藥物分析學(xué)課件：第二十一章 藥品質(zhì)量控制中的現(xiàn)代分析方法的進(jìn)展

1、8/4/20221藥品質(zhì)量控制中的現(xiàn)代分析方法的進(jìn)展Modern analytical methods & techniquesin quality control of drugs第二十一章8/4/20222 現(xiàn)代分析方法與技術(shù)，為藥學(xué)的發(fā)展提供了適時(shí)而有效的手段與動(dòng)力。色譜及其聯(lián)用技術(shù)： 藥學(xué)研究分子水平。手性分析： 毛細(xì)管電泳及手性色譜技術(shù)藥物研究與質(zhì)量控制提供了保障?，F(xiàn)代光譜技術(shù)： 藥物結(jié)構(gòu)鑒定， 微量雜質(zhì)檢定。概 況8/4/20223第一節(jié) Capillary electrophoresis (CE)電泳-在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷

2、相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為電泳。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。利用電泳現(xiàn)象對某些化學(xué)或生物物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法和技術(shù)叫電泳法。動(dòng)畫18/4/20224高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上采取了兩項(xiàng)重要改進(jìn)： 一是采用了0.05mm內(nèi)徑的毛細(xì)管,； 二是采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓。高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬塊/米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬。8/4/20225分離過程 電場作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。電泳-是指在電場作用下，溶液中的帶電粒子作定向移動(dòng)的現(xiàn)象。電滲-是指在電場作用下，毛細(xì)管或固相多孔物質(zhì)內(nèi)液體沿固體表面移動(dòng)的現(xiàn)象。

3、電滲流 HPLC(塞流) (層流) 8/4/20226電滲與固液界面的雙電層有著密切的關(guān)系 在毛細(xì)管壁雙電層的擴(kuò)散層中的陽離子，相對于毛細(xì)管壁的負(fù)電荷表面，形成一個(gè)圓筒形的陽離子鞘，在電場作用下，溶劑化了的陽離子，沿滑動(dòng)面與緊密層作相對運(yùn)動(dòng)，攜帶著溶劑一起向陰極遷移，便形成了電滲流（electroosmotic flow ,EOF）。 CE所用的石英毛細(xì)管柱，在pH3時(shí)，石英毛細(xì)管壁上的硅醇基( SiOH）在水溶液中發(fā)生電離，產(chǎn)生的SiO負(fù)離子使毛細(xì)管壁內(nèi)表面帶負(fù)電，和溶液接觸時(shí)相應(yīng)的緩沖液帶正電，形成了雙電層。8/4/20227 帶電粒子的遷移速度=電泳+電滲流；兩種速度的矢量和。 正離子：

4、兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出； 中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出； 陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反。電滲流 電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時(shí)被相互分離。動(dòng)畫2動(dòng)畫38/4/20228進(jìn)樣系統(tǒng)無死體積進(jìn)樣進(jìn)樣方法電動(dòng)法，壓力法，擴(kuò)散法裝填緩沖液對毛細(xì)管進(jìn)行清洗是保持CE高效和重現(xiàn)分離 的條件之一毛細(xì)管電絕緣，紫外/可見光透明和富有彈性 塑料管，玻 璃管，石英管等。彈性熔融石英毛細(xì)管使用普遍毛細(xì)管電泳儀基本結(jié)構(gòu)8/4/202291.高壓電源（1）030 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；（

5、2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；（3）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)；（4）電壓穩(wěn)定性：0.1%；（5）電源極性易轉(zhuǎn)換；2. 毛細(xì)管柱 （1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差； （2）規(guī)格：內(nèi)徑2075m，外徑350400m；長度電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。 最基本、應(yīng)用廣的分離模式；（capillary zone electrophoresis ，CZE）毛細(xì)管區(qū)帶電泳8/4/202216分離依據(jù)： 基于試樣組分質(zhì)荷比的差異。分離對象： 特別適合分離帶電化合物，包括無機(jī)陰離子、無機(jī)陽離子、有機(jī)酸、胺類化合物、氨基酸、蛋白

6、質(zhì)等，不能分離中性化合物。（capillary zone electrophoresis ，CZE）毛細(xì)管區(qū)帶電泳8/4/202217毛細(xì)管區(qū)帶電泳的應(yīng)用8/4/2022188/4/2022198/4/2022208/4/2022218/4/2022228/4/202223二、毛細(xì)管凝膠電泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。 蛋白質(zhì)、DNA等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，

