光鏡與電鏡技術(shù)2、光學(xué)顯微鏡

1、光鏡與電鏡技術(shù)上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 周平凡 第一部分：光學(xué)顯微鏡第二部分：電子顯微鏡光鏡與電鏡技術(shù)教 材電子顯微鏡技術(shù)與應(yīng)用實(shí)用生物醫(yī)學(xué)電子顯微鏡技術(shù)參考書(shū)：植物顯微技術(shù)一、教 學(xué)第一部分光學(xué)顯微鏡技術(shù)與電子顯微鏡理論第二部分透射電鏡原理、結(jié)構(gòu)與操作第三部分掃描電鏡原理、結(jié)構(gòu)與操作第四部分電鏡樣品制備與超薄切片技術(shù)二、實(shí) 驗(yàn)光學(xué)顯微鏡成象系統(tǒng)調(diào)整與使用光學(xué)顯微鏡制樣與拍攝掃描電鏡樣品的脫水與干燥、粘樣與鍍膜(演示)透射電鏡照明系統(tǒng)與成像系統(tǒng)合軸等(暫停)掃描電鏡燈絲飽和點(diǎn)、曝光曲線調(diào)節(jié)等(暫停)透射電鏡消像散與拍攝(暫停)掃描電鏡消象散與拍攝(演示)載網(wǎng)支持膜制備、玻璃刀制作與超薄切片機(jī)

2、使用(暫停)顯微鏡的發(fā)展一、光學(xué)顯微鏡 顯微鏡理論、制作和應(yīng)用的發(fā)展從十五世紀(jì)開(kāi)始逐漸發(fā)展起來(lái)的。1674年荷蘭人用自制的顯微鏡為人類打開(kāi)了微觀世界的大門(mén)。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的歷史1590年 荷蘭的眼鏡匠詹森父子發(fā)明了世界上第一臺(tái)光學(xué)顯微鏡1660年 羅伯特胡克改良了復(fù)合顯微鏡，第一次發(fā)現(xiàn)了植物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)1685年 荷蘭商人列文虎克在顯微鏡中加了一塊透鏡，使得放大倍率達(dá)到了200多倍，借助這臺(tái)顯微鏡，他觀察到了細(xì)菌、浮游生物等，成為了第一個(gè)發(fā)現(xiàn)微生物的人 顯微鏡的發(fā)明 使人類更深刻地揭示了自然界的奧秘，推動(dòng)了各學(xué)科的發(fā)展，反過(guò)來(lái)由于科學(xué)的發(fā)展，又促進(jìn)了顯微鏡技術(shù)的改進(jìn)，使之日趨完善。顯微鏡設(shè)

3、計(jì)與制造現(xiàn)代多為光、機(jī)、電的三結(jié)合體。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡根據(jù)照明光源的性質(zhì)可為兩大類：光學(xué)顯微鏡利用人眼可見(jiàn)光(包括不可見(jiàn)的紫外光線)作為光源的而謂之。根據(jù)結(jié)構(gòu)、附件、原理、性能以及應(yīng)用范圍的不同又可分為多種類型。光學(xué)顯微鏡的分辨率約為0.2-0.4毫微米，最高放大率為1500倍左右。一、光學(xué)顯微鏡非光學(xué)顯微鏡利用電子束作為光源，根據(jù)“軸對(duì)稱的電磁場(chǎng)對(duì)電子束起著透鏡作用這一理論制成所謂的“電磁透鏡”，即為電子顯微鏡。電子顯微鏡的分辨率約為幾個(gè)埃，放大率可達(dá)幾百萬(wàn)倍左右。一、光學(xué)顯微鏡 顯微鏡的種類繁多，根據(jù)應(yīng)用范圍可分三大類：生物顯微鏡應(yīng)用范圍最廣，種類最多，是一類極為重要的研究工具。金相顯

4、微鏡工業(yè)檢測(cè)顯微鏡歸納光學(xué)顯微鏡的分類有：1、單式顯微鏡：各種放大鏡、平臺(tái)解剖鏡2、復(fù)式顯微鏡：普通型（小型教學(xué)用），特種型（中 型研究用），高級(jí)型（大型聯(lián)機(jī)多用途研究）一、光學(xué)顯微鏡根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能可分為普通型：供一般常規(guī)鏡撿、教學(xué)和研究用，如通常的復(fù)式顯微鏡。特種型：利用不同的光學(xué)原理設(shè)計(jì)而制作的顯微鏡，而且是供某種專門(mén)觀察和研究之用。如暗場(chǎng)、相襯、偏光、微分干涉、螢光、體視、例置、比較、金相、顯微攝影、電視顯示、電影攝影顯微鏡等。高級(jí)型：萬(wàn)能顯微鏡，指大型多用途、附件較齊全、物鏡及目鏡等光學(xué)部件均高級(jí)的顯微鏡。特種型及高級(jí)型: 性能較高，而且應(yīng)用于不同的研究目的，以達(dá)到特定的研究效果。又稱

5、為“研究用顯微鏡”。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的幾個(gè)基本概念一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的作用是一種處理波的工具，是處理可見(jiàn)光及近可見(jiàn)光波段的波，使之成束地照射在被檢物體上。其成象落在人眼的視網(wǎng)膜、感光片或其它記錄系統(tǒng)(如電視顯示或電影)上，突破了人類生理的限制。把視覺(jué)伸展到人眼不能分辨的微觀世界中去。用來(lái)觀察、記錄和研究經(jīng)過(guò)制片技術(shù)處理后的被檢物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。對(duì)微觀世界的探索及理論上的研究起著極其重要的作用。廣泛地應(yīng)用于各學(xué)科的領(lǐng)域中。一、光學(xué)顯微鏡人眼的重要性人眼具有敏捷的性能，視覺(jué)傳入大腦的信息約占各種信息的80，其高度的準(zhǔn)確性、靈敏度、分辨力和適應(yīng)性等方面，至今在理論上尚未完全解釋清楚。人眼的局限性

6、 不能看清很遠(yuǎn)或太小的物體。對(duì)所觀察到的物體的形狀、大小和遠(yuǎn)近，不能作出精確的定量比較和計(jì)量。對(duì)發(fā)生在瞬間的現(xiàn)象或事物不能留下長(zhǎng)久的記錄。只能感受光譜中很窄的可見(jiàn)光（波長(zhǎng)約為400-700毫微米）范圍內(nèi)的電磁波。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的組成一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡的組成均由單個(gè)和多個(gè)透鏡組成，即由物鏡、目鏡及聚光鏡等部件。透鏡是組成顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)的最基本的光學(xué)原件。透鏡依其外形的不同可分為兩大類1、凸透鏡（又稱會(huì)聚透鏡、正透鏡）2、凹透鏡（又稱散發(fā)透鏡、負(fù)透鏡）一、光學(xué)顯微鏡透鏡成象凸透鏡在物方所成的象是光線真正的交點(diǎn)，稱為“實(shí)象”。實(shí)象在屏幕上能顯現(xiàn)出來(lái)，而虛象則不

