色譜峰的前沿與拖尾問(wèn)題

1、產(chǎn)生前沿和拖尾的原因一般有哪些？拖尾：1干擾峰，優(yōu)化條件分離2色譜柱塌陷，更換色譜柱3流動(dòng)相pH不合適，調(diào)節(jié)pH值4管路沒(méi)有接好，存 在較大的死體積，可以重新接一下前沿：1溶劑選擇不合適，選擇合適的溶劑2樣品過(guò)載，降低進(jìn)樣量3柱溫太低，升高柱溫4色譜柱損壞，更換色 譜柱5干擾峰，優(yōu)化色譜條件分離可能的問(wèn)題：1.柱子問(wèn)題2.流動(dòng)相不恰當(dāng)3.定容樣品的溶劑不合適產(chǎn)生峰前沿的原因：柱過(guò)載，柱頭塌陷，溶劑選擇不對(duì)產(chǎn)生峰拖尾的原因：存在雜質(zhì)未分開(kāi)，柱污染，柱子選擇不對(duì)。拖尾峰與柱子有關(guān)，可能是過(guò)載，稀釋樣品再做，或換新柱做吧一般產(chǎn)生托尾峰往往是有機(jī)性相近雜質(zhì)沒(méi)有分開(kāi)，可以?xún)?yōu)化分析方法，或更換柱子試一試；

2、也可能由于柱子使用時(shí)間 太久柱效下降出現(xiàn)塌陷等原因；再有也會(huì)根樣品本身性質(zhì)有關(guān)，基團(tuán)需要流動(dòng)相中添加能與之結(jié)合優(yōu)化峰形的化學(xué)物 質(zhì)，要根據(jù)具體情況而定。柱子可能污染了吧，溶劑也可能有，或柱效下降。圖譜前沿和拖尾的原因主要是流動(dòng)相選擇不合適，可以相應(yīng)調(diào)整流動(dòng)相的極性，或者適當(dāng)加入酸來(lái)調(diào)整，可以得到較 好的改善。一般來(lái)講，酸堿在流動(dòng)相中對(duì)于前沿和拖尾影響較大。柱前沿是可能因?yàn)橹d，拖尾是可能因?yàn)闃悠繁晃廴?，選擇合適的流動(dòng)相，調(diào)節(jié)好PH能夠改善這以情況。液相拖尾峰出現(xiàn)原因及解決辦法：1.柱頭有空隙。解決辦法：使用填料或玻璃珠填充柱頂部。2 .柱上樣品超載。解決辦 法：使用更高負(fù)載量的固定相。增加色

3、譜柱內(nèi)徑、減少樣品量。3.單峰-存在干擾性組分。解決辦法：凈化樣品；預(yù) 分離。4.存在未掃的死體積。解決辦法：減少接頭的數(shù)量、確保進(jìn)樣器密封墊緊密、確保接頭正確固定。5.堿性化合物 -硅醇相互作用。解決辦法：換成聚合物固定相。6.堿性基質(zhì)-硅醇相互作用。解決辦法：使用更強(qiáng)的流動(dòng)相或添加競(jìng) 爭(zhēng)堿（例如，三甲胺）。7.硅膠基-柱降解。解決辦法：使用特種色譜柱；聚合物柱或空間位阻。8.溶劑相極性不匹配。 較早流出的峰或靠近溶劑前沿的峰更容易出現(xiàn)拖尾，解決辦法：改變樣品溶劑。另外，為減少拖尾，可以選擇設(shè)計(jì)優(yōu) 良的封端色譜柱，且使用象三乙胺（TEA，較少需要）等添加劑，或使用“極性”鍵合相。峰拖尾可能的

4、原因：解決方法柱超載：降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相峰干擾：清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值，鈍化樣品柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器，過(guò)濾樣品柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件6.死體積或柱外體積過(guò)大：連接點(diǎn)降至最低，對(duì)所有連 接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管7.柱效下降：用較低腐蝕條件，更換柱,采用保護(hù)柱?？赡軆煞N情況：1.柱效低，需老化或用甲醇沖洗。2.有雜質(zhì)峰在條件（流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時(shí)（Cs、Cm很?。r(shí)，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無(wú)關(guān)。這只

5、是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增 大，K減小，這時(shí)色譜峰為拖尾峰；而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時(shí)色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能 減少進(jìn)樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時(shí)，才能獲得正常峰。平衡分配系數(shù)K是指在固液兩相體系達(dá)平衡狀態(tài)時(shí)，溶質(zhì)在兩相中的濃度的比值。分配系數(shù)反映了溶質(zhì)在兩相中的遷 移能力及分離效能，是描述物質(zhì)在兩相中行為的重要物理化學(xué)特征參數(shù)。峰前延原因解決方法1、柱溫低：升高柱溫2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng)：使用流動(dòng)相作為樣品溶劑3、樣品過(guò)載：降低樣品含量4、篩板阻塞：a、反沖色譜柱b、更換進(jìn)口篩板c、更換色譜柱5、色譜柱塌

