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1、基因分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一一的染色原理溴化乙錠(,)為芳香族熒光化合物,是一種高度靈敏的嵌入性熒光染色劑,用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的核酸。是一種核酸染料,常在瓊脂糖凝膠電泳中用于核酸染色;是一種強(qiáng)的誘變劑,可能也是一種致癌物或致畸劑。與核酸的作用原理:這種扁平分子可以嵌入核酸雙鏈的配對(duì)的堿基之間,在紫外線激發(fā)下,未與核酸結(jié)合的溴化乙錠可被激發(fā)出橙紅色螢光。在與或雙股結(jié)合時(shí),螢光強(qiáng)度會(huì)增強(qiáng)倍,使得核酸電泳后的膠片可以辨識(shí)核酸的相對(duì)位置。在核酸分子中,分子插入到兩層堿基對(duì)之間,發(fā)出紅色熒光。在凝膠中加入終濃度為|J的,可以在電泳過(guò)程中隨時(shí)觀察核酸的遷移情況,這種方法使用于一般性的核酸檢測(cè)。問(wèn)題討
2、論i溴化乙錠在瓊脂糖凝膠電泳中先加與后加的區(qū)別?先加,染色與電泳同時(shí)進(jìn)行:加在膠里總體積小,所以比較方便節(jié)省;會(huì)導(dǎo)致膠的整體背景稍微高些,比較暗;長(zhǎng)時(shí)間、長(zhǎng)距離的電泳先加的話,信號(hào)強(qiáng)度會(huì)相應(yīng)下降;不宜用于核酸分子大小的確定和定量。原因分析:帶正電荷,中和核酸分子的負(fù)電荷,同時(shí)由于的他的嵌入增加了核酸分子的剛性,使遷移速率減慢,故不宜用于凝膠電泳測(cè)定核酸分子的大小。另外,由于在凝膠中,游離的分子向負(fù)極泳動(dòng),會(huì)使樣品中前后各帶染色不均勻,影響定量。后加,染色在電泳完成后:.可以減少污染,無(wú)背景色,圖較漂亮;相對(duì)浪費(fèi)時(shí)間。2廢物的如何處理?廢物的處理如下:對(duì)于含量大于的溶液,可如下處理:將溶液用水稀釋至濃度低于;加入一倍體積的,混勻,再加入等量的,混勻,置室溫?cái)?shù)小時(shí);加入一倍體積的/混勻并廢棄。含量小于的溶液可如下處理:按的量加入活性炭,不時(shí)輕搖混勻,室溫放置用濾紙過(guò)濾并將活性
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