7、DAN排序的重要手段。 特點(diǎn)：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。 無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。8/4/202224 1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。三、 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 在電場力的作用下，膠束在柱中移動(dòng)。8/4/202225 2. 電泳流和電滲流的方向相反，且電滲流 電泳 ，負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng)； 5.色譜與電泳分離模式的結(jié)合。 3.中性分子

8、在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長； 4.可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍；8/4/202226 1. 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（68V）時(shí)，管內(nèi)將建立一個(gè)由陽極到陰極逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時(shí)，呈電中性，淌度為零；四、毛細(xì)管等電聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF8/4/2022

9、27 4. 聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)pH的位置時(shí)，呈電中性，停止移動(dòng)，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離； 5. 陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOH溶液； 6. 加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測； 7. 電滲流在CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。8/4/202228 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子(充滿毛細(xì)管)和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動(dòng)。 2. 負(fù)離子分析時(shí)，前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負(fù)離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。陰極進(jìn)樣，陽極檢測。五、毛

10、細(xì)管等速電泳 capillary isotachophoresis ，CITP8/4/202229 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同(=E)，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度小； 沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序1、2、3、4 電場強(qiáng)度依次增大。假設(shè)“2”號(hào)中離子擴(kuò)散到“3”號(hào)，該區(qū)電場強(qiáng)度大，離子被加速，返回到“2”區(qū)；當(dāng)“2”號(hào)中離子跑到“1”號(hào)區(qū)，離子被減速使之歸隊(duì)； 4. 特點(diǎn)：界面明顯，富集、濃縮作用；8/4/202230第二節(jié) 超高效液相色譜法（UPLC）UltraPerformance LC (UPLC ) technology starts with unique 1

11、.7 m small-particle chemistries. Chromatographers no longer need to choose between speed and resolutionwith UPLC you get both.8/4/202231超高效液相色譜法 超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography, UPLC) 綜合了小顆粒填料、非常低死體積，快速檢測手段等全新的檢測技術(shù)。 需要耐壓，穩(wěn)定的小顆粒填料，耐壓的色譜系統(tǒng)，最低交叉污染的快速進(jìn)樣器，快速檢測器及優(yōu)化系統(tǒng)體積等多方面的保障。8/4/202232UPL

12、CVan Deemter方程式說明使色譜峰擴(kuò)張而降低柱效的因素。對于分離條件的選擇具有指導(dǎo)意義?？梢哉f明填充均勻程度、載體粒度、載氣種類、載氣流速、柱溫、固定液層厚度對柱效的影響。 HAB/uC uH為塔板高度(cm)，u為載氣的線速度(cm/s)。uL/t , L為柱長(cm), t 為死時(shí)間(s)。 A：反映顆粒度和柱床填裝的優(yōu)良程度B：軸向擴(kuò)散C：傳質(zhì)8/4/202233技術(shù)耐壓，穩(wěn)定的小顆粒填料新型填料及裝填技術(shù)： 小顆粒填料的合成，粒度分布范圍窄，且需要更嚴(yán)格的篩分技術(shù)，使1.7m填料分布更窄 二代雜化有機(jī)填料耐壓的色譜系統(tǒng) 密封，高壓動(dòng)力，解決超高壓下溶劑的壓縮性和絕熱升溫最低交叉

13、污染的快速進(jìn)樣器 針內(nèi)針樣品探頭，壓力輔助進(jìn)樣，一強(qiáng)一弱的雙容積進(jìn)樣針清洗步驟快速檢測器更快的數(shù)據(jù)采集頻率，減小檢測池體積8/4/202234優(yōu)點(diǎn)1 高分離度8/4/2022352 高速度8/4/2022363 高靈敏度8/4/2022374 簡便的方法換算8/4/2022385 易與質(zhì)譜串聯(lián)8/4/202239第三節(jié) 手性HPLC技術(shù) 1 手性藥物具有不同的藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué) 2 藥物活性，毒性，副作用差別大，因此建立快速靈敏的分離和測定對映體藥物的方法十分必要。8/4/202240對小鼠鎮(zhèn)靜作用相近。R體有鎮(zhèn)靜作用，但是S-對映體對胚胎有很強(qiáng)的致畸作用。正是有了60年代的這個(gè)教訓(xùn)，所以藥物在研