7、能，但當(dāng)我們用眼睛對(duì)著透鏡觀察時(shí)，則完全能看到它。凹透鏡所形成的象是與物體處在同一方，稱為“虛象”。虛象當(dāng)一束平行于光軸的光線通過(guò)凹透鏡后，形成散射光，在象方空間不能相交于一點(diǎn)，只有它們的延長(zhǎng)線才能在物方空間相交于一點(diǎn)，這個(gè)點(diǎn)稱“虛焦點(diǎn)”，這個(gè)平面稱“虛焦點(diǎn)平面”。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的成象原理一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的成象原理當(dāng)物體位于透鏡物方二倍焦距以內(nèi)，焦點(diǎn)以外時(shí)，則在象方二倍焦距以外形成放大的倒立實(shí)象；當(dāng)物體位于透鏡物方焦點(diǎn)以內(nèi)時(shí)，則像方也無(wú)象的形成，而在透鏡物方的同側(cè)比物體遠(yuǎn)的位置形成放大的直立虛象。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡成象原理圖一、光學(xué)顯微鏡。透鏡的成象質(zhì)量透鏡所形成的象除了象的位置、

8、大小、倒正、虛實(shí)之外還有成象的質(zhì)量問(wèn)題，也就是說(shuō)，物體通過(guò)透鏡后所成的象與理想象上的差異。所產(chǎn)生的象差將直接影響顯微鏡成象的清晰度和象的變形。透鏡所形成的象，應(yīng)滿足幾何相似的要求點(diǎn)的象應(yīng)為一點(diǎn)直線的象應(yīng)為一直線平面的象應(yīng)為一平面一、光學(xué)顯微鏡光具有的物理性質(zhì)折射和折射率光線在均勻的各向同性介質(zhì)中，二點(diǎn)之間應(yīng)以直線傳播，當(dāng)通過(guò)不同密度介質(zhì)的透明物體時(shí)，則會(huì)發(fā)生折射現(xiàn)象，這是由于光在不同介質(zhì)中的傳播速度不同所造成的。 不同介質(zhì)的折射率空氣 1.0水 1.33甘油 1.405一、光學(xué)顯微鏡“象差”的概念一、光學(xué)顯微鏡影響透鏡成象質(zhì)量的因素從一點(diǎn)發(fā)出的光束在通過(guò)透鏡后，光束的同心性或多或少地受到破壞（

9、由光具有的物理性質(zhì)及使用的光源的特點(diǎn)以及光具的制作技術(shù)而造成），在象空間并不相交于一點(diǎn)，而是分布在一個(gè)很小的區(qū)域內(nèi)，所形成的象與理想象在形狀、顏色上有著一定的差異，這種差異稱為“象差”（Aberration）。一、光學(xué)顯微鏡六種象差的變形情況：1、色 差2、球 差3、像 散4、慧形差5、場(chǎng) 曲6、畸 變一、光學(xué)顯微鏡無(wú)色差有色差1、色差一、光學(xué)顯微鏡2、球差一、光學(xué)顯微鏡3、像散一、光學(xué)顯微鏡4、慧形象差一、光學(xué)顯微鏡5、場(chǎng)曲一、光學(xué)顯微鏡6、畸變一、光學(xué)顯微鏡色差的校正采用單色光作為光源，如采用綠色光；但不能避免球差。利用凸、凹透鏡兩者所產(chǎn)生的色差型彼此相反，同時(shí)采用色散力不同而折射率相同的

10、兩種玻璃，分別作成凸凹透鏡，將其膠合起來(lái)以消除色差。消色差物鏡用光學(xué)樹(shù)脂膠合起來(lái)做成透鏡組校正色差的產(chǎn)生。復(fù)消色差物鏡用各種品種的玻璃以及繭石作成透鏡組，可將三種光素(紅、綠、藍(lán))會(huì)聚在一點(diǎn)，這樣便有效地降低了各焦點(diǎn)和剩余顏色的色差。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡各項(xiàng)光學(xué)的技術(shù)參數(shù)一、光學(xué)顯微鏡 顯微鏡各項(xiàng)光學(xué)技術(shù)參數(shù)數(shù)值孔徑、分辨率、放大率、焦深、視場(chǎng)寬度、復(fù)蓋差、工作距離、圖像亮度、視場(chǎng)亮度等。合理使用參數(shù)各項(xiàng)參數(shù)并不都是越高越好，在使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)鏡檢的目的和實(shí)際情況來(lái)協(xié)調(diào)各參數(shù)之間的關(guān)系，以保證分辨率為準(zhǔn)。 一、光學(xué)顯微鏡數(shù)值孔徑（NA）又稱“鏡口率”、“開(kāi)口率”，簡(jiǎn)寫(xiě)NA或A。是物鏡和聚光鏡的主

11、要技術(shù)參數(shù)，是判斷其性能高低的重要標(biāo)志。數(shù)值的大小分別標(biāo)刻在物鏡和聚光鏡的外殼上。物鏡數(shù)值孔徑（NA）是前透鏡與被檢物體之間介質(zhì)的折射率（）和孔徑角（）半數(shù)的正弦之積。用公式表示為NASin（/2）。物鏡的數(shù)值孔徑（NA）一般在0.85-1.4之間。一、光學(xué)顯微鏡聚光鏡數(shù)值孔徑（NA） 一般在0.05-1.4范圍內(nèi)變化，它可通過(guò)調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小來(lái)改變NA值的大小，從而達(dá)到與物鏡NA值相匹配。有的聚光鏡可以把上透鏡推出光路，NA值則下降。聚光鏡的正確使用在觀察時(shí)，聚光鏡的NA值應(yīng)等于或略大于物鏡的NA值；在顯微照相時(shí)，則應(yīng)小于物鏡的NA值。一、光學(xué)顯微鏡分辨率又稱“鑒別率”、“解象力”和“分辨

12、本領(lǐng)”.是衡量顯微鏡性能的又一個(gè)重要技術(shù)參數(shù)。分辨本領(lǐng)：德國(guó)著名理論光學(xué)家Abbe早在100多年前就給出分辨本領(lǐng)：=0.61/nSin式中，n為物體所處媒介的折射率；為孔徑角；為發(fā)射光波長(zhǎng)。一、光學(xué)顯微鏡人眼的分辨本領(lǐng)在照明良好的情況下，能分辨約0.1mm距離的兩物體點(diǎn)。顯微鏡的分辨本領(lǐng)最小分辨距離也有一定限度，理論計(jì)算為物鏡能分辨約0.2m距離的兩物體點(diǎn)。一、光學(xué)顯微鏡 有效放大率把由顯微鏡的分辨本領(lǐng)所能分辨開(kāi)的兩點(diǎn)間的距離，放大成相當(dāng)于人眼能分辨的距離。人眼的分辨本領(lǐng)大致為0.1mm,所以分辨本領(lǐng)為0.2m的顯微鏡，其有效放大率是 0.11000/0.2=500倍。顯微鏡觀察物體時(shí)，把物體

