不同因素對(duì)酶的影響實(shí)驗(yàn)研究分析報(bào)告

1、沙/上字實(shí)驗(yàn)報(bào)告專業(yè): 姓名: 學(xué)號(hào): 日期: 地點(diǎn):課程名稱：指導(dǎo)留死;學(xué)或緘（甲）實(shí)驗(yàn)名稱： 酶地基本性質(zhì)實(shí)驗(yàn)一一底物專一性劑、激活劑和抑制、最適溫度實(shí)驗(yàn)類型：分離鑒定實(shí)驗(yàn)同組學(xué)生姓名：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睾鸵螅ū靥睿?三、主要儀器設(shè)備（必填） 五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄和處理 七、討論、心得二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理（必填） 四、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（必填）I.酶地基本性質(zhì)一一底物專一性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睾鸵?共 1. 了解酶地專一性.2.掌握驗(yàn)證酶地專一性地基本原理及方法.3.學(xué)會(huì)排除干擾因素，設(shè)計(jì)酶學(xué)實(shí)驗(yàn).二、實(shí)驗(yàn)基本原理 b5E2R酶是一種具有催化功能地蛋白質(zhì).酶蛋白結(jié)構(gòu)決定了酶地功能一一酶

2、地高效性，酶催化地反應(yīng)（酶訂促反應(yīng)）要比相應(yīng)地沒(méi)有催化劑地反應(yīng)快103-1017倍.酶催化作用地一個(gè)重要特點(diǎn)是具有高度地底物專一性，即一種酶只能對(duì)某一種底物或一類底物起催化作用，對(duì)其他底物無(wú)催化反應(yīng).根線據(jù)各種酶對(duì)底物地選擇程度不同，它們地專一性可以分為下列幾種：p1Ean。;1.相對(duì)專一性一種酶能夠催化一類具有相同化學(xué)鍵或基團(tuán)地物質(zhì)進(jìn)行某種類型地反應(yīng).2.絕對(duì)專j一性：有些酶對(duì)底物地要求非常嚴(yán)格只作用于一種底物，而不作用于任何其他物質(zhì).如服酶只能:催化尿素進(jìn)行水解而生成二氧化碳和氨.如麥芽糖酶只作用于麥芽糖而不作用其它雙糖，淀粉酶:只作用于淀粉，而不作用于纖維素 .3.立體異構(gòu)專一性有些酶只

3、有作用于底物地立體異構(gòu)物中地：一種，而對(duì)另一種則全無(wú)作用.如酵母中地糖酶類只作用于D-型糖而不能作用于 L-型地糖.本實(shí)；驗(yàn)以唾液淀粉酶、蔗糖酶對(duì)淀粉、蔗糖水解反應(yīng)地催化作用來(lái)觀察酶地專一性.采用Benedict試劑檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物.DXDiT:Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定地氧化能力，能與還原性糖地半縮醛羥基發(fā)生;氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀. Na2CO+ 2H2O2NaOH + H2COC CuSO+ 2NaOH Cu（OH） M 2+ NaSO還原糖（ CHOor C=O）+ 2Cu（OH） 2 Cu2O;（磚紅色或黃色）+ 2H 2O +糖，蚓化產(chǎn)物 RTCip;

4、在分子結(jié)構(gòu)上，淀粉幾乎沒(méi)有，而蔗糖、棉子糖企無(wú)半縮幅基，它們均無(wú)還原性，因此它們:與Benedict試劑無(wú)呈色反應(yīng).淀粉被淀粉酶水解，產(chǎn)物為葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，j其產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，它們都為具有自由半縮醛羥基地還原糖，與Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色Cu2O沉淀.本實(shí)驗(yàn)以此顏色反應(yīng)觀察淀粉酶、蔗糖酶對(duì)淀粉和蔗糖地水解作用.三、實(shí)!:驗(yàn)材料與試劑5PCzV:1、實(shí)驗(yàn)材料蔗糖酶（樣品IV）;新鮮唾液（含唾液淀粉酶）；2、實(shí)驗(yàn)試劑蔗糖酶液蔗糖 酶液（樣品IV）加蒸儲(chǔ)水適當(dāng)稀釋，備用；唾液淀粉酶液（學(xué)生自制）取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸儲(chǔ)水（稀釋）到25ml ,用棉花

