zhuǎn)頭 或離心杯 從生物安全柜內(nèi)取出轉(zhuǎn)頭或離心杯時應(yīng)去除污染 生物安全柜 操作規(guī)程 個人防護要求（在使用生物安全柜時必需穿個人防 護服,戴手 套；應(yīng)戴口罩和帽子,依據(jù)需要帶防護眼罩或者面罩； ） 柜內(nèi)物品的擺放依據(jù)從潔凈區(qū)到污染區(qū)的方向擺放；全部物品盡可能放在工作臺后部；將廢物袋,移液管 收集盤,吸濾瓶等大體積物品放在柜內(nèi)一側(cè)； 前后格柵不能被紙,儀器設(shè)備或者

21、其他物品阻擋； 紫外消毒燈 每周清潔, 除去可能影響殺菌成效的灰塵和污垢； 房間中有人時確定要關(guān)閉紫外燈, 以愛惜眼 睛和皮膚,防止因不慎暴露而造成損害； 防止明火 火焰可造成生物安全柜的氣流紊亂,干擾氣流模式；可損壞 易燃物品時易造成危險； 工作前預(yù)備 HEPA 過濾器；處理揮發(fā)性物品和 打開安全柜的日光燈和風(fēng)機；安全柜運行 15min,凈化工作區(qū)的空氣污染物；用適當(dāng)消毒劑擦拭生物安全 柜的工作臺面及內(nèi)壁以去除污染；將試驗中需使用的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應(yīng)位置上； 工作中操作 防止手臂在前開口處快速移動和頻繁進出；盡量防止污染的物品進入潔凈區(qū)；在生物安全柜內(nèi)操作時,不 能進行文字工

22、作；盡量削減操作者身后的人員活動；操作者的面部應(yīng)始終在移動檔板后面； 溢出處理 始終保持生物安全柜運轉(zhuǎn)狀態(tài),不要關(guān)閉風(fēng)機；在溢出物上掩蓋浸有消毒劑的吸水材料,保持適當(dāng)時間以 發(fā)揮消毒作用；在安全柜內(nèi)消毒污染的手套；假如防護服已被污染,也應(yīng)消毒；更換新的手套和衣服后進 行下一步的清潔工作；全部廢棄物以及防護服進行高壓滅菌；清洗手部和其它部位暴露皮膚；馬上通知實 第 6 頁,共 8 頁學(xué)問點大全 驗室相關(guān)治理人員；假如溢出物流入安全柜內(nèi),可能需要對安全柜進行完全消毒； 工作終止后處理 保持安全柜連續(xù)運行至少 5min 完成凈化； 將柜內(nèi)物品移出前, 應(yīng)使用適當(dāng)消毒劑擦拭去除表面污染； 工作 終止后

23、應(yīng)使用適當(dāng)消毒劑擦拭生物安全柜的內(nèi)壁和臺面,以去除污染；關(guān)閉前窗,關(guān)日光燈,關(guān)風(fēng)機,開 紫外消毒燈照射至少 30 分鐘； 試驗動物微生物和寄生蟲把握分級 一,分級： 1, 一般級動物 （CV ） 概念：一般級動物是指飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)中,在微生物把握上要求最低的動物,它要求不攜帶人畜共患病和 動物烈性傳染病的病原； 特點：來源于清潔動物或 SPF 動物,在開放系統(tǒng)中飼養(yǎng)；飼養(yǎng)成本低,價格廉價,可大量供應(yīng)；微生 物把握程度低,但應(yīng)排除人畜共患病和動物烈性傳染??；對試驗反應(yīng)性差； 2, 清潔動物 CL 概念：除不帶有一般級動物應(yīng)排除的病原外,仍不應(yīng)攜帶對動物危害大和對科學(xué)爭論干擾大的病原； 特點：來源于 SPF 動物或無菌動物,在屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)；較一般級動物健康,又比 SPF 動物簡潔達到 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；對試驗干擾較少,試驗重復(fù)性和敏捷性較好,是我國主要的科研用動物；