14、制成功后，都要經(jīng)過嚴(yán)格的生物活性和毒性試驗(yàn)，以避免其中所含的另一種手性分子對人體的危害。8/4/202241第三節(jié) 手性HPLC技術(shù)可用于：（1 ）手性藥物純度檢查（2）體液中對映體研究，探索血藥濃度與療效關(guān)系（3）評(píng)價(jià)單個(gè)對映體效價(jià)，毒性，不良反應(yīng)，藥動(dòng)學(xué)（4）手性對映體拆分，制備8/4/202242三點(diǎn)手性識(shí)別模式手性HPLC拆分：直接法，間接法間接法-手性試劑柱前衍生（CDR法）直接法使用手性流動(dòng)相（CMP法）或手性固 定相（CSP法）拆分8/4/202243柱前衍生（CDR法）、手性流動(dòng)相（CMP法）和手性固定相（CSP法）比較：CDR應(yīng)用條件簡易，采用普通HPLC即可， 缺點(diǎn)：化合物

15、需預(yù)分離，需衍生化試劑CMP不必柱前衍生化，固定相無要求 缺點(diǎn)：添加劑不夠穩(wěn)定，可拆分的化合物有限CSP制備方便，可靠性高 缺點(diǎn)：適用性不如普通HPLC固定相廣泛8/4/202244Mass spectroscopy MSNuclear magnetic resonance spectrometry NMRX-ray diffraction methodNear infrared spectrometry NIRS現(xiàn)代光譜法及其應(yīng)用Modern spectroscopy & its application in pharmaceutical analysis8/4/2022458/4/2022

16、468/4/2022478/4/2022488/4/202249一、 質(zhì)譜分析原理8/4/202250質(zhì)譜儀需要在高真空下工作：離子源（10-3 10 -5 Pa ）質(zhì)量分析器（10 -6 Pa ）(1) 大量氧會(huì)燒壞離子源的燈絲；(2) 用作加速離子的幾千伏高壓會(huì)引起放電；(3) 引起額外的離子分子反應(yīng)，改變裂解模型，譜圖復(fù)雜化。8/4/202251電子轟擊電離 Electron Impact Ionization, EI化學(xué)離子化 Chemical Ionization, CI場電離，場解吸 Field Ionization FD, Field Desorption FD快原子轟擊 Fas

17、t Atom Bombardment, FAB基質(zhì)輔助激光解析電離 Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI電噴霧電離 Electrospray Ionization, ESI大氣壓化學(xué)電離 Atmospheric Pressure Chemical Ionization, APCI離子化的方法8/4/202252原理與結(jié)構(gòu)電離室原理與結(jié)構(gòu)儀器原理圖8/4/202253質(zhì)量分析器原理在磁場存在下，帶電離子按曲線軌跡飛行； 離心力 =向心力；m 2 / R= H0 e V曲率半徑： R= (m ) / e H0 質(zhì)譜方程式：m/e =

18、(H02 R2) / 2V離子在磁場中的軌道半徑R取決于： m/e 、 H0 、 V改變加速電壓V, 可以使不同m/e 的離子進(jìn)入檢測器。質(zhì)譜分辨率 = M / M （分辨率與選定分子質(zhì)量有關(guān)）加速后離子的動(dòng)能 :(1/2)m 2= e V = (2V)/(m/e)1/28/4/202254質(zhì)量分析器8/4/202255離子阱質(zhì)量分析器8/4/202256四極質(zhì)量分析器 四極質(zhì)譜計(jì) 8/4/202257四極桿質(zhì)量分離器8/4/202258二、儀器與結(jié)構(gòu)8/4/202259triplequadrupolemassspectrometer8/4/2022608/4/2022618/4/202262

19、8/4/202263飛行時(shí)間質(zhì)量分析器8/4/202264GC-FTIRGC-MSUPLC-MSHPLC-NMRHyphenated Techniques in Chromatography 現(xiàn)代聯(lián)用技術(shù)及其應(yīng)用HPLC-MSCE-MS+ 樣品與溶劑脫離及電離 EI ESI APCILC/MS接口 離子源質(zhì)量分析器檢測離子HPLC數(shù)據(jù)系統(tǒng)質(zhì)譜離子識(shí)別 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform +離子檢測+-+-+液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)與應(yīng)用8/4/202266離子化方式8/4/2022678/4/2022688/4/2022698/4/2022708/4/2