5、過(guò)濾備用.唾液稀倍數(shù)因人而異，可稀釋50400倍，甚至更高；5%蔗糖(A.R.)溶液；0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl)；Benedict試劑；四、 實(shí)驗(yàn)器材與儀器jLBHr。1.漏斗，2.脫脂棉花；3.恒溫水浴(37C, 100C) ; 4.量筒；5.試管；6.燒杯；7.吸量管.五、實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟xHAQX檢查試劑取3支試管，按下表操作：試劑處理23Q.3*淀粉 0.3%NaCl)溶液 U1)3瑞蔗精溶液(ml)3蒸儲(chǔ)水(ml)3BenedictiJ(ml)22 .2搖勻,置沸水浴煮沸23min記錄觀察結(jié)果注：1、檢查目地：試劑是否有干擾因素存在.2、也可對(duì)蔗糖酶液、唾液淀粉酶液進(jìn)行

6、檢查是否也有干擾因素存在，請(qǐng)自己設(shè)計(jì).淀粉酶地專一性取三支試管，按下表操作：LDAYt試管編號(hào)1230.5%淀粉 CO.SaCl)溶液(ml)3熱蔗楮溶液(ml)3蒸饋水(ml)3唾液淀粉酹液(ml)111搖勾，置37七水浴保溫lOminEsedict 試劑(ml)222搖勻，直沸水浴煮2一物行記錄觀察結(jié)果注：可增加一組唾液淀粉酶7經(jīng)100 c加熱3min處理后地樣品對(duì)照組.蔗糖酶地專一性取三支試管，按下表操作:試管編號(hào)123試劑處理_一_0. 5%淀粉(0. 3%NaCl)溶液加 1)3禍蔗糖溶液(ml)3蒸耀水(ml)3蔗格爵溶液(ml)111搖勻，置371c水浴保堤1加5BRnict 試

7、劑(ml)22搖勻，置沸水浴煮23min記錄觀察結(jié)果注：可增加一組蔗糖酶液經(jīng)100c加熱3min處理后地樣品對(duì)照組Zzz6Z。六、結(jié)果分析討論各試管觀察結(jié)果依次是：(一)：1號(hào)藍(lán)綠色，2號(hào)藍(lán)色，3號(hào)藍(lán)色Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定地氧化能力，能與還原性糖地半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀.3 只試管都為藍(lán)色說(shuō)明幾只試管中都沒(méi)有果糖和葡萄糖，說(shuō)明在不加酶時(shí)，淀粉和蔗糖不易水解. 試劑無(wú)干擾因素地存在 . （ 1 號(hào)試管是藍(lán)綠色可能是因?yàn)橛猩俨糠值氐矸鬯猓?dvzfv 。（二）： 1 號(hào)土黃色， 2 號(hào)黃綠色， 3 號(hào)藍(lán)色加入唾液淀粉酶， 1 號(hào)試管底物是淀粉

8、，所以很容易水解成葡萄糖，與 Benedict 試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色CuaO沉淀.所以1號(hào)顏色變化比較大.（2號(hào)可能是因?yàn)檎崽窃?7 c恒溫水浴中也有少部分水解，所以顏色變化，但變化不明顯. ）總地來(lái)看可以看出唾液淀粉酶只對(duì)淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有對(duì)淀粉地底物專一性.3 號(hào)是對(duì)照 . rqyn1 。（三）： 1 號(hào)藍(lán)色， 2 號(hào)紅棕色， 3 號(hào)藍(lán)色加入蔗糖酶， 2 號(hào)試管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，與Benedict 試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色CsO沉淀.所以2號(hào)顏色變化比較大.（1號(hào)可能是因?yàn)榈矸墼?7c恒溫水浴中也有部分水解，所以有顏色變化，但變化不明顯. ）從這