13、的像放大到超過(guò)肉眼已能詳細(xì)辨認(rèn)細(xì)節(jié)的程度是沒(méi)有必要的。一、光學(xué)顯微鏡 放大率的概念放大率即為放大倍數(shù),是指被撿物鏡經(jīng)物體放大再經(jīng)目鏡放大后，人眼所看到的最終圖象的大小對(duì)原物體大小的比值。是物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。是指長(zhǎng)度的放大，而不是指面積的放大。物鏡和目鏡的放大倍數(shù)均標(biāo)刻在其外殼上?？偡糯舐?M)物鏡放大率(Mob)x目鏡放大率(Moc) 一、光學(xué)顯微鏡 物鏡與目鏡的合理使用觀察時(shí)應(yīng)在有效放大率的范圍內(nèi)來(lái)選擇。使用100X的物鏡時(shí)，應(yīng)使用6.7X或10X的目鏡較好，如用5X目鏡則達(dá)不到人眼所能分辨的大?。挥?0X的目鏡則為無(wú)效放大。在觀察時(shí)，一般使用10X的目鏡為好，愈是高級(jí)的研究用顯微鏡

14、常配置二對(duì)10X的目鏡，10X目鏡為“標(biāo)準(zhǔn)目鏡”。作高倍鏡撿時(shí)，首先應(yīng)考慮更換物鏡，而不要盲目更換過(guò)高倍率的目鏡。 一、光學(xué)顯微鏡 兩組物鏡與目鏡配合使用比較20X（物鏡0.40NA）與20X（目鏡）搭配使用圖象質(zhì)量欠佳40X（物鏡0.65NA）與10X（目鏡）搭配使用圖象質(zhì)量?jī)?yōu)良中間鏡在研究用顯微鏡中，目鏡與物鏡之間若有中間鏡，則總放大率應(yīng)再乘以中間鏡的放大倍數(shù)。一、光學(xué)顯微鏡焦深焦深為焦點(diǎn)深度的簡(jiǎn)稱，即在使用顯微鏡時(shí)，當(dāng)焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)某一物體點(diǎn)時(shí)，不僅位于該點(diǎn)平面上的各點(diǎn)都可看清楚，而且在此平面的上下一定厚度內(nèi)，也能看得清楚，這個(gè)清晰部分的厚度就是焦深。焦深大，可看到被檢物體的全層，而焦深小，則

15、只能看到被檢物體的一薄層。焦深與總放大倍率及物鏡的數(shù)值孔徑值成反比。放大倍率愈高，數(shù)值孔徑值愈大，焦深則愈小。一、光學(xué)顯微鏡視場(chǎng)直徑也稱視場(chǎng)寬度或視場(chǎng)范圍，是指在顯微鏡下看到的圓形視場(chǎng)內(nèi)所能容納被檢物體的實(shí)際范圍。視場(chǎng)直徑大小是由目鏡里的視場(chǎng)光闌所限定。視場(chǎng)直徑愈大，愈便于觀察。使用廣角目鏡可以增大視場(chǎng)直徑。增大物鏡的倍率，視場(chǎng)直徑減小。一、光學(xué)顯微鏡復(fù)蓋差由于蓋玻片的厚度不標(biāo)準(zhǔn)，光線從蓋玻片進(jìn)入空氣產(chǎn)生折射后的光路發(fā)生了改變，從而產(chǎn)生了象差，這就是復(fù)蓋差。復(fù)蓋差的產(chǎn)生影響了顯微鏡的成象質(zhì)量。蓋玻片的標(biāo)準(zhǔn)厚度為0.17mm，允許范圍在0.160.18mm。物鏡外殼上標(biāo)刻的0.17，即表明該物鏡

16、所要求蓋玻片的厚度。低倍物鏡不受蓋玻片影響，使用油鏡時(shí)蓋玻片不能太厚。一、光學(xué)顯微鏡鏡象亮度與視場(chǎng)亮度鏡象亮度是顯微鏡的圖像亮度的簡(jiǎn)稱，指在顯微鏡下所觀察到圖象的明暗程度。使用時(shí)，對(duì)鏡象亮度的要求，一般是使眼睛既不感到暗淡，又不耀眼，使眼睛不感到疲勞為好。鏡象亮度對(duì)于在高倍鏡下觀察和顯微攝影及投影時(shí)尤為重要，如果沒(méi)有足夠的鏡象亮度，顯微照相要延長(zhǎng)曝光時(shí)間，顯微投影屏上的圖象也因暗淡，從而影響觀察。一、光學(xué)顯微鏡工作距離工作距離也叫物距，即指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離，它與焦距是兩個(gè)概念。調(diào)焦實(shí)際上是調(diào)節(jié)工作距離。物鏡倍數(shù)小，其工作距離長(zhǎng)；反之，孔徑大的高倍物鏡，其工作距離短。研究用顯

17、微鏡的物鏡前透鏡處帶有彈簧裝置，顯微鏡的機(jī)械部分也加有“限位裝置”。倒置顯微鏡其工作距離可達(dá)14mm，體視顯微鏡的工作距離可達(dá)20mm。一、光學(xué)顯微鏡高低倍物鏡工作距離的比較一、光學(xué)顯微鏡物鏡的使用方法一、光學(xué)顯微鏡物鏡物鏡是顯微鏡最重要的光學(xué)部件，物鏡最前面的透鏡稱“前透鏡”，最后面的透鏡稱后透鏡”。物鏡復(fù)合透鏡組的總焦距為物鏡的焦距。物鏡前透鏡與被檢物體之間的距離稱為工作距離。在高倍鏡檢時(shí)，為了防止壓碎玻片和損傷物鏡，除物鏡的前端裝有彈簧裝置外，低倍至高倍物鏡必須齊焦。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡不同種類的物鏡 干燥系物鏡即放大率為1,2,4,10,20,40,60X的物鏡。鏡檢時(shí)物鏡前透

18、鏡與蓋玻片之間以空氣（n1）為介質(zhì)。油浸系物鏡即放大率為90、100X油鏡。鏡檢時(shí)物鏡前透鏡與蓋玻片之間以香柏油、無(wú)熒光油（n1.5左右）為介質(zhì)。該類鏡物外殼上常標(biāo)刻有“Oil”、“IL”或“HI”字樣。一、光學(xué)顯微鏡平場(chǎng)物鏡平場(chǎng)消色差物鏡在鏡頭的外殼上標(biāo)有P1an ACF。平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡在鏡頭的外殼上標(biāo)有P1an AFO。平場(chǎng)半復(fù)消色差物鏡外殼上標(biāo)刻有P1an SAO。超平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡外殼上標(biāo)刻有SP1an SAO。特種物鏡帶校正環(huán)物鏡校正由蓋玻片厚度不標(biāo)準(zhǔn)所引起的復(fù)蓋差。帶虹彩光闌物鏡在物鏡鏡筒內(nèi)的上部裝有虹彩光闌，增大焦深的作用。一、光學(xué)顯微鏡相襯物鏡用于相襯鏡檢術(shù)的專用物鏡，其特點(diǎn)