20、02271離子分離與測定模式8/4/2022728/4/202273Full-Scan Mass SpectrometryAdvantageProvides MW Information8/4/202274Full-Scan MS of BuspironeBuspirone (丁螺環(huán)酮)C21H31N5O2MW = 385150200250300350400450500m/z255075100Relative Abundance386408(M+H)+(M+Na)+8/4/202275Single Ion Monitoring (SIM)AdvantagesTargeted Analyte M

21、onitoringHigh Duty CycleSimpleDisadvantagesCan suffer from interferencesNot as sensitive or selective as SRM (see below)Fixed m/zPass AllPass All8/4/202276Product Ion Scanning: A Tandem MS MethodAdvantageProvides Structural InformationDisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningProduct Ion Sp

22、ectrumQ3Q2Q18/4/202277Product Ion Spectrum of Buspirone100150200250300350400m/z255075100Relative Abundance122386222150265180(M+H)+8/4/202278Precursor Ion ScanningAdvantageID compounds producing specific fragment ion (e.g., PO3 for phosphopeptides)DisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningPr

23、ecursor Ion SpectrumQ3Q2Q18/4/202279Precursor Ion Scan Mode for Buspirone MetabolitesPrecursor Ion Scan: Q3 set to m/z 122100200300400500m/zRelative Abundance402386910111213141516Time (min)255075100Relative Abundance11.6213.8413.1614.4012.1310.4515.458/4/202280Neutral Loss ScanningAdvantageScreen fo

24、r compounds producing specific neutral loss (e.g., loss of 176 for glucuronide conjugates)DisadvantageLow duty cycleScanningPass AllScanningNeutral Loss SpectrumLinkedQ3Q2Q18/4/202281Neutral Loss Scan of Buspirone MetabolitesNeutral Loss Scan: Q1/Q3 difference set to 121 Da100200300400500m/zRelative

25、 Abundance402386910111213141516Time (min)255075100Relative Abundance13.9211.6913.2115.5010.588/4/202282Selected Reaction Monitoring (SRM)AdvantagesTargeted Analyte MonitoringHigh Duty Cycle“Simultaneous” Monitoring of Multiple TransitionsDisadvantageNo “advanced” structural informationFixed m/zPass

26、AllFixed m/zQ1Q2Q38/4/202283MS/MS Selectivity in Complex Matrices息斯敏阿斯咪唑(astemizole)8/4/202284Chlroamphenicol(氯霉素，CAP)殘留測定黃楊生物堿成分鑒定苯甲酸利扎曲普坦人體藥代動(dòng)力學(xué)研究藥物分析中的典型應(yīng)用8/4/202285研究背景 紫花地丁，堇菜科堇菜屬植物光瓣堇菜(Viola yedoensis Makino) 的干燥全草，具有清熱解毒、消癰散結(jié)的功效。 黃酮、香豆素、萜類、有機(jī)酸類?？咕?、抗病毒、抗炎、降脂、抗凝血。UV測總黃酮，HPLC測單一組分。品種嚴(yán)重混亂；質(zhì)控指標(biāo)不明；

27、現(xiàn)代藥理活性報(bào)道較少；藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不清楚；體內(nèi)代謝不明確。分析藥理化學(xué)8/4/202286研究背景 水蔓菁，別名勒馬回，為玄參科婆婆納屬植物水蔓菁（Veronica linariifolia Pall. ex Link subsp. dilatata (Nakai et Kitagawa) Hong ）的干燥全草，具有清熱解毒，利尿，止咳化痰的功效。成分的全面分析，特別是代表性成分鑒定尚未有報(bào)道。分析藥理化學(xué)黃酮、酚酸、環(huán)烯醚萜、苯乙醇苷類。鎮(zhèn)咳、抗炎、保肝、抗腫瘤、抗瘧。指紋圖譜8/4/2022871.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 1 秦皮甲素(esculin)；2 菊苣苷(c

28、ichoriin)； 3 七葉內(nèi)酯(esculetin)；4 早開堇菜苷(prionanthoside)；5 蘆丁(rutin)；6 東莨菪素(scopoletin)；7 雙七葉內(nèi)酯(euphorbetin)；8 槲皮素-3-O-D-葡萄糖苷 (quercetin-3-O-D-glucoside)；9 山奈酚-3-O-D-葡萄糖苷 (kaempferol-3-O-D-glucoside)；10 芹菜素-7-O-D-葡萄糖苷 (apigenin-7-O-D-glucoside)；11 雙聚七葉內(nèi)酯(dimeresculetin)；12 槲皮素(quercetin) 。對照品：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容供試品：紫花