9、三支試管看出蔗糖酶只對(duì)蔗糖地水解有催化作用，對(duì)淀粉無(wú)催化作用，具有對(duì)蔗糖地底物專一性.3 號(hào)是對(duì)照 . Emxvx。七、思考題 1觀察酶專一性實(shí)驗(yàn)為什么要設(shè)計(jì)這3 組實(shí)驗(yàn)？每組各有何意義？蒸餾水有何用？第一組作為整個(gè)實(shí)驗(yàn)地空白對(duì)照組， 檢測(cè) Benedict 試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果地顏色有何影響， 排除干擾因素地存在. 第二組作為檢測(cè)淀粉酶地專一性實(shí)驗(yàn)組， 第三組作為檢測(cè)蔗糖酶地專一性地實(shí)驗(yàn)組 .蒸 餾水作為每一個(gè)組中地空白對(duì)照，與組內(nèi)其余兩組進(jìn)行對(duì)照 . SixE2 。2將酶液煮沸 10min 后，重做二、三地操作，觀察有何結(jié)果？各試管都為藍(lán)色，因?yàn)槊冈谥蠓羞^(guò)程中 已經(jīng)變性，失去催化活性，故不能催化

10、各自對(duì)應(yīng)底物地水解反應(yīng) .3在此實(shí)驗(yàn)中，為什么要用0.5%淀粉（0.3%NaCl） 溶液？ 0.3%NaCl 地作用是什么？0. 3%NaCl 中地 Cl - 是作為激活劑激活唾液淀粉酶地活性， 使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不至于因?yàn)橥僖旱矸勖傅鼗钚圆蛔愣鴮?dǎo)致不同.6ewMy八、注意事項(xiàng)1. 試管要干凈，所有試劑加量準(zhǔn)確，加好試劑后要搖勻 .2. 使用試劑時(shí)不要人為造成試劑間地互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間地互相污染. 以免實(shí)驗(yàn)結(jié)果地錯(cuò)誤 . kavU4。n .影響酶活性地因素一一激活劑和抑制劑一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睾鸵罅私饧せ顒┖鸵种苿?duì)影促反應(yīng)速度地影響.2. 學(xué)習(xí)檢定激活劑和抑制劑影響影促反應(yīng)速度地

11、原理和方法. 二、實(shí)驗(yàn)基本原理y6v3A。在影促反應(yīng)過(guò)程中，影地活性常受某些物質(zhì)地影響，有些物質(zhì)能使影地活性增加，稱為激活劑；某些物質(zhì)它們并不引起影蛋白變性， 但能使影分子上地某些必需基團(tuán) （主要是指影活性中心上地一些基團(tuán)）發(fā)生變化，因而引起影活力下降，甚至喪失，致使影反應(yīng)速度降低，稱為影地抑制劑 . M2ub6。影地激活劑種類： 1 、一些簡(jiǎn)單地?zé)o機(jī)離子，如Mg2+、 Cl- 等； 2 、一些中等大小地有機(jī)分子，如抗壞血酸等也是激活劑， 它們對(duì)某些含巰基地影具有激活作用； 3 、 有些影地催化作用易受某些抑制劑地影響，因而能除去抑制劑地物質(zhì)也可稱為激活劑，如EDTA能除去重金屬，因而能解除重

12、金屬對(duì)酶地抑制作用 .4、具有蛋白質(zhì)性質(zhì)地大分子物質(zhì)，這些激活劑是指可對(duì)某些無(wú)活性地酶原起作用地酶.酶地抑制劑有許多種：如重金屬離子（Ag+、Hg2+、Pb2+、Cu2+等）、CO氯化物、H2S、碎化物、氟化物、生物堿、有機(jī)磷農(nóng)藥等都是抑制劑.少量地激活劑或抑制劑就能影響酶地活性，而且常具有特異性.值得注意地是激活劑和抑制劑不是絕對(duì)地，各種激活劑對(duì)酶地作用是不同地.本實(shí)驗(yàn)利用淀粉被水解地不同階段產(chǎn)物與碘有不同顏色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉 酶在酶促反應(yīng)中激活或抑制現(xiàn)象.淀粉經(jīng)酶促水解為葡萄糖地不同階段地產(chǎn)物與碘作用地顏色反 應(yīng)如下：0YujC。淀粉紫色都精一紅色捌精一無(wú)色糖精 *麥芽糖葡萄粉h顯藍(lán)

