保健食品功效成分楊大進教學課件

1、保健食品功效成分檢測技術進展中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與食品安全所常見保健食品功效成分分類氨基酸低聚糖和多糖維生素、礦物質(zhì)植物提取物動物性提取物發(fā)酵產(chǎn)物類氨基酸類保健食品功效成分必需氨基酸?；撬岬途厶穷惐＝∈称饭πС煞侄鄶?shù)可以通過液相色譜進行檢測；低聚果糖檢測上還有一定的問題；低聚半乳糖的檢測比較復雜，需要通過酶解等手段，通過在總半乳糖中減去游離和由乳糖生成的半乳糖，通過折算得到低聚半乳糖含量。多糖類保健食品功效成分定義明確但實際操作難以實現(xiàn)，檢測結(jié)果缺乏說服力。維生素、礦物質(zhì)類保健食品功效成分脂溶性維生素水溶性維生素類維生素礦物質(zhì)脂溶性維生素維生素A可采用相對簡單的方法。相對簡單的片劑和膠囊試

2、樣可不采用國家標準直接采用異丙醇、己烷等溶劑提?。粙雰号浞侥谭鄣犬a(chǎn)品可使用胰酶和胃蛋白酶處理，己烷等溶劑提取后測定視黃醇醋酸酯或視黃醇棕櫚酸酯。視黃醇不穩(wěn)定，但視黃醇醋酸酯和視黃醇棕櫚酸酯相對穩(wěn)定，采用外標法就能夠保證分析結(jié)果。 脂溶性維生素維生素E維生素E的前處理方法與維生素A相似。目前對于維生素E使用反相色譜法實現(xiàn) -、-、-、-4種結(jié)構(gòu)全部分離比較困難。通過正相柱進行上述4種結(jié)構(gòu)分離相對容易。通常保健食品中添加的基本為- 。脂溶性維生素維生素D現(xiàn)有國標只有使用GB/T 5413進行嬰幼兒配方奶粉檢測的方法。該方法實際需要色譜分析2次，不能滿足日常實際檢測。脂溶性維生素維生素D鈣+維生素D

3、等基質(zhì)相對簡單的保健食品檢測維生素D采用乙醇直接超聲提取的方式提取，無需凈化，如維生素D含量偏低可使用氮吹儀濃縮。脂溶性維生素維生素D對于含量低、蛋白和淀粉含量高采用大取樣量，高堿度，輔以酶解的方式進行皂化。對于基質(zhì)相對復雜的保健食品采用與維生素A、E類似的前處理方法，但皂化溫度為72。流動相仍采用甲醇：水=98：2，目前市售95%的樣品均可以得到較好的分離分析。AU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.00?2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.002.24

4、72.6693.1313.4243.6394.2004.7645.3146.2977.1328.0748.1848.5048.98310.23510.86711.79512.37713.66515.55016.99218.68319.96323.40725.13326.728維生素D維生素D分析前處理注意事項由于用堿量大，應注意不時搖動。皂化溫度不要超過72，以防結(jié)構(gòu)變化。當色譜圖出現(xiàn)不光滑、對稱性差的現(xiàn)象時說明堿度不夠，有干擾。含淀粉較多的產(chǎn)品應利用生物酶盡可能多地去除淀粉等。脂溶性維生素維生素K2需要檢測維生素K2的保健食品較少。采取用流動相提取的方式。色譜柱：-Bondapak C18柱

5、流動相：乙醇：乙醚=95:5波長：254nm脂溶性維生素維生素K1GB/T 5009.158 2003在檢測植物性食品中維生素K1時使用層析柱凈化法，分析效果較好。GB/T 5413在檢測嬰幼兒配方食品中維生素K1時使用液液萃取法凈化。對于低含量樣品的檢測可使用鋅柱柱后還原法使維生素K1產(chǎn)生強熒光，從而提高分析效果。脂溶性維生素胡蘿卜素GB/T 5009.832003有檢測胡蘿卜素的方法。該方法中使用C18柱分離，但很多結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)如-，-胡蘿卜素難以分離。脂溶性維生素胡蘿卜素現(xiàn)在使用專用的胡蘿卜素色譜柱：YMCTM Carotenoid S-5柱，1504.6 mm ,5m可以實現(xiàn)-胡蘿卜

6、素、-胡蘿卜素、玉米黃質(zhì)、葉黃素等分析。C30 固定相是1994 年左右研發(fā)成功的一種反相吸附固定相。其反相性增強，這種固定相在類胡蘿卜素的HPLC分析中得到應用。由于C30 烷基的鏈長大致與胡蘿卜素分子的長度相當，因而增強了二者的相互作用。更長的烷基鏈增加了固定相的疏水性，極性與非極性類胡蘿卜素的保留時間增加，從而提高了柱效。流動相選用：甲醇+甲基叔丁基醚+水77519035 葉黃素AU0.0000.0100.0200.0300.0400.0500.060?0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.50