19、是在物鏡的后焦點(diǎn)平面處裝有相板。無(wú)熒光物鏡專用于落射式熒光顯微鏡上的物鏡，這種物鏡即使受到很強(qiáng)的激勵(lì)光源也不發(fā)出熒光。“UV、FL”字樣作為標(biāo)志。長(zhǎng)工作距離物鏡是倒置顯微鏡的專用物鏡。一、光學(xué)顯微鏡目鏡目鏡的作用是把物鏡放大的實(shí)象（中間象）再放大一次，并把物象映入觀察者的眼中，實(shí)質(zhì)上目鏡就是一個(gè)放大鏡。目鏡的種類惠更斯目鏡這是最常應(yīng)用的一種目鏡，由平凸單透鏡組成，凸面都朝下，視場(chǎng)光闌位于兩透鏡之間，被廣泛地用于普通生物顯微鏡上，不能滿足高級(jí)研究鏡檢的要求。冉姆斯登目鏡由兩塊平凸透鏡相隔一定距離組成，兩塊透鏡的凸面相對(duì)，這比惠更斯目鏡優(yōu)越，便于觀察。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡不同種類的目鏡凱爾

20、勒目鏡接目鏡是由兩片透鏡膠合而成，是一種消色差的目鏡，圖象質(zhì)量進(jìn)一步得到改善。平場(chǎng)目鏡增加了一塊負(fù)透鏡，能校正場(chǎng)曲的缺陷，而使視場(chǎng)平坦。在目鏡的外側(cè)或端面常標(biāo)刻“P1an”或“P”字樣，適用于觀察和顯微相照。廣視場(chǎng)目鏡由多片透鏡構(gòu)成，在研究用顯微鏡中多為此種目鏡。標(biāo)刻有“W”或“WF”和WHK字樣。在高檔研究用顯微鏡上，有的還配置超廣視場(chǎng)目鏡，視場(chǎng)范圍更大，更便于觀察，目鏡外側(cè)標(biāo)有“SWK”字樣。一、光學(xué)顯微鏡照相目鏡專供顯微照相和投影之用，不能用于觀察。它的特點(diǎn)是視場(chǎng)平坦，可校正物鏡的殘留色差，放大倍率一般在2.5X6.7X之間不等倍率的目鏡。其它目鏡有比較目鏡、投影目鏡、指示目鏡、測(cè)微目鏡

21、及網(wǎng)格目鏡等這些目鏡是作為顯微鏡的一種附件，專用于某項(xiàng)特殊的用途。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡聚光鏡的使用聚光鏡彌補(bǔ)光量的不足和適當(dāng)改變從光源射來(lái)的光線性質(zhì)，將光線聚焦于被檢物體上，以得到最強(qiáng)的照明光線。 聚光鏡的結(jié)構(gòu)形式類型阿貝聚光鏡由兩片透鏡組成，有著較好的聚光能力，多用于普通顯微鏡上。消色差等光程聚光鏡由一系列透鏡組成（5、7片），是明場(chǎng)鏡檢中質(zhì)量最高的一種聚光鏡，高級(jí)研究用顯微鏡配用。一、光學(xué)顯微鏡搖出式聚光鏡在低倍物鏡時(shí)(如4X)使用，數(shù)值孔徑可從0.16-0.90改變。極低倍聚光鏡與極低倍物鏡(如1X、2x)配合使用的聚光鏡，其數(shù)值孔徑最大值為016。其它聚光鏡暗場(chǎng)聚光鏡、相襯聚光

22、鏡、偏光聚光鏡、微分干涉聚光鏡、長(zhǎng)工作距離聚光鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡不同種類的聚光鏡顯微鏡的透射式照明法的正確使用一、光學(xué)顯微鏡照明裝置透射式照明又稱反射式照朋，分中心照明和斜射照明兩種形式，適用于透明或半透明的被檢物體，落射式照明適用于非透明的被檢物體。中心照明是最常用的透射式照明法，它又分為“臨界照明”和“柯勒照明”兩種。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡臨界照明普通的照明法，不適用于顯微照相?？吕照彰鬟@種照明的熱焦點(diǎn)不在被撿物體的平面處，即使長(zhǎng)時(shí)間的照明，也不致?lián)p傷被撿物體。是成功進(jìn)行顯微照相必須的一種照明法，在視場(chǎng)內(nèi)看不到燈絲的象，使照明變得均勻。觀察時(shí)，應(yīng)把視場(chǎng)光闌開(kāi)

23、啟到視場(chǎng)周緣的外切處，使不在物鏡視場(chǎng)內(nèi)的物體得不到任何光線的照明，避免散射光的干擾。一、光學(xué)顯微鏡斜射照明這種照明光束的中軸與顯微鏡的光軸不在一直線上，而是與光軸形成某種角度斜射照射到被檢物體上。又可分為：明場(chǎng)斜射照明光束經(jīng)聚光鏡后，斜射被檢物體而進(jìn)入物鏡如相襯顯微術(shù)。暗場(chǎng)斜射照明光束是以更大的傾斜度射向被檢物體后不直接進(jìn)入物鏡，而由物體表面所反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡如暗視野顯微術(shù)。一、光學(xué)顯微鏡落射式照明又稱“反射式”或“垂直式”照明。這種照明的光束來(lái)自物體的上方，通過(guò)物鏡后射到被檢物上，這樣物鏡又起著聚光鏡的作用。適用于非透明物體，如金屬、礦物以及大而厚的生物樣品的鏡檢。在高級(jí)熒光顯微鏡及

24、大型研究用顯微鏡中，除透射照明裝置外，還設(shè)有落射照明裝置。體視顯微鏡的落射照明是利用自然光或照明燈具由側(cè)上方斜向照射被檢物體。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的光軸調(diào)節(jié)在顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中，光源、聚光鏡、物鏡和目鏡的光軸以及光闌的中心必須與顯微鏡的光軸同在一直線上。一、光學(xué)顯微鏡柯勒照明的調(diào)整步驟必須用10 x物鏡觀察。先將聚光鏡的視場(chǎng)光闌縮小并進(jìn)行中心調(diào)正。在視場(chǎng)內(nèi)可見(jiàn)到視場(chǎng)光闌的輪廓象，如不在視場(chǎng)的中央，則利用聚光鏡外側(cè)的兩個(gè)調(diào)正螺絲將其調(diào)正至中央部分。當(dāng)緩慢地增大視場(chǎng)光闌時(shí)，能看到光束兩視場(chǎng)周緣均勻展開(kāi)直至視場(chǎng)光闌的輪廓象完全與視場(chǎng)邊緣內(nèi)接，說(shuō)明已經(jīng)臺(tái)軸。合軸后再略為增大視場(chǎng)光闌，使輪廓象剛好處于視

