外泌體捕獲分離

1、外泌體，帶來(lái)革命變革的小不點(diǎn)（三）外泌體捕獲分離外泌體天然存在于體液中，在包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中廣泛分布，而且，所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體；但是，想要研究這個(gè)分布廣泛的小不點(diǎn)可不是一件容易的事情，其中，最為困難的就是從體液或者細(xì)胞培養(yǎng)基中分離出高純度的外泌體。今天，小優(yōu)專題給您帶來(lái)的就是外泌體研究的最關(guān)鍵步驟外泌體捕獲與分離這一部分的技術(shù)講解與解決方案。外泌體分離的傳統(tǒng)方法為差速超速離心法和密度梯度超速離心法等，差速超速離心法是目前外泌體提取最常用的方法。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)是將細(xì)胞培養(yǎng)液或體液等樣本依次在300g、2000g、10000g離心去除細(xì)胞碎片和大分子蛋白質(zhì)，最后10

2、0000g離心得到外泌體。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，質(zhì)量不好，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。另一種常用的外泌體分離方法為密度梯度離心法，將樣本和梯度材料一起超速離心，樣品中的不同組分沉降到各自的等密度區(qū)，分為連續(xù)和不連續(xù)梯度離心法。用于密度梯度離心法的介質(zhì)要求對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，在高濃度時(shí)粘度不高且易將pH調(diào)至中性。實(shí)驗(yàn)中常用蔗糖密度梯度離心法，在離心法的基礎(chǔ)上，預(yù)先將兩種濃度蔗糖溶液（如2.5M和0.25M）配成連續(xù)梯度體系置于超速離心管中，樣本鋪在蔗糖溶液上，100000g離心16h，外泌體會(huì)沉降

3、到等密度區(qū)（1.101.18g/ml）。用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，產(chǎn)量少。而且，這兩種傳統(tǒng)方法都需要用到超速離心機(jī)，設(shè)備昂貴，耗時(shí)長(zhǎng)，一次最多只能做6個(gè)樣品，效率低，并且需要大量的樣品才能得到足夠多的外泌體。接下來(lái)小優(yōu)就為您帶來(lái)優(yōu)寧維為您提供的高效外泌體捕獲與分離技術(shù)，幫您遠(yuǎn)離枯燥乏味的超速離心，快速高效制備高質(zhì)量的外泌體。話不多說(shuō)，亮技術(shù)，上產(chǎn)品：首先閃亮登場(chǎng)的是簡(jiǎn)單的一步法分離外泌體，實(shí)驗(yàn)原理如下圖：*CaIISupmcim牛WestefnblottingELISAASSAYNudekacidseKtractionandanalysisAddExcPure

4、andincubateonicefw1hrpellet5pirntocollectNanoTrackingAnalysis(NTA)Bioflulds一步法分離外泌體原理示意圖該技術(shù)的優(yōu)勢(shì)有節(jié)省時(shí)間，小體積樣本適用（可從100“血漿中分離出足量外泌體），無(wú)需超速離心和其他預(yù)富集方式，試劑方便儲(chǔ)存于運(yùn)輸（4C保存）等。除了一步法分離外泌體的技術(shù)外，小優(yōu)還為您提供免疫捕獲法，包括免疫微球產(chǎn)品與免疫預(yù)制板產(chǎn)品。首先我們來(lái)看免疫微球捕獲分離外泌體的技術(shù)原理：EwsmeimmunocaptureEicosomelmmunob&ad5elutFonorl$QktlQnImmunobeadsElutionB

5、ufferCellSupernvTanUElutedExosoirnQ忘IncubatesamplewithImmunobeadsPelletBead&/Epsames,iProteinanalysesornucleicscfdeKtractflori*免疫微球分離外泌體原理圖免疫微球捕獲分離外泌體的優(yōu)勢(shì)包括實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)單快速，無(wú)需超速離心等其他預(yù)富集操作，支持小樣本量，可以篩選特異細(xì)胞分泌的外泌體等。免疫預(yù)制板捕獲分離外泌體的原理如下圖所示：I-rIYYrrYY/tmn；宀，CaptureofspecifictwosomesubCaptureofoverallExasonnesPlates

6、arepopulation.Plalesarecoaledwithantibodiescoatedwithantibodiesagamstexosome二overexpressedinparticularpathologicalsurfaceantigenshpresentonoverall.condctionsonexosomesurfacewithantibodiesexosomepopulation.againstexosomesurfaceantigens,presentonoverallexosomepopulation.免疫預(yù)制板分離外泌體原理圖其優(yōu)勢(shì)包括可以長(zhǎng)保存（保質(zhì)期2年），支持小樣本量（可低至每孔100“樣品量），無(wú)需超速離心等其他預(yù)富集操作，可分泌特異細(xì)胞分泌的外泌體，可在板上對(duì)捕獲的外泌體進(jìn)行核酸提取操作等。如果您需要從較大量的樣本中提取外泌體，