29、地丁干燥全草，75%甲醇超聲提取。8/4/202288HPLC-Q-TOF/MS：準(zhǔn)確分子量信息；二級(jí)質(zhì)譜碎片信息；靈敏度高，分辨率好，采集速度快。獲得豐富的多級(jí)裂解碎片信息， 給出化合物的平均分子量，但屬于低分辨率儀器。ESI-MSn屬于高分辨率儀器，能給出化合物的準(zhǔn)確分子量和較少結(jié)構(gòu)信息。TOFTOFQ-TOF1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究8/4/202289液相條件： 色譜柱： Agilent Zorbax SB-C18柱 (4.6150 mm id, 5m)； 流速：0.8mL/min； 進(jìn)樣量：1L。 檢測波長：354 nm； 流動(dòng)相：A: 0.1%甲酸-水; B:乙

30、腈。梯度洗脫：1-10min,5-16% B;10-35 min,16-17% B; 35-42min,17-22% B; 42-50 min,22-45% B；50-58 min,45-60% B.質(zhì)譜條件： 6530 Q-TOF型離子阱質(zhì)譜儀，ESI 離子源。離子源參數(shù)：正離子模式； N2流速：10 L/min； 毛細(xì)管溫度：300 ； 毛細(xì)管電壓：3500V； N2壓力：25 psi。 全掃描范圍：m/z 100 到m/z 1200。 碰撞能量：30和50V。 儀器控制、數(shù)據(jù)采集、處理:由Masshunter workstation software version B.02.00 (A

31、gilent Technologies)完成。1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容8/4/2022901.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 AB離子模式的選擇： Positive mode二級(jí)碰撞電壓 ： 15 V，30 V和50 V- 50 V。（1）質(zhì)譜條件的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果8/4/2022911.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 （2）紫花地丁中化合物鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果 共鑒定12個(gè)化合物，包括9個(gè)香豆素，3個(gè)黃酮。11762435891011128/4/2022921.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 （3）簡單香豆素類成分裂解規(guī)律實(shí)驗(yàn)結(jié)果-16

32、2 (Glc) 133.0279-162 (Glc)-28(CO)-18(H2O)-162 (Glc)-28(CO)-28 (CO)-18(H2O)-162 (Glc)-28 (CO)cichoriin 8/4/202293（3）雙香豆素類裂解規(guī)律實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 133.0290 161.0244179.0339253.0467M+H-CO-CO-CO-H2O+M+H-CO-CO+M+H-C9H4O4+M+H-C9H4O4-H2O+M+H-C9H4O4-H2O-CO+dimeresculetin 8/4/2022941.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/

33、MS研究 （3）黃酮類裂解規(guī)律實(shí)驗(yàn)結(jié)果 M+H-Glu+M+H-Glu-H2O-CO+M+H-Glu-H2O+M+H-Glu-H2O-C8H4O2+M+H-Glu-C7H5O3+M+H-Glu-H2O-C7H5O3-CO+109.0287 M+H-Glu-H2O-C7H5O3-CO-CO+quercetin-3-O-D-glucoside 8/4/2022951.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 實(shí)驗(yàn)結(jié)果8/4/202296研究內(nèi)容1.1 紫花地丁HPLC-Q-TOF/MS研究 堇菜屬植物成分分析研究 11.2 堇菜屬植物HPLC-Q-TOF/MS研究 8/4/2022971.2 堇

34、菜屬植物HPLC-Q-TOF/MS研究 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 堇菜屬另10種常見植物的基本離子流圖早開堇菜心葉堇菜長萼堇菜 紫花地丁（V. philippica）戟葉堇菜毛果堇菜紫花堇菜斑葉堇菜白花地丁蔓生堇菜8/4/202298C11H12Cl2N2O5FMW=323.13【類別】酰胺醇類抗生素【適應(yīng)癥】本品是治療傷寒、副傷寒的首選藥物，外用可治療沙眼。因腦脊液濃度高，故常用于治療細(xì)菌性腦膜炎和腦膿腫。此外，尚可外用治療痤瘡、酒糟鼻、脂溢性皮炎等。 被農(nóng)業(yè)養(yǎng)殖濫用！ 肉食品中嚴(yán)格檢查。Chlroamphenicol(氯霉素，CAP)殘留測定8/4/202299HPLC analysis was perf