25、場(chǎng)外切或稍大一些，這樣最適于作觀察之用。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡常用顯微鏡UIS2光學(xué)系統(tǒng)平行光路設(shè)計(jì)，可以自由添加光學(xué)附件 高性能光學(xué)元件 獨(dú)特的離子沉淀鍍膜技術(shù) 人性化外形設(shè)計(jì)，環(huán)保材料顯微鏡的各種觀察方式各種觀察方式1.明場(chǎng)觀察BF2.暗場(chǎng)觀察DF3.相差觀察PH4.偏光觀察PO5. 微分干涉觀察DIC6. 浮雕相襯觀察RC7.熒光觀察FL現(xiàn)代顯微鏡的款式與發(fā)展動(dòng)態(tài)一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡原子力顯微鏡的技術(shù)指標(biāo)一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、

26、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、高級(jí)顯微鏡(研究用顯微鏡圖譜)(一)明場(chǎng)觀察方式常規(guī)觀察方式應(yīng)用領(lǐng)域：常規(guī)鏡檢、病理、染色標(biāo)本優(yōu)點(diǎn)：視野亮度高、均勻，應(yīng)用范圍廣，操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低，物鏡適用于熒光觀察缺點(diǎn)：透明標(biāo)本對(duì)比度低，標(biāo)本沒(méi)有立體感(一)明場(chǎng)觀察方式光強(qiáng)的調(diào)節(jié)和色溫： 1. LBD日光平衡濾色片 2. 通過(guò)調(diào)節(jié)電壓來(lái)調(diào)節(jié)光強(qiáng)，色溫變化 3. 通過(guò)ND灰度片減弱光強(qiáng)，色溫不變孔徑光闌的調(diào)節(jié)載玻片和蓋玻片的厚度 載玻片 1mm 蓋玻片 0.17mm 注意：倒置顯微鏡明場(chǎng)觀察時(shí)注意把玻片倒置， 即蓋玻片朝下明場(chǎng)一、光學(xué)顯微鏡透射式明場(chǎng)顯微鏡特種（專用）顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡特種（專用）顯

27、微鏡包括7種類型：1、暗場(chǎng)，2、熒光，3、倒置，4、相襯，5、偏光，6、干涉，7、體視。一、光學(xué)顯微鏡暗場(chǎng)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡暗場(chǎng)顯微鏡觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線；視場(chǎng)成為黑暗的背景，被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。只能觀察物體的存在運(yùn)動(dòng)及外部形態(tài)，很難分辨其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。與明場(chǎng)顯微鏡的不同處是采用了暗場(chǎng)聚光鏡。能觀察到明場(chǎng)下而觀察不到的極其微小的物體。光軸調(diào)整參照柯勒照明法。蓋玻片必須無(wú)疵痕且無(wú)塵土。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡暗場(chǎng)一、光學(xué)顯微鏡相襯顯微鏡相襯顯微鏡的發(fā)明在光學(xué)顯微鏡的改進(jìn)過(guò)程中，相襯顯微鏡的制造成功和普遍的應(yīng)用，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。1935年荷蘭學(xué)者澤尼克（Zerni

28、ke）提出了相襯法原理，到1941年由德國(guó)蔡司（Carl Zeiss）工廠誕生了世界上第一臺(tái)相襯顯微鏡。它的產(chǎn)生，從信息利用的角度來(lái)看，人們將它視為光學(xué)信息處理概念下的第一個(gè)產(chǎn)品，因而澤尼克獲了1953年諾貝爾獎(jiǎng)金。一、光學(xué)顯微鏡相襯鏡檢原理 鏡檢時(shí)，光源只能通過(guò)環(huán)狀光闌的透明環(huán)，經(jīng)聚光鏡后，這束光線通過(guò)被檢物體，因各部分的光程不同，光線將發(fā)生不同程度的偏斜（衍射）。使直射光和衍射光產(chǎn)生光的干涉，變相位差為振幅差。這樣在相襯鏡檢時(shí)，通過(guò)無(wú)色透明物體光線，使人眼不可分辨的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭煞直娴恼穹?。一、光學(xué)顯微鏡 相襯顯微鏡的特點(diǎn)利用被檢物體的光程（折射率與厚度之乘積）之差進(jìn)行鏡檢的方法，有

29、效地利用光的干涉現(xiàn)象。將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹?。是普通顯微鏡難以達(dá)到的一種鏡檢方法。能使無(wú)色透明活體標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)在相襯顯微鏡下變得清晰可見(jiàn)。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡 相襯顯微術(shù)的負(fù)相襯與正相襯在相襯鏡檢時(shí)，由于相板鍍膜情況的不同，則有不同的鏡檢效果。采用負(fù)相襯物鏡觀察：小粒子的象比背景明亮。負(fù)相襯的效果是“暗中之明”，又稱“明反差”。采用正相襯物鏡觀察：小粒子的象比背景黑暗。正相襯的效果是“明中之暗”，又稱“暗反差”。一、光學(xué)顯微鏡（二）相差觀察方式 原理利用被檢物體的光程（折射率 x 厚度）差進(jìn)行鏡檢，即利用干涉現(xiàn)象，將相位差變?yōu)槿搜劭梢苑直娴恼穹罟曹椕妫何展饩€，直

30、射光通過(guò)補(bǔ)償面：相位推遲，衍射光通過(guò)物鏡相板 聚光鏡環(huán)狀光闌(二)相差觀察方式 特點(diǎn)鑒定活體細(xì)胞最實(shí)用、最經(jīng)濟(jì)的方法需要光強(qiáng)高 應(yīng)用：無(wú)色透明活體標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)鑒定活體細(xì)胞(培養(yǎng)細(xì)胞,分離細(xì)胞)(二)相差觀察方式使用注意點(diǎn)：需要使用內(nèi)置有相差環(huán)的專用相差物鏡聚光鏡中的相差環(huán)需要和物鏡相匹配 光學(xué)元件表示可用物鏡IX-PHLPHLUPLFLN4XPHIX-PHCPHCCPLN10XPH,CPLFLN10XPH, LCACHN20XPHIX-PH1PH1UPLFLN10XPH,UPLFLN20XPH ,CPLFLN10XPH,LCACHN20XPH,LUCPLFLN20XPH,IX-PH2PH2U

