2015版新藥典無(wú)菌隔離器驗(yàn)證

1、9206無(wú)菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則是為藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、原料、輔料、及其他品種無(wú)菌檢查用隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證提供指導(dǎo)。無(wú)菌檢查用隔離器是為產(chǎn)品無(wú)菌檢查試驗(yàn)提供無(wú)菌環(huán)境的-種設(shè)備。封閉式隔離器不直接與外界環(huán)境相連，使用無(wú)菌接口或快速轉(zhuǎn)移通道進(jìn)行物質(zhì)傳遞，一般用于無(wú)菌檢查；開(kāi)放式隔離器允許材料通過(guò)艙門進(jìn)入，艙門內(nèi)有一定的壓力阻止微生物的進(jìn)入。物品可通過(guò)無(wú)菌傳遞進(jìn)入隔離器，整個(gè)傳遞過(guò)程中可保持隔離器內(nèi)部空間和外部環(huán)境完全隔離。隔離器內(nèi)部能夠反復(fù)進(jìn)行滅菌，內(nèi)壁可用殺孑包了劑處理,以去除所有的生物負(fù)載，滅菌完成后，隔離器通過(guò)高效空氣過(guò)濾器（HEPA）或更高級(jí)別的空氣過(guò)濾器向其內(nèi)部輸送

2、潔凈空氣來(lái)維持內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境。隔離器的使用從根本上避免了操作人員與實(shí)驗(yàn)用物品的直接接觸，操作人員無(wú)需穿著專用潔凈服，而是通過(guò)隔離器上的操作手套或半身操作服對(duì)艙內(nèi)物品、儀器進(jìn)行操作。手套袖套組件或半身操作服是隔離器艙體不可分割的一部分，它們由柔軟的材料制成且與所采用的滅菌劑兼容。因此，使用隔離器進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)，可以避免實(shí)驗(yàn)用物品和輔助設(shè)備被污染，提高了無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。無(wú)菌檢查用隔離器的結(jié)構(gòu)隔離器-般是由不銹鋼、玻璃、硬質(zhì)塑料或軟質(zhì)塑料（如聚氯乙烯）建成。隔離器的結(jié)構(gòu)一般包括：1空氣處理系統(tǒng)用于無(wú)菌檢測(cè)的隔離器應(yīng)配備可截留微生物的高效空氣過(guò)濾系統(tǒng)（或更高級(jí)別的過(guò)濾系統(tǒng)）。靜態(tài)時(shí)，隔離器內(nèi)部環(huán)境

3、的潔凈度要求應(yīng)達(dá)到我國(guó)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）現(xiàn)行版中A級(jí)空氣潔凈度的要求。當(dāng)隔離器與外界環(huán)境有直接開(kāi)口時(shí)，內(nèi)部應(yīng)通過(guò)持續(xù)足夠的正壓來(lái)維持隔離器內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境。2.傳遞接口及傳遞門滅菌后的培養(yǎng)基、稀釋液和實(shí)驗(yàn)用品可以通過(guò)帶傳遞功能的滅菌器直接無(wú)菌傳遞到隔離器內(nèi)。此外，不同的隔離器也可以通過(guò)專門設(shè)計(jì)的快速傳遞門（RTP）連接，以實(shí)現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)物品在兩個(gè)或多個(gè)隔離器之間進(jìn)行無(wú)菌傳遞。RTP上未經(jīng)滅菌的表面通過(guò)互鎖環(huán)或法蘭互相疊合，并通過(guò)密封圈封閉，從而防止微生物進(jìn)入隔離器內(nèi)。3滅菌設(shè)備滅菌氣體發(fā)生器與隔離器之間氣體管路的連接，應(yīng)確保其密封性。在接近隔離器的部位，進(jìn)氣與排氣管路上應(yīng)分別安裝有閥門，