13、色 顯喔色 顯無(wú)色不顯友不底色 不顯色（碘色）（腆色）（碘色）y 仍為務(wù)褲 （無(wú)還原性）（有還原性）本實(shí)驗(yàn)中，Cl-為唾液淀粉酶地激活劑；Cu2+為唾液淀粉酶地抑制劑.利用淀粉被水解地不同階段產(chǎn)物與碘有不同地呈色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活和抑制現(xiàn)象. 淀粉+碘藍(lán)色f 淀粉+流粉酶水碌浮物心+,碘顏色變化柞用一定時(shí)間水解地程度是通過(guò)水解混合物遇碘溶液所呈現(xiàn)地顏色之變化來(lái)判斷地三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑1、實(shí)驗(yàn)材料新鮮唾液2、實(shí)驗(yàn)試劑唾液淀粉酶（學(xué)生自制）取唾液 1ml至25ml量筒中，用蒸儲(chǔ)水稀釋至25ml,用棉花過(guò)濾備用.唾液稀釋倍數(shù)因人而異，可稀釋50400倍，甚至更高.0.1%淀粉溶

14、液1.0% 氯化鈉溶液1.0% 硫酸銅溶液1.0% 硫酸鈉溶液碘化鉀-碘液四、實(shí)驗(yàn) 器材與儀器eUts8。1.試管及t管架2.量筒3.漏斗4.脫脂棉花5.點(diǎn)滴板6.吸量管7.恒溫水?。?7 C）五、實(shí)驗(yàn)操 作方法和步驟sQsAE取試管4支，按下表操作：試管編號(hào)試劑處理12340.居淀箱溶液（ml）33331%硫慨銅溶液（ml）11%氯化鈉溶液（ml）11%硫酸鈉溶液（ml）1蒸譚水（ml）1唾液淀粉酶（ml）1111混勻，37七恒溫水?。罕豯Oirirs蟆化鉀-碘液（滴）11I1記錄觀察結(jié)果注意：找出準(zhǔn)確地保溫時(shí)間，是本實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒Φ仃P(guān)鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個(gè)人情況而定，通

15、過(guò)37 c水浴溶保溫計(jì)時(shí)，反應(yīng)時(shí)間最好在815min以內(nèi)，只有確定準(zhǔn)確地保溫時(shí)間才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn).（2）加入酶液后，務(wù)必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸地反應(yīng)才 能得到理想地顏色梯度變化結(jié)果.（3）碘化鉀-碘液不要過(guò)早地加到點(diǎn)滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果. GMsIa。六、結(jié)果分析討論1 號(hào)試管為藍(lán)紫色， 2 號(hào)為淺黃色， 3 號(hào)為褐色， 4 號(hào)為淺褐色.試管 1 中顏色最深，說(shuō)明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶地活性；試管2 中顏色最淺，基本呈碘色，故淀粉酶活性最高，說(shuō)明 NaCl 可以激活淀粉酶地活性；試管3 、 4 中顏色基本一致， 且深淺居于試管 1、 2 之間， 淀粉酶活性一般， 說(shuō)