31、PLFLN40XPH, UPLFLN60XOIPH, LCACHN40XPH, LUCPLFLN40XPH , LUCPLFLN60XPHIX-PH3PH3UPLFLN100XOIPH五熒光觀察方法一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡相襯顯微鏡包括環(huán)狀光闌、相板、中心（合軸）調(diào)正望遠(yuǎn)鏡。環(huán)狀光闌裝在聚光鏡的下方，而與聚光鏡組合為一整體組成相襯聚光鏡。由大小不同的環(huán)形光闌裝在一園盤(pán)內(nèi)，外面標(biāo)有10X、20 x、40X、100X字樣，相應(yīng)與不同倍率的物鏡配合使用。相襯物鏡在物鏡的后焦點(diǎn)平面處裝有相板，外殼上常有“Ph”字樣。一、光學(xué)顯微鏡相板物鏡的后焦點(diǎn)平面處裝的相板，它分為兩部分：1、是通

32、過(guò)直射光的部分，為半透明的環(huán)狀，叫“共軛面”；2、是通過(guò)衍射光的部分，叫“補(bǔ)償面”。一、光學(xué)顯微鏡 中心(臺(tái)軸)調(diào)正望遠(yuǎn)鏡是一種長(zhǎng)工作距離、放大倍率約4-5倍的放大鏡。用以調(diào)正環(huán)狀光闌所形成的象與相板共軛面完全吻合。使環(huán)狀光闌的中心與物鏡的光軸完全在一直線上。相襯顯微鏡的使用要求1)光源要強(qiáng)，因環(huán)狀光闌遮掉大部分光源。同時(shí)應(yīng)將視場(chǎng)光闌和孔徑光闌完全開(kāi)啟。一、光學(xué)顯微鏡2)為了獲得良好效果，應(yīng)使用波長(zhǎng)范圍窄的近于單色的光源，相位的變化常因照明光線的波長(zhǎng)而不同，通常采用綠色濾光鏡來(lái)調(diào)整光源波長(zhǎng)，最好按廠家專用相襯鏡險(xiǎn)的綠色濾光鏡進(jìn)行鏡檢。3)切片不能太厚，以5-10左右為宜，否則將引起其它光學(xué)現(xiàn)象

33、，而影響成象質(zhì)量。4)載玻片、蓋玻片的厚度應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)，且不應(yīng)有疵痕；制片的封固劑應(yīng)均勻一致。一、光學(xué)顯微鏡偏光顯微鏡偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡，凡具有雙折射性的物質(zhì)，就能分辨的清楚?？捎糜谏飳W(xué)植物學(xué)如鑒別纖維、染色體、紡經(jīng)絲、淀粉粒、細(xì)腦壁與細(xì)胞質(zhì)問(wèn)以及組織中是否含有晶體等?？捎糜谥参锊±砣玷b別病菌入侵引起組織內(nèi)化學(xué)性質(zhì)的改變的物種。可用于人體及動(dòng)物學(xué)如鑒別骨鉻、牙齒、膽固醇、神經(jīng)纖維、腫瘤細(xì)胞、橫紋肌和毛發(fā)等。一、光學(xué)顯微鏡偏光鏡檢術(shù)的要求光源：用單色光。載物臺(tái)：用可以調(diào)節(jié)中心且邊緣刻有角度（3600）能旋轉(zhuǎn)的圓形載物臺(tái)。物鏡：用無(wú)應(yīng)變消色差物鏡。目鏡：用帶有十字線的

34、目鏡。聚光鏡：用能推出上透鏡的搖出式聚光鏡伯特蘭透鏡：用把物體所造成的初級(jí)象放大為次級(jí)象的輔助性透鏡，它裝置在檢偏鏡與目鏡之間。補(bǔ)償片：用石膏、云母及石英補(bǔ)償片等。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡微分干涉襯顯微鏡微分干涉襯顯微鏡是在60年代中期出現(xiàn)的新型顯微鏡。是利用偏光干涉原理的一種顯微鏡。通過(guò)利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束，使圖象呈現(xiàn)立體的三維感覺(jué)。能觀察無(wú)色透明的物體，而且圖象呈現(xiàn)出浮雕狀的立體感。具有相襯顯微術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn)，觀察效果更為逼真。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡熒光顯鏡微一、光學(xué)顯微鏡熒光顯鏡微熒光是一種非溫度輻射，是一種冷光（紫外光）。是用人眼不可見(jiàn)的一定

35、波長(zhǎng)的紫外線作光源照射被檢物體；使之受激發(fā)后而產(chǎn)生人眼可見(jiàn)的熒光，然后再經(jīng)顯微鏡成象系統(tǒng)放大來(lái)進(jìn)行鏡檢。熒光顯鏡微是生物、醫(yī)學(xué)中的重要工具，如對(duì)生物組織、生理、病理、微生物、醫(yī)藥、食品、化學(xué)等諸方面的鑒定等。一、光學(xué)顯微鏡熒光現(xiàn)象其實(shí)質(zhì)是分子吸收了短波光的能量，又以發(fā)光的形式，以波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光射出而為人眼可見(jiàn)。熒光現(xiàn)象有二種自發(fā)熒光又稱“固有熒光”或 “自發(fā)熒光”，經(jīng)紫外線照射發(fā)生熒光。激發(fā)熒光又稱“繼發(fā)熒光”，經(jīng)熒光素處理后再經(jīng)紫外線照射才能發(fā)生熒光。一、光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡的裝置能提供充分的特定波長(zhǎng)的光源，使被檢物體得到理想的激發(fā)而發(fā)出強(qiáng)的熒光。均借助濾光片把激發(fā)光的光譜限定在這一特定的波

36、長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)，而把伴隨發(fā)出的可見(jiàn)光全部吸收或反射掉。對(duì)聚光鏡（透射式用）、載破片、蓋玻片和物鏡均有一定的要求。一、光學(xué)顯微鏡熒光顯微鏡種類透射式不適用于非透明的被檢物體。較難操作。激發(fā)光來(lái)自被檢物體的下方，聚光鏡為暗場(chǎng)聚光鏡，使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡，而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下明亮，而高倍則暗，能得到很暗的視場(chǎng)背景。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡落射式在光路中具有分光鏡，光源來(lái)自被檢物體的上方，對(duì)透明與非透明的被撿物體均適用。物鏡起到了聚光鏡的作用，便于操作。從低倍到高倍，可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場(chǎng)的均勻照明。在低倍情況下則暗，而高倍則明。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡（五）熒光觀察方式 原理物質(zhì)中的電子吸收光

37、的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)放出的光熒光 特點(diǎn)吸收光，必需有激發(fā)光源熒光波長(zhǎng)激發(fā)波長(zhǎng)（損失熱能）熒光強(qiáng)度極小于激發(fā)光的強(qiáng)度有不同程度的衰減熒光強(qiáng)度取決于激發(fā)光強(qiáng)度、被檢物度、熒光效率 優(yōu)點(diǎn)：檢出能力高（放大作用）對(duì)細(xì)胞的刺激?。梢曰铙w染色）能進(jìn)行多重染色 用途：物體構(gòu)造的觀察熒光素?zé)晒獾挠袩o(wú)、色調(diào)比較進(jìn)行物質(zhì)判別抗體熒光等發(fā)熒光量的測(cè)定對(duì)物質(zhì)定性、定量分析（五）熒光觀察方式使用注意點(diǎn)：1. 熒光光源汞燈、氙燈等提供激發(fā)光(U、V、B、G)汞燈使用壽命有限（200-300h）注意使用！2. 熒光濾色鏡選擇激發(fā)波長(zhǎng)，濾除雜散熒光U激發(fā)藍(lán)色染料，如DAPI、HochestB激發(fā)