4、當(dāng)氣體發(fā)生器與隔離器的連接、分離或隔離器進(jìn)行無(wú)菌維持時(shí)，進(jìn)、排氣管路閥門應(yīng)予以關(guān)閉。滅菌氣體或蒸汽應(yīng)通過(guò)高效空氣過(guò)濾器（HEPA）進(jìn)入隔離器內(nèi)。滅菌結(jié)束后須對(duì)滅菌氣體進(jìn)行排空，保證在進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)前，隔離器內(nèi)部的滅菌氣體濃度低于一定值，消除滅菌氣體對(duì)無(wú)菌檢測(cè)的影響。隔離器內(nèi)部安裝無(wú)菌檢查使用的配套設(shè)備與輔助設(shè)施，如無(wú)菌檢查過(guò)程中使用的蠕動(dòng)泵、真空泵及連續(xù)環(huán)境監(jiān)控設(shè)備，其運(yùn)行不得對(duì)隔離器的內(nèi)部環(huán)境造成影響，配套設(shè)備上的電機(jī)等關(guān)鍵部件及排氣口設(shè)計(jì)應(yīng)置于隔離器的外部，以防運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生的擾動(dòng)氣流、排出的廢氣對(duì)隔離器的環(huán)境產(chǎn)生破壞，并防止其內(nèi)部受到化學(xué)去污劑的腐蝕而產(chǎn)生安全隱患。隔離器安裝位置的選擇無(wú)菌檢查

5、用隔離器安裝環(huán)境的潔凈度要求應(yīng)不低于我國(guó)現(xiàn)行GMP中D級(jí)空氣潔凈度要求，安裝隔離器的房間應(yīng)限制無(wú)關(guān)人員出入。應(yīng)保證隔離器安裝地點(diǎn)周圍有足夠的空間，以便于隔離器的移動(dòng)、物品的輸送和正常維護(hù)。為保證操作人員的安全性與舒適性，安裝隔離器的房間內(nèi)應(yīng)能控制溫濕度。對(duì)于某些滅菌技術(shù)，溫濕度的控制是至關(guān)重要的。隔離器應(yīng)避免安裝在房間通風(fēng)口直吹的地方，否則可能導(dǎo)致隔離器艙體部分區(qū)域被冷卻，從而造成滅菌過(guò)程中滅菌劑蒸汽在隔離器內(nèi)壁局部冷凝。當(dāng)采用對(duì)溫度敏感的滅菌方法時(shí)，隔離器房間的溫度應(yīng)當(dāng)是均一的。三、隔離系統(tǒng)驗(yàn)證無(wú)菌檢杳用隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證是保證無(wú)菌檢杳所需無(wú)菌環(huán)境的必要條件，隔離系統(tǒng)驗(yàn)證在完成安裝驗(yàn)證后應(yīng)定期進(jìn)

6、行以下驗(yàn)證。操作驗(yàn)證證明所有報(bào)警功能均能按照設(shè)定的要求正常工作；證明隔離系統(tǒng)可按設(shè)定參數(shù)值運(yùn)行。隔離器完整性驗(yàn)證隔離器在正常運(yùn)行條件下應(yīng)能保持良好的完整性。通過(guò)泄漏測(cè)試來(lái)驗(yàn)證設(shè)備完整性是否達(dá)到制造商的要求。為避免外來(lái)污染，正常操作時(shí)隔離器維持在正壓下，壓差范圍為20-50Pao應(yīng)驗(yàn)證隔離器在動(dòng)態(tài)條件下維持正壓差的能力。同時(shí)，隔離器的高效空氣過(guò)濾器（HEPA）也需定期進(jìn)行完整性檢測(cè)。3滅菌驗(yàn)證隔離器農(nóng)面、隔離器內(nèi)的設(shè)備及進(jìn)入隔離器的各種物料都應(yīng)經(jīng)過(guò)處理以降低微生物負(fù)載。用于隔離器、實(shí)驗(yàn)物品的滅菌方法應(yīng)能達(dá)到或超過(guò)使生物指示劑下降6個(gè)對(duì)數(shù)值的效果?？墒褂媚撤N合適的、高抗性的生物指示劑來(lái)驗(yàn)證。完全滅