6、陷：填充色譜柱避免拖尾：加入二丁胺等掃尾劑、調(diào)整流動(dòng)相pH較強(qiáng)的酸類(lèi)或堿類(lèi)物質(zhì)都會(huì)產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象，一般的解決辦法是調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，對(duì)于酸性物質(zhì)拖尾，一般是加入 乙酸調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值到酸性，一般在2-3左右，對(duì)于堿性物質(zhì)拖尾，一般是加入三乙胺等堿性物質(zhì)，調(diào)節(jié)pH至到 堿性峰拖尾的可能的原因：1流動(dòng)相的選擇有問(wèn)題2柱超載3柱間的死體積太大在吸附色譜中，前沿峰一般來(lái)說(shuō)比較少見(jiàn)，它是由于色譜柱對(duì)被分離組分的吸附能力先弱后強(qiáng)造成的（比如溶質(zhì)濃度 等因素），其吸附等溫曲線(xiàn)為凹型；拖尾則比較常見(jiàn)，與前沿峰相反，其吸附能力是先強(qiáng)后弱，因此其吸附等溫曲線(xiàn)為 凸。柱溫選擇不正確調(diào)節(jié)柱溫，拖尾首先考慮柱子的問(wèn)題

7、，換根柱子試試，其次就是流動(dòng)相的?日，選擇合適的PH至關(guān)重 要，一般用磷酸鹽緩沖液及磷酸調(diào)PH23會(huì)有改善吧。如果是堿性樣品，可適當(dāng)?shù)募尤肴野穪?lái)競(jìng)爭(zhēng)一下。我試過(guò)同一張譜圖中，有前伸峰，也有拖尾峰，后來(lái)發(fā)現(xiàn)是柱子選擇的問(wèn)題，樣品中成分的極性不一樣 拖尾和被測(cè)定組分、色譜柱、流動(dòng)相有很大關(guān)系。峰拖尾有可能是:1.閥連接處出現(xiàn)死區(qū)；2.進(jìn)樣器內(nèi)有污染或不干凈；3.色譜柱選擇不當(dāng)；4.進(jìn)樣技術(shù)差；5.樣品在流動(dòng) 相中溶解度??；6.進(jìn)樣量太大。原因：進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高，樣品過(guò)載致使平衡被破壞；解決辦法：減小進(jìn)樣量或稀釋樣品對(duì)于流動(dòng)相來(lái)講樣品溶劑太強(qiáng)；解決辦法：用流動(dòng)相溶解樣品柱或保護(hù)柱被污染解

8、決辦法：清洗柱或保護(hù)柱，必要時(shí)更換柱性能下降解決辦法：檢查柱效，對(duì)色譜柱進(jìn)行再生處理，必要時(shí)更換流動(dòng)相的比例對(duì)樣品分離影響很大，比例不適當(dāng)就會(huì)產(chǎn)長(zhǎng)拖尾，所以要調(diào)整流動(dòng)相的比例；再就是調(diào)整流速。基本上沒(méi)有完全對(duì)稱(chēng)的峰，大多數(shù)峰都拖尾，拖尾的原因很大程度是柱頭污染和板結(jié)造成的，趨勢(shì)是柱子拖尾越來(lái)越 嚴(yán)重，我曾經(jīng)將拖尾十分嚴(yán)重的色譜柱打開(kāi)，發(fā)現(xiàn)柱子入口端的填料顏色非常深，而且填料靠近管壁的一層已經(jīng)結(jié)成 了一圈硬殼，新柱子前沿的多一些，理論上分配系數(shù)等于1的組分無(wú)論如何分離都是對(duì)稱(chēng)的，分配系數(shù)不為1的情況峰型都不對(duì)稱(chēng)， 在塔板數(shù)非常高的時(shí)候，峰型近似于正態(tài)分布曲線(xiàn)。拖尾有可能是柱效不高，使用的柱子不合