38、綠色染料，如GFP、FITCG激發(fā)紅色染料，如PI、TRITC觀察時(shí)必須將與染料相適應(yīng)的濾色鏡轉(zhuǎn)入光路中（五）熒光觀察方式入射光激發(fā) 濾色鏡分光 濾色鏡吸收 濾色鏡激發(fā)濾色鏡的選擇與熒光色素的應(yīng)用濾色鏡根據(jù)不同生物體的各種組織、細(xì)胞、器官、微生物、病毒等，可利用不同的激發(fā)濾色鏡來(lái)達(dá)到最佳的激發(fā)光源。熒光色素必須應(yīng)用適合某種被檢物體的熒光素，來(lái)獲得滿意的觀察效果。一、光學(xué)顯微鏡熒光鏡檢術(shù)的樣品制片要求不能用加拿大樹(shù)膠作封固劑，可用甘油等。不用本身能產(chǎn)生熒光的藥劑，一般用酒精、甲醛作固定劑，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，甲醛以甲醛氣進(jìn)行固定為好。切片不能太厚，約在10左右，尤以透射式熒光鏡檢時(shí)要求更嚴(yán)。蛋白粘貼劑

39、不能用以熒光色素處理的材料。如為石蠟制片，脫蠟必須徹底，載玻片、蓋玻片最好為螢石玻璃制成。一、光學(xué)顯微鏡熒光鏡檢術(shù)的注意事項(xiàng)應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行。盡可能縮短觀察時(shí)間，暫時(shí)不觀察時(shí)，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光源。作油浸觀察時(shí)，應(yīng)用“無(wú)熒光油”。作熒光顯微照相時(shí)，要增加數(shù)倍甚至幾十倍曝光時(shí)間?？墒褂锰乜炱?，如：200ASA(24DIH)、400ASA(27DIH)。避免直接看到照明光源，以防紫外線損傷視網(wǎng)膜。電源應(yīng)裝置穩(wěn)壓器。一、光學(xué)顯微鏡熒光鏡檢一、光學(xué)顯微鏡體視顯微鏡的使用方法體視顯微鏡又稱“實(shí)體顯微鏡”或“解剖鏡”，是一種具有正象立體感的顯微鏡。特點(diǎn)雙目鏡筒中的左右兩光束不是平行的，而是具有一定的夾角

40、（體視角120-150），成象呈現(xiàn)三維立體感。象是直（正）立的，便于操作和解剖；最高為200倍左右，工作距離長(zhǎng),焦深大，便于視察被檢物體，視場(chǎng)直徑大。物鏡的倍率為1x，并附有（2、0.75及0.5)。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡萬(wàn)能研究用顯微鏡 集：多用途、附件齊全的高級(jí)大型聯(lián)機(jī)。除有明場(chǎng)外，均能作暗場(chǎng)、相襯、偏光、微分干涉和熒光顯微術(shù)（不能作倒置與體視鏡檢）。裝：有小型135和大型(45) 等自動(dòng)顯微照相系統(tǒng)。附：有高分辨率投影屏、描繪器、共覽、電視及電影攝像等裝置。如物鏡的轉(zhuǎn)換、調(diào)焦；視場(chǎng)光闌、孔徑光闌的自動(dòng)匹配以及顯微照相系統(tǒng)的自動(dòng)調(diào)節(jié)等。一、光學(xué)顯微鏡被檢物體大小的測(cè)量方法一、光學(xué)顯微

41、鏡游標(biāo)尺的使用普通顯鏡微游標(biāo)尺常攜刻在載物臺(tái)上的推動(dòng)器上，研究顯微鏡游標(biāo)尺多刻在載物臺(tái)的縱橫邊緣上。主標(biāo)尺每小格為1mm分度，讀數(shù)為1毫米。副標(biāo)尺一般分10小格，每小格為主標(biāo)尺的9/10毫米分度，讀數(shù)為0.1毫米。作用1）可粗測(cè)被檢物體的大小或長(zhǎng)度。2）快速查找被檢物體。一、光學(xué)顯微鏡顯微測(cè)微尺顯微測(cè)微尺是用來(lái)測(cè)量視場(chǎng)中被檢物體的大小、長(zhǎng)短的測(cè)微工具。包括有目鏡測(cè)微尺和測(cè)微臺(tái)尺，用時(shí)必須兩者互相配合，才能完成其測(cè)量效用。1、目鏡測(cè)微尺為一園形玻璃片，其上有刻度，常用的分為5大格，每格分10小格(共50小格) ，2、臺(tái)測(cè)微臺(tái)尺為一特制的載玻片，其中央膠粘一小園形玻片，刻有尺度，一般為1毫米，分1

42、0大格，每格再分為10小格(共100格)。一、光學(xué)顯微鏡 計(jì)算方法目鏡測(cè)微尺每小格臺(tái)尺重疊格數(shù)10/目尺重疊格數(shù)例：目鏡測(cè)微尺上的第5格與測(cè)微臺(tái)尺上的第8格重疊，就可知道目鏡測(cè)微尺上的5小格810（因測(cè)微臺(tái)尺每小格等于10m）80m；而目鏡測(cè)微尺上的每小格則為80516m。當(dāng)確定目鏡測(cè)微尺每小格的數(shù)值后，在測(cè)定被檢物體的大小、長(zhǎng)短時(shí)，必須在原顯微鏡的放大率下進(jìn)行，否則目鏡測(cè)微尺的數(shù)值又有變化，如改變倍率應(yīng)重新再測(cè)測(cè)量時(shí)，不再用測(cè)微臺(tái)尺，在視場(chǎng)中只利用目鏡測(cè)微尺便可測(cè)出。例如某一部位的大小為4小格時(shí)，即41664m。一、光學(xué)顯微鏡顯微鏡的功能附件一、光學(xué)顯微鏡描繪器描繪器的形式有多種，即將兩個(gè)不

43、同的視場(chǎng)合并在一起。觀察時(shí)，一方面接受由顯微鏡所成的圖象；另一方面將顯微鏡外方的繪圖紙、筆和手投射進(jìn)入視場(chǎng)內(nèi)。它成為顯微鏡的中間附件，不處于目鏡的上方，而是在物鏡與目鏡之間；鏡外需放置一臺(tái)燈，照射在繪圖紙上來(lái)進(jìn)行描繪。所描繪的圖，其放大倍數(shù)的計(jì)算方法：參照前述。一、光學(xué)顯微鏡投影屏和投影目鏡投影屏它的優(yōu)點(diǎn)在于可多人同時(shí)進(jìn)行觀察和研究，須在較暗的室內(nèi)才能取得良好的效果；投影屏的屏幕系由毛玻璃做成。 投影目鏡是將顯微鏡所成的象投射在銀幕上，它必須在暗室內(nèi)進(jìn)行投影，不僅更為能多人觀察研究，而且也適用教學(xué)，同時(shí)也可利用它把圖象投射到繪圖紙上，進(jìn)行教學(xué)掛圖的繪制。一、光學(xué)顯微鏡共覽裝置簡(jiǎn)單為雙人指示目鏡