7、9.009.5010.005.477AU0.0000.0010.0020.0030.0040.0050.006?1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.006.509玉米黃質(zhì)胡蘿卜素胡蘿卜素AU0.0000.0010.0020.0030.004?0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0025.141AU0.0000.0020.0040.0060.0080.010?0.002.004

8、.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0033.136胡蘿卜素前處理方法的比較對于添加的胡蘿卜素，直接提取法如提取完全與皂化法沒有差別。對于食品中天然的胡蘿卜素，皂化法可能處理得更完全。胡蘿卜素分析中的注意事項在直接提取法中劇烈振搖和多次提取直至提取液無色非常必要。在直接提取法中使用離心可實現(xiàn)快速分層清晰，以縮短分析時間。在提取溶劑中如果加入少量抗氧化劑可以有效地保證結(jié)果的一致性。脂溶性維生素番茄紅素（胡蘿卜素）作為胡蘿卜素的一種既可以采用上述胡蘿卜素的方

9、法一同分析也可以單獨分析。檢測條件：紫外檢測器：檢測波長472nm色譜柱：supelcosil LC-18 流動相: 甲醇：乙腈=50：50流速: 1.0mL/min 30 番茄紅素標準色譜圖 番茄紅素樣品色譜圖番茄紅素分析注意事項提取時應注意要加入少量抗氧化劑以保護番茄紅素，否則降解很快。由于番茄紅素不穩(wěn)定，通常會將其微囊化，故應選擇其破囊試劑，如N，N二甲基甲酰胺等，以及較長時間的超聲提取。水溶性維生素由于天然保健食品中水溶性維生素含量相對較低，且有些維生素以多種形式存在，因此不宜使用液相色譜法。目前國家標準分析方法較多地采用微生物法和比色法、熒光法。對于添加的維生素，結(jié)構(gòu)形式符合要求且添

10、加量較高，為直接使用液相色譜法提供了必要的條件。水溶性維生素維生素B1、B6、煙酸、煙酰胺目前在保健食品中基本采用GB 5009.1972003檢測維生素B1、B6（吡哆醇）、煙酸和煙酰胺。如果要檢測維生素B6（吡哆醇）、吡哆胺、吡哆醛全部三種形式，可使用稀酸作為提取溶劑，稀酸作為流動相的液相色譜分析方法。水溶性維生素維生素B2參照GB5009.1972003分析維生素B2保留時間比較短，且使用紫外檢測器靈敏度不高。對于維生素B2仍采用將核黃素轉(zhuǎn)化成光黃素后再進行熒光分光光度檢測的方法。該方法在各類食品中均有采用，成熟但分析時間較長。水溶性維生素泛酸鈣目前保健食品等的檢測方法的儀器分析條件與G

11、B/T 54131997類似，由于基質(zhì)的原因故前處理也相對簡單。泛酸鈣分析注意事項要選擇合適的色譜柱，避免出峰過快或過慢。選擇適合的酸度，避免拖尾?，F(xiàn)有流動相比例0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH=3.0）：乙腈=95：5適合目前所做的所有樣品中泛酸的測定，如還有干擾可適當調(diào)節(jié)兩者的比例。每針分析時間的確定要考慮泛酸后的峰。水溶性維生素維生素B12由于樣品中的含量較低，通常食品中維生素B12只能由微生物法進行檢測。水溶性維生素維生素B12已利用表面活性劑、大孔吸附樹脂和固相萃取技術，實現(xiàn)了對多種維生素片劑、膠囊及保健飲料、保健食品和嬰幼兒配方奶粉等類型中維生素B12的檢測。表面活性

12、劑用于去除色素等干擾物質(zhì)。大孔樹脂用于去除糖份。固相萃取用于富集和進一步凈化。維生素B12紫外光譜圖維生素B12液相色譜圖水溶性維生素生物素目前在基質(zhì)簡單的保健食品中可使用液相色譜檢測，但方法不很成熟。正在研究的衍生法對于生物素的檢測有一定的作用，可使其檢測波長改變，從而提高分析效果。水溶性維生素維生素C除顏色較深、含量較低、天然植物干制品外，一般樣品中的維生素C均可以采用藥典中的碘溶液滴定法進行測定。水溶性維生素維生素C高效液相色譜法測定維生素C可參照GB/T5009.1972003，但需要盡可能減少有機相的比例，否則可能造成維生素C保留時間過短的問題。在適合的流動相分析條件下，維生素C的d

