微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)原創(chuàng)

1、關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)原創(chuàng)第一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞第二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一.培養(yǎng)基：1.基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)異養(yǎng)氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源

2、、能源對(duì) 不同需要，配置供生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì) 營養(yǎng)物質(zhì)“吃”什么？第四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)2.特殊營養(yǎng)：生長因子（維生素、堿基等）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無 凝固劑瓊脂分離 鑒定工業(yè) 生產(chǎn)細(xì)菌偏堿，真菌偏酸第五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方( 最廣泛)1000mlH2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g第六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月5. 配制原則目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的p

3、H值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研第七張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1、關(guān)于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是A、同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B、凡是碳源都能提供能量C、除水外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽D、無機(jī)氮源也能提供能量答案：D2、自養(yǎng)微生物和異養(yǎng)微生物最常用的碳源分別是A、CO2和CO2B、CO2和碳酸鹽C、碳酸氫鈉和含碳有機(jī)物D、CO2和含碳有機(jī)物答案：D第八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一）內(nèi)容：1、對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行 2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具、培

4、養(yǎng)基進(jìn)行 3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 附近進(jìn)行4、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免 二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染關(guān)鍵技術(shù)是什么？清潔和消毒滅菌酒精燈火焰已經(jīng)滅菌處理的材料和用具與周圍的物品接觸超凈工作臺(tái)第九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時(shí)接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法（日常）巴氏消毒法（如：牛奶）化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌（玻璃器皿）酒精、氯氣、石

5、炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染.二）消毒與滅菌的區(qū)別：第十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月芽孢 在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。煮沸3小時(shí)才死。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.第十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月孢子在生物體的一定部位產(chǎn)生一種特殊的生殖細(xì)胞叫孢子。孢子的特點(diǎn)是能直接長成新個(gè)體。 第十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月判斷是否需要消毒或滅菌,請(qǐng)選擇合適

6、的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考高壓蒸汽干熱滅菌酒精擦拭第十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體第十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月S型：菌落表面光滑，不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，有多糖莢膜，使人患肺炎或小鼠得敗血癥，有毒性。R型： 菌落表面粗糙，被免疫系統(tǒng)識(shí)別，沒有莢膜，無毒性。肺炎雙球菌光滑的粗糙的第十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配

7、方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落不斷攪拌第十六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月倒平板約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基用手摸剛不燙手第十七張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年

8、6月四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：平板劃線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）外焰冷卻試管口通過火焰冷卻第十八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月問題討論1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一步劃線前灼燒目的：消滅接種環(huán)上可能存在的微生物每次劃線前灼燒目的：殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。結(jié)束時(shí)灼燒的目的：及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，

9、避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第十九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。第二十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量 移液器

10、第二十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍注意：沾有酒精并灼燒第二十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月問題討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第二十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于

11、2022年6月平板劃線法：四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：1.接種：稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，觀察并記錄第二十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月五、課題成果評(píng)價(jià) 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基

12、上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄第二十六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月六.菌種的保藏：1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20第二十七張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3、關(guān)于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備錯(cuò)誤的是A、操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B、將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C、待培養(yǎng)基冷卻50至左右時(shí)進(jìn)行倒平板D、待平板冷卻凝固約5-10min后將平板倒過來放置 4、無菌技術(shù)包括以下幾方面的敘述，其中錯(cuò)誤的是A、對(duì)

13、實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行滅菌B、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌C、未避免周圍環(huán)境微生物的污染，實(shí)驗(yàn)室操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸答案：A答案：A第二十八張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月5下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.防止雜菌污染 B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.滅菌必須在接種前 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但

14、實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。答案：B第二十九張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：滴稀釋菌液不超過0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍第三十張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十一張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月包器材第三十二張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月包器材第三十三張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2

15、022年6月/v_show/id_XMTE2NTU5ODAw.html 微生物培養(yǎng) 教學(xué)視頻/v_show/id_XMjU4NTEwNjg4.html 微生物介紹/v_show/id_XMTQ3ODE4MzY=.html 微生物科學(xué)片/news/society/201105/edc502a8-cb2a-42b3-b8f1-29c31d3ca46a.shtml大腸桿菌 第三十四張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸桿菌大腸桿菌：是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一種細(xì)菌，周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢。分布：主要生活在大腸內(nèi)。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，生命活動(dòng)：其代謝活動(dòng)能抑制腸道內(nèi)分解蛋白質(zhì)的微生物生長，減少蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物對(duì)人體的危害，還能合成維生素b和k，以及有殺菌作用的大腸桿菌素。 第三十五張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1、分類：屬于原核生物；具有由肽聚糖組成的細(xì)胞壁，只含有核糖體簡單的細(xì)胞器，沒有細(xì)胞核有擬核；細(xì)胞質(zhì)中的質(zhì)粒常用作基因工程中的運(yùn)載體。 2、代謝類型：異養(yǎng)厭氧型 3、與人的關(guān)系：在不致病的情況下（正常狀況下），可認(rèn)為是互利共生（一般高中階段認(rèn)為是這種關(guān)系）；在致病的情況下，可認(rèn)為是寄生。 第三十六張，PPT共三十八頁，創(chuàng)作于2022年6月4、菌落：培養(yǎng)基