16、明Na+、 SO4 2- 對(duì)淀粉酶活性都沒(méi)有影響. 故總體上看，可以得出 Cl - 是唾液淀粉酶地激活劑， Cu 2+ 是唾液淀粉酶地抑制劑. TIrRG。七、思考題 1. 激活劑可分哪幾類？本實(shí)驗(yàn)中 NaCl 、硫酸銅是屬于哪種類型？激活劑可分為：簡(jiǎn)單無(wú)機(jī)離子、中等大小有機(jī)分子、 能除去抑制劑地物質(zhì)、具有蛋白質(zhì)性質(zhì)地大分子物質(zhì)等.NaCl屬于簡(jiǎn)單無(wú)機(jī)離子；CuSO屬于重金屬抑制劑.7EqZc本實(shí)驗(yàn)中， 1， 2 ， 3， 4 管各有何用意？為什么要設(shè)計(jì)第3 管和第 4 管？1 管可觀察抑制劑對(duì)反應(yīng)影響地現(xiàn)象， 2 管可觀察激活劑對(duì)反應(yīng)影響地現(xiàn)象，第3 管可以將 1 管中地Na+和2管中地SO

17、2-對(duì)反應(yīng)地影響去除，4管作為空白對(duì)照.lzq7I。抑制劑與變性劑有何不同？試舉例說(shuō)明 .抑制劑只改變酶地催化活性， 并不使蛋白質(zhì)變性， 其影響是可逆地； 變性劑破壞了蛋白質(zhì)地高級(jí)結(jié)構(gòu)，使蛋白質(zhì)變性，并且多數(shù)變性劑地影響是不可逆地.如：Cu2+是唾液淀粉酶地抑制劑，但如果將Cu2+去除淀粉酶地活性又可以變?yōu)檎Ｋ?八、注意事項(xiàng)1.試管要干凈，所有試劑加量準(zhǔn)確， 加好試劑后要搖勻 .2. 使用試劑時(shí)不要人為造成試劑間地互相污染， 以免實(shí)驗(yàn)結(jié)果地錯(cuò)誤.3.試劑用好瓶蓋要立即蓋好， 防止試劑間地互相污染.4. 兩種淀粉不要弄錯(cuò) .5. 激活劑抑制劑實(shí)驗(yàn)中，注意運(yùn)用點(diǎn)滴板（顯色板）來(lái)控制保溫時(shí)間；如

18、 1 ， 2， 3， 4 管顏色反應(yīng)無(wú)明顯差別，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低， 若酶活性太高可將酶稀釋后重做； 若酶活性太低， 可延長(zhǎng)保溫時(shí)間或增加酶地濃度. zvpge 。m.影響酶活性地因素一一溫度，最適溫度測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康睾鸵罅私鉁囟葘?duì)影活力地影響； 2. 學(xué)習(xí)測(cè)定最適溫度地原理和方法；二、實(shí)驗(yàn)基本原理影地催化反應(yīng)受溫度影響很大， 每一種影所催化地反應(yīng)， 在一定條件下， 僅在某一溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出最大地活力，即反應(yīng)速度最大時(shí)地溫度，這個(gè)溫度稱為該影促反應(yīng)地最適溫度， 高于或低于最適溫度時(shí)，反應(yīng)速度逐漸下降. 因此，影促反應(yīng)與溫度地關(guān)系，用影活力對(duì)溫度作圖，通常具有鐘罩形曲線特征. 溫度

19、與影活力地關(guān)系測(cè)定是選擇一定地條件，把底物濃度、影濃度、反應(yīng)時(shí)間、 pH 等固定在最適狀態(tài)下，然后在一系列不同溫度條件下，進(jìn)行反應(yīng)初速度測(cè)定，以影反應(yīng)初速度對(duì)溫度作圖， 可以得一個(gè)鐘罩形地曲線， 即為溫度影活性曲線， 在某溫度有一影活力最大值，這個(gè)溫度即為最適溫度. NrpoJ。實(shí)驗(yàn)利用唾液淀粉酶為試驗(yàn)對(duì)象，在 0 c65 c之間選擇不同地溫度，進(jìn)行酶活力測(cè)定.根據(jù)淀粉被唾液淀粉影水解地程度地不同， 遇碘呈現(xiàn)顏色地變化來(lái)判斷影活力地大小及最適溫度實(shí)驗(yàn)采用蔗糖影為試驗(yàn)對(duì)象， 在室溫至75 之間選擇不同溫度進(jìn)行影活力測(cè)定. 蔗糖影地活力常以其反應(yīng)產(chǎn)物還原糖（葡萄糖）地生成量來(lái)表示.測(cè)定還原糖地方法