13、-，l-構(gòu)型可以得到分離。水溶性維生素葉酸目前通常使用的高效液相紫外法（參照藥典）檢測強化的葉酸還有相當?shù)木窒扌?，靈敏度低，部分樣品有干擾?？梢允褂?.5%過二硫酸鉀柱后衍生，高效液相熒光法加以解決。類維生素類維生素肉堿對于有干擾樣品的分析，采用三氟乙酸：N，N二甲基甲酰胺=2：98提取。流動相采用0.1%三氟乙酸和三氟乙酸：60%乙腈=0.07：100進行梯度洗脫。色譜柱：-Bondapak C18類維生素肌醇目前較多出現(xiàn)在保健食品和嬰幼兒配方奶粉中。按GB/T5009.1962003檢測。嬰幼兒配方奶粉中的肌醇檢測采取先用6mol/LHCl在105下水解7-8h的方式，再按上述硅烷化方法進

14、行處理、分析的過程。類維生素輔酶Q10輔酶Q10一般檢測采取正己烷提取，無水乙醇稀釋，以乙腈：四氫呋喃：水= 55：40：5為流動相的液相色譜分析方法。根據(jù)輔酶Q10的特性，使用非極性溶劑進行提取，因此共提的干擾雜質(zhì)較少 ，適用范圍較廣。類維生素-硫辛酸添加的保健食品相對較少。對于多種維生素試樣可用乙腈提取流動相：乙腈：0.03%磷酸=44：56波長：215nm類維生素對氨基苯甲酸對于簡單基質(zhì)的樣品可以采用液相色譜法分析，復雜基質(zhì)容易被干擾。礦物質(zhì)檢測技術上沒有新技術。植物提取物類保健食品功效成分類黃酮類物質(zhì)甙類物質(zhì)木脂素蒽醌其他有機酸脂肪酸植物甾醇植物提取物類類黃酮銀杏黃酮陳皮甙淫羊藿甙葛根

15、素大豆異黃酮原花青素植物提取物類皂甙類人參皂甙甘草酸黃芪甲甙植物提取物類木脂素五味子甲素、乙素植物提取物類蒽醌大黃素、大黃酸、大黃酚番瀉苷蘆薈苷植物提取物類其他芍藥甙紅景天甙丹參酮桂皮醛天麻素辣椒素白藜蘆醇刺五加甙和異秦皮定植物提取物類有機酸綠原酸丹參素植物提取物類脂肪酸-、-亞麻酸亞油酸油酸花生四烯酸植物提取物類植物甾醇豆甾醇谷甾醇菜油甾醇檢測技術研究現(xiàn)狀荷葉制品中的荷葉堿多數(shù)樣品可使用液相色譜分析少數(shù)樣品需要進行凈化如氧化鋁等某些干擾大的樣品需要進行液質(zhì)分析檢測技術研究現(xiàn)狀決明子對其中的橙黃決明素和決明甙A、B的檢測技術進行了研究橙黃決明素是其標志性成分決明甙A、B關系其作用檢測技術研究現(xiàn)

16、狀番瀉苷為保證分析效果，避免拖尾應在流動相使用離子對試劑。 檢測技術研究現(xiàn)狀黃芪制品中的黃芪甲苷選擇大孔吸附樹脂作為樣品的初步凈化手段； 采用固相萃取作為進一步富集凈化的手段；苯甲酰氯衍生化使之紅移。 檢測技術研究現(xiàn)狀羅布麻制品中羅布麻甲素的檢測對于含羅布麻的保健食品利用反相液相色譜檢測其中的羅布麻甲素；由于羅布麻甲素具有一定的極性，可使用離子對試劑或通過改變流動相的酸度改善其分離效果。檢測技術研究現(xiàn)狀杜仲中桃葉珊瑚苷的檢測使用反相液相色譜法檢測桃葉珊瑚苷不穩(wěn)定，提取時應注意檢測技術研究現(xiàn)狀韭菜籽中功效成分的篩選及檢測檢測技術研究現(xiàn)狀厚樸制品中厚樸酚和木蘭醇檢測技術研究現(xiàn)狀芝麻籽中芝麻素的檢測檢測技術研究現(xiàn)狀大蒜及大蒜制品中蒜素和蒜氨酸的檢測蒜素可直接分析蒜氨酸需要進行衍生化兩者可用相同儀器條件分析前處理技術藥品檢測時基本不凈化；多數(shù)含量高、無干擾的植物性功效成分可采用簡單前處理后直接分析。前處理技術某些含量低，存在干擾的功效成分如芍藥甙、黃芪甲甙、紅景天甙、天麻素需固相萃取富集、凈化。為保證分析效果有些還需要衍生化，如蒜氨酸、黃芪甲甙。動物提取物類保健