9、理；當(dāng)然也可能是配試液的溶劑有問(wèn)題，再有就是流動(dòng)相了。色譜峰拖尾原因：產(chǎn)生的死體積太大，樣品濃度太高，流速、柱效也不排除柱子污染?？赡苤映d，稀釋一下就好了；或是柱效不行了，需要換新柱子；也有可能是柱子的極性不合適，調(diào)調(diào)pH應(yīng)該就 好。從原理上說(shuō)，拖尾和前沿都是不可避免的，因?yàn)榻^對(duì)線(xiàn)性的吸附（分配）等溫線(xiàn)是沒(méi)有的，而且色譜柱這種多塔板的 結(jié)構(gòu)也會(huì)導(dǎo)致色譜峰的展寬會(huì)越來(lái)越大，所以通常的峰都是后面比前面寬，也就是拖尾。只能說(shuō)通過(guò)改善條件來(lái)優(yōu)化。 柱子或保護(hù)柱被污染，柱子性能下降，保護(hù)柱失效都可能造成前沿和拖尾。前沿的原因還可能是進(jìn)樣體積太大或樣品濃度過(guò)高，造成樣品過(guò)載，平衡被破壞。簡(jiǎn)單的從色譜柱

10、分離機(jī)理角度談一下：造成拖尾的原因多數(shù)是因?yàn)橐蛛x的化合物是堿性的。硅膠表面的硅羥基pKa 值是2-3，也就是當(dāng)流動(dòng)相的pH值大于這個(gè)值，硅羥基就會(huì)解離，這時(shí)這個(gè)氧帶的外層電子對(duì)堿的吸附是特別強(qiáng)的， 很多人知道硅羥基對(duì)堿性物質(zhì)吸附，就是這個(gè)原因。那么就應(yīng)選擇封尾的柱子，但是即使封尾，不管工藝怎么好，都 不會(huì)是100%能封住。那么就爭(zhēng)取從pH值角度考慮，減小流動(dòng)相pH，或者說(shuō)加三乙胺，三乙胺容易被這個(gè)解離的硅 羥基吸附，其實(shí)作用相當(dāng)于對(duì)色譜柱封尾。從流動(dòng)相的角度考慮用甲醇做堿性物質(zhì)要相對(duì)比乙腈好，因?yàn)榧状己?OH， 多少能抑制硅羥基解離，加緩沖鹽的目的也是抑制硅羥基解離。所以說(shuō)種種方法都是抑制

11、硅羥基解離或競(jìng)爭(zhēng)吸附，盡 量減少解離的硅羥基對(duì)堿性物質(zhì)的吸附。前面第二個(gè)前沿峰圖，非常有可能是色譜柱的硅膠溶解造成的。前沿峰還有可能是由溶解性效應(yīng)引起，就是溶解樣品 的溶液對(duì)樣品的溶解性遠(yuǎn)大于流動(dòng)相。現(xiàn)在市場(chǎng)上有種色譜柱經(jīng)過(guò)表面處理之后殘留的硅羥基pKa值能達(dá)到5.5-6我不說(shuō)哪家生產(chǎn)的，用這種柱子做你的流 動(dòng)相pH控制在5.5以下拖尾的效果非常好，另外建議做堿性化合物時(shí)選擇色譜柱盡量選擇比表面積小，含碳量低些的 色譜柱，效果會(huì)好。色譜柱的柱效、流動(dòng)相的組成、流動(dòng)相的PH、柱溫的控制、進(jìn)樣器等問(wèn)題原因很多：分析物本身的性質(zhì)；色譜柱問(wèn)題；流動(dòng)相問(wèn)題分析物本身的性質(zhì)。柱子問(wèn)題，柱子選擇不當(dāng)，分析的

12、樣品極性過(guò)強(qiáng)堿性物質(zhì)。色譜柱老化，柱效降低，柱流失嚴(yán)重；流動(dòng)相問(wèn)題，PH值 選擇不當(dāng)，有機(jī)相比例過(guò)低等。怎樣避免拖尾和前沿，有何措施？選擇合適的色譜條件和色譜柱，就可以避免峰拖尾和前沿在處理樣品時(shí)選擇合適的流動(dòng)相最為重要，所以在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)充分了解所要分離的物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)和溶解度、極性等 相關(guān)問(wèn)題，摸條件時(shí)找到較好的流動(dòng)相，是避免拖尾峰出現(xiàn)的最好方法。避免拖尾和前沿主要要控制好溶質(zhì)的量，每種色譜方法有一定的線(xiàn)性范圍，超過(guò)這一范圍不對(duì)稱(chēng)峰則會(huì)出現(xiàn)。要看是由于什么原因造成的：分析物本身的性質(zhì)：這類(lèi)問(wèn)題首先要選擇合適的色譜柱，另樣品的前處理非常重要，部分樣品在分析過(guò)程中分解，那 肯定是拖尾的。色譜柱問(wèn)