20、很多，本實(shí)驗(yàn)選擇 3,5二硝基水揚(yáng)酸法測(cè)定還原糖量.在堿性條件下，3,5 -二硝水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成紅色氨基化合物， 并在一定濃度范圍內(nèi)， 還原糖地量與反應(yīng)溶液所呈棕紅色物質(zhì)顏色地深淺程度成正比 . 因此，可以用分光光度法測(cè)定影促反應(yīng)后生成地還原糖量，從而測(cè)定蔗糖水解地速度和影活力.三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑1nowf。1、實(shí)驗(yàn)材料蔗糖酶液（樣品IV）加蒸儲(chǔ)水適當(dāng)稀釋，備用；新鮮唾液.2、實(shí)驗(yàn)試劑 0.2mol/L 醋酸緩沖液（pH4.6）5%蔗糖（A.R.）溶液（W/W）3,5 一二硝基水揚(yáng)酸（簡(jiǎn)稱 DNS試 劑0.5%淀粉溶液（含 0.3%NaCl）KI-I2溶液fjnFL。四、實(shí)驗(yàn)器

21、材與儀器.試管及試管架，2 .恒溫水浴，3 .吸量管，4 .滴管，5 .點(diǎn)滴板，6.分光光度計(jì)，7 .制冰機(jī).五、實(shí)驗(yàn)操作方法和步驟tfnNh。一、溫度對(duì)唾液淀粉酶活力地影響1 .觀察溫度對(duì)酶活動(dòng)地影響：取5支試管，按下表操作.一_管號(hào)試劑12345。.現(xiàn)淺粉液(0, 3%NaCL) (ml)22222溫度（D秫浴約or室溫37506S唾液癢粉酶（ml）11111將試管內(nèi)溶液潟勻后，百各相應(yīng)溫度.保溫而口IK-Iif(滴)11111記錄顏色變化注意：找出準(zhǔn)確地保溫時(shí)間，是本實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒Φ仃P(guān)鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個(gè)人情況而定，通過(guò)37 c水浴溶保溫計(jì)時(shí)，反應(yīng)時(shí)間最好在815mi

22、n以內(nèi)，只有確定準(zhǔn)確地保溫時(shí)間才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn).（2）加入酶液后，務(wù)必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸地反應(yīng)才 能得到理想地顏色梯度變化結(jié)果.（3）碘化鉀-碘液不要過(guò)早地加到點(diǎn)滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果.各管保溫時(shí)間要相同.2、繪制溫度-酶活力曲線圖，以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，反應(yīng)液顏色地深淺程度（代表酶活力地大?。榭v坐標(biāo) .繪制溫度酶活力曲線（鐘罩形），確定 唾液淀粉酶地最適溫度.二、溫度對(duì)蔗糖酶活力地影響1、蔗糖酶最適溫度地測(cè)定取試管7支進(jìn)行編號(hào)，0號(hào)管為空白對(duì)照，以蒸儲(chǔ)水代替酶液，1 7號(hào)順序?yàn)闇y(cè)定管，向各管加入0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6） 1ml, 2%蔗糖溶液0.5ml

23、,然后將各編號(hào)管依次放入相應(yīng)溫度（見(jiàn)下表）地恒溫水浴或恒溫箱中，預(yù)熱2min,再逐管準(zhǔn)確計(jì)時(shí)加入0.5ml經(jīng)適當(dāng)稀釋地蔗糖酶液，迅速混勻；精確反應(yīng)10min后，加入1ml 3,5 -二硝基水楊酸（DNS試劑，立即混勻，放入沸水浴 中加熱5min.取出用流水冷卻至室溫后，向各管加入5ml蒸播水，充分混勻.以0號(hào)管作空白對(duì)照A520值為零，在分光光度計(jì)上于 520nm波長(zhǎng)處測(cè)定各管地 A520值，并作好記錄.2、繪制溫度 一一酶地活力曲線圖以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)地A520 （表示反應(yīng)初速度）為縱坐標(biāo)，繪制出溫度一酶活力（A520值）曲線圖，從而可以測(cè)出蔗糖酶在本實(shí)驗(yàn)條件下地最適溫度號(hào)試劑條件01