35、ormed on the Finnigan Surveyor HPLC module with MS Pump and AutosamplerColumn: Thermo Hypersil Gold C18 (1002.1 mm, 5)Mobile Phase: A: Water; B: AcetonitrileColumn Temperature: 40 oCGradient Program: 0.25 mL/minInjection: 20 uL with loopTime (min)% A% B080202.520803.020803.180205.080208/4/2022100Ope

36、ration Conditions for CAPIon source:ESIIon polarity:NegativeSpray voltage:4000 VSheath gas pressure:45Auxiliary gas pressure:15Ion transfer capillary temperature:300 oCSource CID:8 VScan Type:SRM, 3 transitions of M-H-(m/z: 321)(321152, 321 194 and 321 257)Q1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2 Da in H-S

37、RMQ3 peak width0.7 DaCollision Pressure:Ar at 1.3 mTorr8/4/2022101Q1 peak width and H-SRM experiment Enabling the H-SRM experiment Highly Selective Selected Reaction Monitoring (H-SRM) Reduces “isobaric” chemical noise Increases confidence of analysis & improved LOQQ1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2

38、Da in H-SRMQ3 peak width0.7 Da8/4/20221028/4/2022103CAP SRM Result: CAP Standard Q1 peak width = 0.7 DaTIC321-152321-194321-257CAPPeak Area Counts = 2.4E48/4/2022104CAP SRM Result: Kidney Blank TIC321-152321-194321-2578/4/2022105CAP SRM Result: Kidney Spiked (0.5ng/g)TIC321-152321-194321-257CAPNot a

39、ccurate for confirmationCAP detected8/4/2022106CAP H-SRM Result: CAP Standard Q1 peak width = 0.2 DaTIC321-152321-194321-257Peak Area Counts = 7.3E38/4/2022107CAP H-SRM Result: Kidney BlankTIC321-152321-194321-257No CAP detected8/4/2022108CAP H-SRM Result: Kidney Spiked (0.5ng/g)TIC321-152321-194321

40、-257CAP8/4/2022109黃楊寧生物堿HPLC-MS聯(lián)用鑒定黃楊科植物小葉黃楊Buxus microphlla Sieb. et. Zucc. var. sinica Rehd.et Wils中含有具有較強(qiáng)心血管疾病治療活性的孕甾烷生物堿，主要含環(huán)維黃楊星D、環(huán)黃楊堿D和環(huán)常綠黃楊堿C等生物堿成分。 8/4/2022110黃楊生物堿HPLC-ELSD色譜圖 色譜條件色譜柱：Lichrospher SiO2 (250mm4.6mm,5 m)流動(dòng)相：四氫呋喃-甲醇-乙腈-氨水 ( 32:50:13:3)流速：1mLmin -1柱溫：30ELSD參數(shù)：漂移管溫度70 霧化氣體（N2） 流速

41、：1.5 Lmin -18/4/2022111環(huán)維黃楊星D和有關(guān)生物堿含量測定結(jié)果次數(shù)環(huán)維黃楊星D含量% 峰1生物堿含量%峰2生物堿含量%峰4生物堿含量%峰5生物堿含量%有關(guān)生物堿總含量% 186.853.578.090.790.9213.37287.083.848.540.800.9814.15385.833.468.820.810.9514.03485.703.548.760.870.9314.10585.053.528.640.740.8513.75684.843.749.030.790.9714.53Mean85.893.618.650.800.9313.99RSD%1.073.653

42、.384.624.632.88/4/2022112環(huán)維黃楊星D及其有關(guān)生物堿的鑒別 質(zhì)譜條件 電噴霧離子化正離子檢測 噴口電壓5000V 霧化氣壓35psi 輔助氣壓力5psi 毛細(xì)管溫度350 碰撞氣氬氣壓力1.5mTorr 色譜條件 色譜柱：Lichrospher SiO2 (250mm4.6mm,5 m) 流動(dòng)相：四氫呋喃-甲醇-乙腈-氨水 ( 32:50:13:3) 流速：1mLmin -1 柱溫：308/4/2022113黃楊寧LC-MS/MS全掃描色譜圖 黃楊寧LC-MS/MS全掃描色譜放大圖 1234567898/4/2022114峰1母離子質(zhì)荷比峰1二級(jí)質(zhì)譜圖M+H+=3708