7、菌法應(yīng)采用每單位106砲子數(shù)的生物指示劑，而陰性對(duì)照應(yīng)該采用每單位孑包子數(shù)大于等于106孑包子數(shù)的生物指示劑。使用合適數(shù)量的生物指示劑進(jìn)行試驗(yàn)可以從統(tǒng)計(jì)學(xué)上證明滅菌效果是可以再現(xiàn)以及滅菌劑的分布是否合適。尤其要注意那些滅菌劑濃度較低的地方。隔離器內(nèi)物品和設(shè)備滿載時(shí)需要用更多的生物指示劑進(jìn)行試驗(yàn)。滅菌程序的確定要經(jīng)過(guò)三次連續(xù)的驗(yàn)證且能使生物指示劑卜降超過(guò)6個(gè)對(duì)數(shù)值。滅菌循環(huán)驗(yàn)證運(yùn)行一個(gè)滅菌循環(huán)，以確認(rèn)滅菌循環(huán)各階段實(shí)際運(yùn)行值與其設(shè)定值是否相符。隔離器內(nèi)部潔凈度驗(yàn)證隔離器內(nèi)部的潔凈環(huán)境應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，其懸浮粒子（靜態(tài)的）和微生物應(yīng)達(dá)到我國(guó)現(xiàn)行GMP中A級(jí)空氣潔凈度的要求。在滅菌氣體滅菌完成后，通過(guò)監(jiān)測(cè)

8、滅菌氣體的濃度，保證在無(wú)菌檢測(cè)前隔離器內(nèi)的滅菌氣體殘留量低于可接受值。7.儀器儀表的驗(yàn)證需對(duì)隔離器配置的儀器儀農(nóng)，比如H2O2傳感器、溫濕度傳感器、壓力傳感器等進(jìn)行定期校驗(yàn)。隔離器-般述應(yīng)進(jìn)行FI常驗(yàn)證，如操作驗(yàn)證、隔離器完整性驗(yàn)證等。當(dāng)隔離器出現(xiàn)運(yùn)行異常、艙體環(huán)境監(jiān)控異?；蜃兏\(yùn)行程序、運(yùn)行參數(shù)、無(wú)菌檢查隔離器安裝場(chǎng)地變更等應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。再驗(yàn)證應(yīng)按照文件化的程序及規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施。再驗(yàn)證的結(jié)果應(yīng)形成記錄并保存。四、隔離器的應(yīng)用1包裝完整性驗(yàn)證隔離器常用的滅菌氣體在滅菌循環(huán)過(guò)程中不會(huì)穿透螺旋蓋試管、壓塞玻璃瓶、西林瓶、安瓶等密封完好的容器，然而，滅菌氣體對(duì)某些透析包裝物會(huì)產(chǎn)生不利影響，可能

9、造成對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制。操作人員應(yīng)通過(guò)驗(yàn)證試驗(yàn)來(lái)證實(shí)暴露于滅菌氣體中的供試品包裝容器及無(wú)菌檢查過(guò)程中所用的器材、稀釋劑、培養(yǎng)基，不會(huì)由于滅菌氣體的滲透而影響供試品中低水平微生物污染的檢出。當(dāng)滅菌氣體存在滲入產(chǎn)品容器、實(shí)驗(yàn)輔助材料、培養(yǎng)基或稀釋液的潛在風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，操作人員可采取適當(dāng)?shù)耐剖邕x用能夠耐受去污劑滲透的包裝材料包裝或?qū)⒉牧戏湃霟o(wú)菌的密閉容器中，以盡量減少滅菌劑進(jìn)入包裝或向容器中滲透，但所采取的描施應(yīng)避免造成滅菌死角，而再次暴露時(shí)污染隔離器環(huán)境的問(wèn)題。在某種程度上，可通過(guò)降低滅菌劑濃度及縮短滅菌周期，來(lái)降低滅菌劑浸入包裝和容器內(nèi)。在進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)之前，通常使用殺菌劑處理產(chǎn)品包裝農(nóng)面來(lái)減少進(jìn)入