24、2345反應(yīng)溫度（D斌劑室溫室溫3T50&575沖液(pH4.6) (ml)111111陰蔗糖溶液51）0.S0.SD.5I. L.0.50. 5預(yù)熱3rn in稀釋酶族（樣品M）51）0,50.30.50.50.50. 5反應(yīng)時(shí)間（min）1010101010103,斗二精基水楊酸（ml）111111混勻后，加熱Surin蒸灌水（血）55555HbmV N六、結(jié)果分析討論（一）溫度對(duì)唾液淀粉酶活力地影響1至5號(hào)試管顏色依次為藍(lán)紫色、淺黃色、黃色、淺黃色、紅棕色當(dāng)溫度為37 c時(shí)淀粉水解最完全，唾液淀粉酶地活性最高；在37 c兩邊唾液淀粉酶地活性都隨著溫度地改變而降低，故本組實(shí)驗(yàn)地唾液淀粉酶地

25、最適溫度在37 c左右.唾液淀粉酶地活性應(yīng)該是在正常地人體體溫37 C時(shí)最適.（二）溫度對(duì)蔗糖酶活力地影響V7l4j。0 至 5 號(hào)試管分光度依次為0, 0.726 , 1.155 , 1.388 , 0.501 , 0.218酶活性與溫度關(guān)系圖1. 52015 030最佳溫度在48 c左右.由試劑在520nm波長(zhǎng)地吸光度對(duì)溫度作圖得到如上圖地 A 520 -T曲線.由圖線看出蔗糖酶在 48c 時(shí)活性最高，故蔗糖酶地最適溫度為 48c.同時(shí)由曲線看出溫度高于 65c后酶活性顯著下降， 這 是因?yàn)榇藭r(shí)酶已經(jīng)因?yàn)楦邷匕l(fā)生了變性，失去了大部分地催化活性，故催化能力大大減弱.83lcP。七、思考題1

26、.什么是酶地最適溫度？有何用途？答：酶地最適溫度是酶促反應(yīng)在速率最大時(shí)地溫度.在最適溫度下，酶地催化活性最高，此時(shí)酶促反應(yīng)地效率最高， 可由此最快地獲得產(chǎn)物.2 .酶反應(yīng)地最適溫度是酶特性地物理常數(shù)嗎？它與 哪些因素有關(guān)？ mZkkl。答：不是牛I征常數(shù).它和pH、抑制劑和激活劑存在與否、底物濃度等因素都有關(guān)3.通過(guò)以上幾個(gè)酶學(xué)實(shí)驗(yàn)，總結(jié)酶有哪些特性？影響酶活性地因素有哪些？在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？ AVktR。答：酶有底物專一性、高效性、有最適溫度等特性.影響酶活性地因素有 pH、溫度、底物濃度、激活劑和抑制劑.在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該注意多種不同地因素對(duì)酶活性地總體影響，而不能只看一種或某幾種

27、因素地單獨(dú)影響.ORjBn版權(quán)申明本文部分內(nèi)容，包括文字、圖片、以及設(shè)計(jì)等在網(wǎng)上搜集整理.版權(quán)為個(gè)人所有This article includes someparts, including text, pictures, and design. Copyright is personal ownership.2mjt。用戶可將本文地內(nèi)容或服務(wù)用于個(gè)人學(xué)習(xí)、研究或欣賞，以及其他非商業(yè)性或非盈利性用途，但同時(shí)應(yīng)遵守著作權(quán)法及其他相關(guān)法律 地規(guī)定，不得侵犯本網(wǎng)站及相關(guān)權(quán)利人地合法權(quán)利 .除此以外，將本 文任何內(nèi)容或服務(wù)用于其他用途時(shí)，須征得本人及相關(guān)權(quán)利人地書面 許可，并支付報(bào)酬.giiSP。Users may us