《免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》教學(xué)課件

1、 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) （ 供臨床醫(yī)學(xué)本科用）基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室 李念虹 Email: 第1頁(yè)，共32頁(yè)。教材高等醫(yī)學(xué)院?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) 科學(xué)出版社，2008年6月 主編 朱道銀，吳玉章第2頁(yè)，共32頁(yè)。臨床醫(yī)學(xué)本科實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及安排實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)錄像1凝集反應(yīng)42沉淀反應(yīng)4 有3免疫標(biāo)記技術(shù)4 有4免疫酶斑點(diǎn)試驗(yàn)4 有第3頁(yè)，共32頁(yè)。非臨床醫(yī)學(xué)本科實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及安排實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)錄像1凝集反應(yīng)42沉淀反應(yīng)4 有3免疫標(biāo)記技術(shù)4 有第4頁(yè)，共32頁(yè)。一、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) 1.學(xué)生進(jìn)實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂，不得穿拖鞋。 2.學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程和實(shí)驗(yàn)室秩序，按要求完成實(shí)

2、驗(yàn)。 3.學(xué)生應(yīng)愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)設(shè)備、器材等公物，厲行節(jié)約；若損壞實(shí)驗(yàn)用品，要及時(shí)報(bào)告。 4.需回收的玻璃器材如載玻片等，放于指定陶瓷缸內(nèi)；廢棄的使用品仍-入垃圾桶內(nèi)。 5.實(shí)驗(yàn)結(jié)束，清理好桌面，由班干部安排值日學(xué)生做清潔；做完清潔，關(guān)好水電、門窗，由帶教老師檢查認(rèn)可后，值日學(xué)生方可離去。第5頁(yè)，共32頁(yè)。二、免疫實(shí)驗(yàn)課目的 1.驗(yàn)證所學(xué)理論知識(shí)。 2.訓(xùn)練基本操作技能，培養(yǎng)獨(dú)立工作能力。三、要求 1.嚴(yán)肅認(rèn)真。 2.多想、多看、多做。 3.當(dāng)堂完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。第6頁(yè)，共32頁(yè)。四、Ag-Ab反應(yīng)的相關(guān)知識(shí) 血清學(xué)反應(yīng)即體外進(jìn)行的Ag-Ab反應(yīng)。 由于機(jī)體絕大部分抗體存在于血清中，故稱之為血清學(xué)反應(yīng)。

3、1.Ag-Ab反應(yīng)的基本原則 （1）用已知抗體檢測(cè)未知抗原； （2）用已知抗原檢測(cè)未知抗體。第7頁(yè)，共32頁(yè)。 2. Ag-Ab反應(yīng)的特點(diǎn)： （1）特異性 （2）可逆性 （3）可見(jiàn)性第8頁(yè)，共32頁(yè)。第9頁(yè)，共32頁(yè)。出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集物 可見(jiàn)性 Ag-Ab比例合適，形成大分子免疫復(fù)合物。第10頁(yè)，共32頁(yè)。 3.影響Ag-Ab反應(yīng)的因素 （1）電解質(zhì)：0.85% NaCl （2）酸堿度：pH68 （3）溫度：37第11頁(yè)，共32頁(yè)。4.Ag-Ab反應(yīng)類型：（1）凝集反應(yīng)（2）沉淀反應(yīng)（3）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（4）中和反應(yīng)（5）免疫標(biāo)記技術(shù)4大經(jīng)典免疫實(shí)驗(yàn)第12頁(yè)，共32頁(yè)。實(shí)驗(yàn)一 凝集反應(yīng)第13頁(yè)

4、，共32頁(yè)。一、目的要求 1.掌握血清學(xué)反應(yīng)概念、特點(diǎn)。 2.熟悉凝集反應(yīng)的概念、常用凝集反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果判定。 3.了解凝集反應(yīng)的原理、類型及其用途。第14頁(yè)，共32頁(yè)。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.直接凝集試驗(yàn)(玻片法) ABO血型鑒定(每人做) 2.間接凝集試驗(yàn) 類風(fēng)濕因子檢測(cè)(小組做)第15頁(yè)，共32頁(yè)。三、凝集反應(yīng)相關(guān)知識(shí) （一）概念 顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱為凝集反應(yīng)。顆粒性Ag 又稱凝集原相應(yīng)Ab 又稱凝集素第16頁(yè)，共32頁(yè)。 顆粒性抗原： 光鏡下可見(jiàn)，肉眼觀呈渾濁懸液，如細(xì)菌、RBC等。 可溶性抗原： 光鏡下無(wú)形態(tài)，肉眼觀呈澄清透