10、隔離器的物品衣面微生物的負(fù)荷量，在使用殺菌劑處理產(chǎn)品包裝時(shí)，應(yīng)證明該過(guò)程沒(méi)有對(duì)存在于產(chǎn)品中的低水平污染的微生物造成影響，不會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。建議用化學(xué)和微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)包裝物對(duì)污染的抵制能力。經(jīng)過(guò)隔離器全部的滅菌過(guò)程后，需進(jìn)行殺菌劑抑制細(xì)菌和真菌情況的驗(yàn)證（參照無(wú)菌檢查法（通則1101）02隔離器內(nèi)部環(huán)境的無(wú)菌維持隔離器內(nèi)部環(huán)境在操作周期內(nèi)的無(wú)菌維持需要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。隔離器內(nèi)的微生物監(jiān)控，可通過(guò)對(duì)滅菌后的第-人和無(wú)菌保持期的最后-天的采樣，并對(duì)采樣進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)周期性的采樣分析，可以實(shí)現(xiàn)隔離器內(nèi)無(wú)菌保持情況的驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)岀現(xiàn)故障或者由于偶然因素引起的微生物污染必須進(jìn)行檢測(cè)。隔離器內(nèi)部衣面可采用

11、平面接觸碟、不規(guī)則的農(nóng)面可采用棉簽搽拭進(jìn)行微生物監(jiān)控，由于培養(yǎng)基殘留會(huì)使隔離器產(chǎn)生染菌的風(fēng)險(xiǎn)，因此，最好在檢驗(yàn)完成后進(jìn)行微生物監(jiān)測(cè)，如果試驗(yàn)中有培養(yǎng)基殘留，應(yīng)清理干凈。金氣取樣和沉降菌平IIIL同時(shí)使川，但該方法在檢測(cè)隔離器內(nèi)部非常低水平的污染時(shí)不是很靈敏。檢驗(yàn)用具和樣品進(jìn)入隔離器的過(guò)程最可能造成微生物的污染，所有進(jìn)入隔離器內(nèi)部物品的無(wú)菌驗(yàn)證是非常重要的，另外，墊圈應(yīng)定期檢查，確保其完整，避免微生物的進(jìn)入。手套和半身衣可能是另-個(gè)微生物污染源，尤其是用于處理無(wú)菌檢驗(yàn)物品的手套，應(yīng)當(dāng)特別關(guān)注;選擇手套時(shí)應(yīng)考慮手套的穿刺抗性、耐磨性及較好的觸感，海帕倫材料具有化學(xué)殺孑包劑的抗性及抗穿刺性；試驗(yàn)用的

12、手套應(yīng)保持其完整性，手套上微小的破損很難檢查出來(lái)，但使用時(shí)，在拉伸情況下，即可發(fā)現(xiàn)手套上微小的破損；用戶使用檢測(cè)儀對(duì)手套進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)條件要盡可能與手套使用時(shí)的條件一致，微生物檢測(cè)可補(bǔ)充或替代物理檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)，將手套浸入0.1%的蛋白月東水溶液中，然后采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾0.1%的蛋白腺水溶液，取出濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)是否微生物判定檢測(cè)手套的完整性，本法可以檢測(cè)出其他方法檢測(cè)不出的泄露。采用隔離器內(nèi)部進(jìn)行連續(xù)的塵埃粒子檢測(cè)，可快速檢測(cè)到過(guò)濾器的泄露，也可使用便攜式的塵埃粒子檢測(cè)器進(jìn)行周期檢測(cè)，塵埃粒子檢測(cè)取樣不能對(duì)隔離器內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境產(chǎn)生影響。無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)果的解釋隔離器內(nèi)部空間及表面已經(jīng)過(guò)高水平的滅菌工藝處理，操作人員與無(wú)菌檢查環(huán)境沒(méi)有直接接觸，而且系統(tǒng)的完整性經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，因此，在功能運(yùn)行正常的隔離器內(nèi)進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，出現(xiàn)假陽(yáng)性的概率很低，盡管如此，隔離器也僅是個(gè)機(jī)械設(shè)備，操作人員仍需遵循無(wú)菌操作規(guī)范。當(dāng)出現(xiàn)無(wú)菌檢查試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性吋，應(yīng)按照無(wú)菌檢查法中結(jié)果判斷的要求進(jìn)行分析，并作出該試驗(yàn)結(jié)果是否有效的