43、/4/2022115可能為峰1的黃楊寧有關(guān)生物堿Cyclobuxomicreine KCyclobuxosuffrine KBuxenone MCyclobuxoviridine B8/4/2022116峰2母離子質(zhì)荷比峰2二級(jí)質(zhì)譜圖M+H+= 4318/4/2022117可能為峰2的黃楊寧有關(guān)生物堿Cyclomicrophylline BBuxazidine BCyclobuxoxazine CCyclomicrophylline C8/4/2022118峰3母離子質(zhì)荷比峰3二級(jí)質(zhì)譜圖M+H+= 4158/4/2022119可能為峰3的黃楊寧有關(guān)生物堿Cycloprotobuxine ACy

44、clokreanine BCyclovirobuxeine B16-deoxybuxidienine C8/4/2022120峰4母離子質(zhì)荷比峰4二級(jí)質(zhì)譜圖環(huán)常綠黃楊堿CM+H+= 4178/4/2022121峰5母離子質(zhì)荷比峰5二級(jí)質(zhì)譜圖M+H+= 401383.348/4/2022122可能為峰5的黃楊寧有關(guān)生物堿Cycloprotobuxine CBuxaminol EBuxocyclamine ACyclobuxine B8/4/2022123峰6母離子質(zhì)荷比峰6二級(jí)質(zhì)譜圖環(huán)黃楊堿DM+H+= 3878/4/2022124峰7母離子質(zhì)荷比峰7二級(jí)質(zhì)譜圖環(huán)維黃楊星DM+H+= 4038/

45、4/2022125峰8母離子質(zhì)荷比M+H+= 3758/4/2022126 357.15峰8二級(jí)質(zhì)譜圖峰9二級(jí)質(zhì)譜圖 371.178/4/2022127m/z=375m/z=357m/z=344m/z=326m/z=309 357.158/4/2022128峰9母離子質(zhì)荷比M+H+= 3898/4/2022129峰9二級(jí)質(zhì)譜圖 371.178/4/2022130m/z=389m/z=371m/z=358m/z=340m/z=309 371.178/4/2022131峰位號(hào)tR(min)M+H+(m/z)特征碎片離子(m/z)可能生物堿名稱13.92370339，325，283，135，70，5

46、8Cyclobuxomicreine K, Cyclobuxosuffrine K,Buxenone M, Cyclobuxoviridine B24.03431413，382，323，86，70，58Buxazidine B, Cyclomicrophylline B,Cyclobuxoxazine C, Cyclomicrophylline C35.35415384，84，58Cycloprotobuxine A,Cyclokreanine B,Cyclovirobuxeine B, 16-deoxybuxidienine C45.92417399，386，368，84，58Cylcycl

47、ovirobuxine C56.11401370，352，326，171，58Cycloprotobuxine C, Buxaminol E,Buxocyclamine A, Cyclobuxine B67.03387369，356，338，171，58Cyclobuxine D77.63403385，372，354，70，58Cyclovirobuxine D88.28375357，344，326，309，58未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道99.77389371，358，340，173，70，58可能為Cyclobuxine D雙鍵加氫還原產(chǎn)物HPLC-ELSD法黃楊寧有關(guān)生物堿歸屬表8/4/202213

48、2苯甲酸利扎曲普坦 (Rizatriptan Benzoate) MW: 391.47 分子式：C15H19O5C7H6O25-HT受體拮抗劑2.3.3 苯甲酸利扎曲普坦人體藥代動(dòng)力學(xué)研究8/4/2022133藥理作用刺激大腦血管壁的后接點(diǎn)5-HT1B受體收縮血管，降低顱內(nèi)血管通透性；刺激三叉神經(jīng)前突觸5-HT1D受體，調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，抑制硬膜的神經(jīng)原性炎癥反應(yīng)和血漿外滲；阻止血管肽的釋放，使血管口徑正?；?，通過收縮顱內(nèi)血管并抑制神經(jīng)炎癥； 刺激腦干5-HT1B或5-HT1D受體，抑制三叉神經(jīng)核興奮； 減少頸動(dòng)脈血流； 透過血腦屏障，增加腦血流量。 8/4/2022134實(shí)驗(yàn)內(nèi)容建立苯甲酸利扎曲