5、明，如蛋白質(zhì)、多糖抗原等。第17頁(yè)，共32頁(yè)。（二）凝集反應(yīng)類型1.直接凝集反應(yīng)2.間接凝集反應(yīng)第18頁(yè)，共32頁(yè)。1.直接凝集 玻片法 已知Ab,測(cè)Ag，為定性實(shí)驗(yàn)； 用途：鑒定菌種、菌種分型、血型鑒定。 試管法（如肥達(dá)氏反應(yīng)） 已知Ag,測(cè)Ab，為半定量實(shí)驗(yàn)； 用途：輔助診斷腸熱癥等。 第19頁(yè)，共32頁(yè)。2.間接凝集反應(yīng)RBC間接血凝試驗(yàn)用途：某些病毒感染和變態(tài)反應(yīng)患者血清中的相抗體量。乳膠間接乳膠凝集試驗(yàn)用途：檢測(cè)類風(fēng)濕因子等。第20頁(yè)，共32頁(yè)。間接凝集抑制試驗(yàn)妊娠試驗(yàn)（已知）（已知）（已知）（已知）第21頁(yè)，共32頁(yè)。反向間接凝集試驗(yàn)?zāi)承﹤魅静『驮l(fā)性肝癌的早期診斷。第22頁(yè)，共3

6、2頁(yè)。 四、實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容 （一）玻片法 ABO血型鑒定（每人做） 用已知血型Ab,測(cè)未知血型Ag；為定性實(shí)驗(yàn)。 ABO血型系統(tǒng) 血型 紅細(xì)胞表面的血型Ag 血清中的血型Ab A型 A 抗B B型 B 抗A AB型 A、B O型 抗A、抗B 第23頁(yè)，共32頁(yè)。 1.材料 已知Ab：標(biāo)準(zhǔn)血清 抗A、抗B 待測(cè)Ag：紅細(xì)胞血型抗原第24頁(yè)，共32頁(yè)。2.操作步驟 (1)無(wú)菌操作采血(無(wú)名指尖)于NS試管形成約25%紅細(xì)胞(RBC)懸液； (2)準(zhǔn)備1張載波片； (3)加血清(Ab)各1滴； (4)加RBC各1滴； (5)搖晃混勻； (6)結(jié)果判斷(10-15分鐘后)。第25頁(yè)，共32頁(yè)。 3.結(jié)果

7、判斷 凝集者：出現(xiàn)紅色顆粒狀或塊狀凝集物； 不凝集者：呈紅色均勻混濁。 (1)若抗A凝集，抗B不凝集 A 型血 (2)若抗A不凝集，抗B凝集 B型血 (3)若抗A、抗B均凝集 AB型血 (4)若抗A、抗B均不凝集 O型血在白背景上觀察凝集不凝集第26頁(yè)，共32頁(yè)。 4.注意事項(xiàng) (1)適度的RBC懸液濃度，約2-5%； (2)抗A和抗B不能混用； (3)在白色背景上觀察效果較好。第27頁(yè)，共32頁(yè)。（二）間接乳膠凝集試驗(yàn) 類風(fēng)濕因子檢測(cè) 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中存在： 變性IgG Ag 抗變性IgG抗體(類風(fēng)濕因子) Ab 臨床上用檢測(cè)類風(fēng)濕因子以輔助診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。第28頁(yè)，共32頁(yè)。 1.材料 已知Ag：致敏乳膠(乳膠顆粒表面有變性IgG) 待測(cè)Ab：待檢血清中的類風(fēng)濕因子待測(cè)Ab已知Ag第29頁(yè)，共32頁(yè)。 2.檢測(cè)步驟： (1)取黑底紙片三片； (2)加待測(cè)血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清各1滴； (3)各加1滴致敏乳膠,用牙簽混勻； (4)5分鐘后觀察結(jié)果，以黑背景觀察為佳。陽(yáng)性者現(xiàn)象：呈乳白色細(xì)沙狀（乳膠凝集）；陰性者現(xiàn)象：呈乳白色均勻混濁。第30頁(yè)，共32頁(yè)。 完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)一 凝集反應(yīng) 一、直接凝集反應(yīng)（玻片法） ABO血型鑒定 1.材料 2.操作步驟 3.結(jié)果判斷（自己的血型） 4.實(shí)驗(yàn)討論 二、間