13、題：主要由于色譜柱柱效下降等引起，維護(hù)色譜柱或者更換流動(dòng)相：流動(dòng)相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，應(yīng)添加適當(dāng)緩沖劑如三乙胺、醋酸等。般拖尾比較厲害的是生物堿類(lèi)成分的檢測(cè)，你對(duì)此類(lèi)物質(zhì)防止拖尾有什么好的建議嗎？對(duì)于生物堿類(lèi)，應(yīng)該選用封端了的色譜柱，減少硅羥基的作用，還有就是調(diào)節(jié)流動(dòng)相的PH值來(lái)避免拖尾 對(duì)于生物堿類(lèi)成分的分離關(guān)鍵在于加入的酸的量，因?yàn)槟愕米尦煞直簧V柱吸附后，能夠很好的溶解在流動(dòng)相中，即 解吸附下來(lái)才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！還有就是選擇合適的色譜柱，最重要嘍！分離堿性物質(zhì)，易產(chǎn)生拖尾，一般我們都是在流動(dòng)相中加點(diǎn)三乙胺（即堿性物質(zhì)）.生物堿類(lèi)液相色譜一般都會(huì)在流動(dòng)相里加入少量

14、堿（二乙胺或氨水等），使流動(dòng)相的PH偏堿性。不過(guò)用普通的C18 柱來(lái)分析可能進(jìn)不了幾針柱效就不行了，考慮使用寬PH范圍的C18柱。關(guān)于生物堿薄層問(wèn)題，可以對(duì)于薄層板的話(huà)可以用10%NaOH+CMC-Na溶液進(jìn)行鋪板，還可以適當(dāng)調(diào)節(jié)展開(kāi)劑PH值 來(lái)防治生物堿拖尾。應(yīng)該加三乙胺吧，及三氟乙酸等調(diào)節(jié)PH值，使用氨基的色譜柱啊，不管怎么說(shuō)首先考慮的是色譜柱的選擇。用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？關(guān)于漂移問(wèn)題：溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡關(guān)于快

15、速變化問(wèn)題流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子可能柱超載，減少進(jìn)樣量。HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法樣品量不足，解決辦法為增加樣品量樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決

16、辦法為降低時(shí)間參數(shù)檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線(xiàn)。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線(xiàn)。做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；比例閥失效，更換比例閥即可；泵密封墊損壞，更換密封墊即可；溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。我最近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不能重現(xiàn)，為什么？這是

17、因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺滏I的能力。盡管過(guò)去幾年來(lái)，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠(chǎng)商的ODS 填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào) 的ODS柱上的相對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競(jìng)爭(zhēng)物，如三乙基胺（TEA），將會(huì)使硅醇基的成鍵能 力飽和，從而能保證不同牌號(hào)柱子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性。如分離情況可以，系統(tǒng)穩(wěn)定，達(dá)到系統(tǒng)適用性要求，就不必保留時(shí)間的重現(xiàn)。我購(gòu)買(mǎi)的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問(wèn)為什么？柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢

18、查 問(wèn)題的起因。拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒 進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過(guò)的柱子。更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。 若柱壓還高，請(qǐng)與廠(chǎng)商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE 提供的Rheodyne 7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的最

19、佳選擇。色譜雙峰產(chǎn)生的可能及判斷和處理HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度）峰 型應(yīng)對(duì)稱(chēng)而尖銳。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不 到的問(wèn)題，而對(duì)色譜峰難以作出合理的解釋?zhuān)绕鋵?duì)于新手更是如此。下面根據(jù)本人幾年工作的體會(huì)，提出一些看法， 向同仁指教。色譜雙峰指的是明是一種物質(zhì)，但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因。1 色譜柱如果你分析樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快，雙峰的可能性會(huì)減少），尤其采用單一純物質(zhì)時(shí)，可 以肯定色譜柱出問(wèn)題一柱頭受損或

20、柱頭固定相變臟或流失。如果進(jìn)樣量少，原來(lái)色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大 峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過(guò)來(lái)接，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭 的殘留物沖掉，再反過(guò)來(lái)，一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì)正常的。如果峰拖尾，雙峰強(qiáng)弱相差不大， 柱頭固定相變臟或流失可能性更大，這是可以將進(jìn)樣那頭擰開(kāi)，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新 填料擰緊，不過(guò)這種活，需要一定技術(shù)，同時(shí)不能老干那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效很低而報(bào)廢。2溶劑極性及進(jìn)樣量許多HPLC分析者對(duì)此可能不以為然，一般的HPLC的書(shū)籍和文獻(xiàn)都不會(huì)提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn) 生的一個(gè)很重要的原因。目