案例03的開題報(bào)告

1、輕工大學(xué)學(xué)生畢業(yè)設(shè)計(jì)（）開題表課題名稱生物源保鮮劑抑菌效果的比較研究課題類型課題來源橫向項(xiàng)目導(dǎo) 師常 超學(xué)生學(xué)號(hào)1201070517專 業(yè)食品質(zhì)量與安全立題背景目前保鮮劑行業(yè)發(fā)展的重點(diǎn)一方面是完善原有的安全防腐劑的生產(chǎn)工藝，降低生產(chǎn)成本和;另一方面大力開發(fā)高效、經(jīng)濟(jì)的新型防腐劑。人類對(duì)自身健康和環(huán)保問題認(rèn)識(shí)的不斷提高，逐漸發(fā)現(xiàn)不少化學(xué) 抗菌劑有潛在的“三致”作用，并且新型化學(xué) 抗菌防的開發(fā)越來越艱難。這使得天然安全的生物源保鮮劑越來越受到人們的青睞。其中，乳酸鏈球菌素（Nisin）和殼聚糖（Chitosan ）是比較常見的生物保鮮劑。乳酸鏈球菌素（Nisin）是由幾類乳酸乳球菌產(chǎn)生的一種小分子

2、多肽類物質(zhì)，安全無毒。而殼聚糖是由甲殼質(zhì)脫乙酰制得，不易溶于水、堿溶液或其他強(qiáng)酸例如硫酸，卻能溶于醋酸、苯甲酸等低濃度的酸溶液。課題研究意義安全性高的生物保鮮劑作為一種防腐保鮮的重要越來越受到消費(fèi)者的青睞。其中殼聚糖和nisin 是兩種非常常見的生物源保鮮劑。此項(xiàng)研究的目的在于：通過濾紙片法找出殼聚糖和乳酸鏈球菌各種供試菌的最小抑菌濃度（MIC），以及保鮮劑濃度與抑菌效果的關(guān)系，并分析比較殼聚糖和 nisin 的抑菌效果。從而為冷鮮防腐保鮮提供理論數(shù)據(jù)和依據(jù)。研究?jī)?nèi)容本文研究的主要內(nèi)容如下：分析不同保鮮劑的抗菌譜；對(duì)于同一種供試菌，分析不同保鮮劑的最小抑菌濃度；比較保鮮劑的抑菌效果；實(shí)驗(yàn)思路本

3、次實(shí)驗(yàn)為了比較分析nisin和殼聚糖對(duì)肉源菌和供試菌的抑菌效果。首先106107cfu/ml的菌懸液、保鮮劑溶液（0.05%、0.125%、0.25%、0.5%、0.8%、1%、5%、10%）以及無菌濾紙片。前者4冰箱中暫存?zhèn)溆?，后者置于紫外燈下殺?0min以上，備用。最后采用濾紙片法測(cè)定抑菌圈直徑，數(shù)據(jù)，找出最小抑菌濃度，并繪圖比較各保鮮劑的抑菌效果。實(shí)驗(yàn)方案 菌種的活化和菌懸液的 :從固體斜面培養(yǎng)基中挑取部分菌落，接種于無菌液體培養(yǎng)基中，37培養(yǎng) 1618h 得到一定濃度的菌懸液。再吸取適量菌懸液均勻涂抹在固體培養(yǎng)基表面，37倒置培養(yǎng) 24 小時(shí)。從長(zhǎng)滿菌落的培養(yǎng)基表面挑取幾個(gè)菌落于盛有

4、無菌液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，對(duì)數(shù)培養(yǎng) 1618h 后，冰箱 4暫存?zhèn)溆?。平板?jì)數(shù)該錐形瓶中的菌懸液濃度，抑菌試驗(yàn)前利用 9ml 無菌生理鹽水試管稀釋至含菌體 106107cfu/ml 的菌懸液即可。 Nisin 和殼聚糖溶液的配置:用去離子水配置一系列濃度梯度的 nisin 溶液（0.05%、 0.125%、0.25%、0.5%、0.8%、1%、5%、10%）。用無菌 1%醋酸溶解殼聚糖，配置一系列濃度梯度的殼聚糖溶液（0.05%、0.125%、0.25%、0.5%、0.8%、1%、5%、10%）。上述溶液在紫外燈下照射 30min 滅菌后備用。 濾紙片的 :用打孔器將厚濾紙打成直徑 5.5mm

5、 的圓形紙片（有缺口的棄掉），放置于玻璃 中，160烘箱中干熱滅菌 2 h 后，放置于 60烘箱，備用。 最小抑菌濃度（MIC）和抑菌圈直徑的測(cè)定:選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.05%、0.125%、0.25%、 0.5%、0.8%的保鮮劑溶液測(cè)定最小抑菌濃度。試驗(yàn)前，用棉擦拭無菌工作臺(tái)表明，并將所有試驗(yàn)操作器具放置在無菌工作臺(tái)里，紫外燈照射 30 分鐘，滅菌。將菌懸液均勻涂抹于已凝固的瓊脂培養(yǎng)基表面，蓋上，放置一旁。接著將無菌濾紙片（5.5mm）放入保鮮劑溶液中浸泡一段時(shí)間，用無菌鑷子取出，在容器壁上瀝去多余水分后（每個(gè)濾紙片的吸水量為 0.0100.015ml），放置在已涂抹菌懸液的培養(yǎng)基中，每個(gè)培

6、養(yǎng)基中放置 34 個(gè)濾紙片。用生理鹽水做空白對(duì)照。倒置培養(yǎng) 37，24h。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。數(shù)據(jù)，分析結(jié)果。實(shí)驗(yàn)進(jìn)度安排本課題從 2015 年 12 月份開始準(zhǔn)備，課題的任務(wù)的階段、內(nèi)容及時(shí)間安排如下：月 22 日3 月 4 日查閱相關(guān)資料，準(zhǔn)備開題、外文翻譯月 27 日5 月 20 日課題實(shí)施，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作月 20 日5 月 31 日撰寫月 6 日6 月 10 日答辯已具備的條件及未具備的條件分析文字資料部分校館收藏的，期刊；課題導(dǎo)師所擁有的資料； 館上的數(shù)據(jù)庫(kù)，如維普、中國(guó)期刊網(wǎng)、等。實(shí)驗(yàn)環(huán)境部分相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件，與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的設(shè)備、儀器、試劑和原料等，并會(huì)分析析實(shí)驗(yàn)結(jié)果；數(shù)據(jù)分析與處

7、理、課題的書寫與修改；指導(dǎo)老師及師兄師姐的指導(dǎo)與幫助。8. 參考文獻(xiàn)1,.生物抑菌素Nisin抑菌試驗(yàn)J.農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,9:128-1302起.Nisin 在食品防腐作用中的研究進(jìn)展J.食品研究與開發(fā),2012,33(4):233-235 3云雪霞,.乳酸鏈球菌產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的抑菌作用觀察J.中國(guó)學(xué)雜志,2006,23(6):529-5314 Guiotto A,Pozzobon M,Canevari M,etal. PEGylation of the antimicrobial peptide nisin A: problems andsJ.Farmaco,2003,58(1):45

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