44、，其中裝一個(gè)棱鏡，光線既能垂直又能折射，利用折射的光線安裝一目鏡，而達(dá)到兩人同時(shí)觀察的目的。此外，在視場(chǎng)光闌平面處裝有一個(gè)能自由移動(dòng)的指針，這樣可以利用指針指著目的物進(jìn)行觀察研究。新型可供2-5人（有的可供9人）一起使用，均為雙目觀察，每人眼睛的屈光度都可調(diào)節(jié)。在主覽的鏡筒中裝有可移動(dòng)的指針或指示箭頭，當(dāng)指到被檢物體的某一結(jié)構(gòu)時(shí)，所有觀察者可同時(shí)觀察。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡顯微攝影技術(shù)不同類型顯微照相裝置及其功能從幀幅大小分為135型、4x5或6x9型；從控制系統(tǒng)分為：手控、半自控和全自動(dòng)三種類型。手控式較難掌握曝光時(shí)間；半自控可測(cè)出準(zhǔn)確的曝光時(shí)間以及光源的色溫。全自動(dòng)高級(jí)研究型全自動(dòng)顯

45、微照擁有。拍攝系統(tǒng)為自動(dòng)控制，功種齊全，是研究用顯微鏡的理想顯微照相裝置。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡顯微照相對(duì)物鏡、目鏡及聚光鏡的選擇物鏡的選攝必須選用平場(chǎng)消色差物鏡和平場(chǎng)復(fù)消色差物鏡；消色差物鏡不適用于顯微照相； 在進(jìn)行高倍（40）干燥系物鏡的顯微照相時(shí)，采用帶校正環(huán)物鏡。在暗場(chǎng)、透射式熒光及油浸顯微照相時(shí)，應(yīng)選用帶虹彩光闌的物鏡；在進(jìn)行油浸熒光顯微照相時(shí)，應(yīng)放用無(wú)熒光油。一、光學(xué)顯微鏡目鏡的選擇觀察目鏡不能用作顯微照相，必須使用原配照相目鏡。聚光鏡的選擇與孔徑光闌的應(yīng)用 聚光鏡的作用產(chǎn)生與物鏡相適應(yīng)的光束使圖象的反差和焦深處在最佳狀態(tài)。聚光鏡的調(diào)節(jié)應(yīng)調(diào)節(jié)在物鏡數(shù)值孔徑60-80%之間為最

46、佳狀態(tài)。例：用數(shù)值孔徑為0.25的10 x物鏡，使孔徑光闌縮小到80，則0.25800.20，這時(shí)應(yīng)將聚光鏡上標(biāo)明數(shù)值孔徑刻度的標(biāo)記放在0.2的位置上。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡拍攝前聚光鏡虹彩光闌大小的調(diào)節(jié)方法 照明系統(tǒng)有透射式及落射式照明， 采用柯勒照明法為了獲得均勻的照明效果，濾光鏡的作用合理的選用濾光鏡能提高圖象的襯（反差）度、分辨率；在彩色顯微照相中，能調(diào)節(jié)光源的色溫。一、光學(xué)顯微鏡可見(jiàn)光譜的特點(diǎn)、原色和補(bǔ)色 白光通過(guò)分光鏡分為紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫。光譜是由三種原色光組成藍(lán)、綠、紅。原色和補(bǔ)色稱互補(bǔ)色兩個(gè)相對(duì)著的色光能相互吸收，藍(lán)色能吸收黃色，透射或反射藍(lán)色；黃色能吸收藍(lán)色，

47、透射或反射黃色，即黃色為藍(lán)色的“補(bǔ)色”，而兩者則稱為“互補(bǔ)色”，其它類推。 一、光學(xué)顯微鏡濾光鏡的種類與功能濾光鏡為有色玻璃（或有色膠膜）制成的透明鏡片。濾光鏡常有下列數(shù)種乳白濾光鏡藍(lán)色濾光鏡黃色濾光鏡綠色濾光鏡紅色濾光鏡色溫平衡濾光鏡中性密度濾光鏡吸熱濾光鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡濾光鏡在黑白顯微照相中的作用可增加照片反差應(yīng)選用濾光鏡的顏色與物色互為補(bǔ)色（物色被吸收）?？山档驼掌床顟?yīng)選用濾光鏡的顏色與物色同色（物色被通過(guò)）。未經(jīng)過(guò)染色的黑、白、灰無(wú)彩色的制片，可不加濾光鏡。一、光學(xué)顯微鏡顯微攝影中色溫的概念一、光學(xué)顯微鏡光源的色溫及色溫平衡濾光鏡 光源的色溫即光源的放射能

48、，是由波長(zhǎng)表示，并由光的顏色來(lái)表現(xiàn)能的高低。光源的藍(lán)紫光多，光源放射能高；色溫即高。光源的紅橙光多，光源放射能低；色溫即低。顯微鏡的照明光源色溫為2600-3400K；色溫平衡濾光鏡有兩種淡橙色將照明光源色溫轉(zhuǎn)換為3400K。淡青色將照明光源色溫轉(zhuǎn)換為5500K。一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡 IX71研究級(jí)倒置熒光顯微鏡 適用標(biāo)本：在各種容器中培養(yǎng)的活細(xì)胞標(biāo)本 制片后的各類標(biāo)本 觀察方式：明場(chǎng)、相差、熒光 BX51正置熒光顯微鏡 適用標(biāo)本： 制片后的各類染色標(biāo)本 觀察方式：明場(chǎng)SZX7、SZX16體視顯微鏡 適用標(biāo)本：各種實(shí)體標(biāo)本探索微觀世界的奧秘顯微鏡的新技術(shù)與新進(jìn)展 顯微鏡的

49、新進(jìn)展激光共聚焦顯微鏡共聚焦與普通熒光顯微鏡的區(qū)別高分辨率(提高了:1.4倍)高靈敏度(PMT,快光子計(jì)數(shù))放大倍率更高(0-40X無(wú)級(jí)變倍)4. 多熒光標(biāo)記樣品的圖像采集5. 無(wú)損傷、連續(xù)光學(xué)切片，顯微“CT”6. 真正的三維結(jié)構(gòu)重組和展示7. 動(dòng)態(tài)追蹤熒光探針的漂移,對(duì)未知熒光的識(shí)別8. 可進(jìn)行:FRAP,FLIP,FLAP,FRET,UNCAGING等應(yīng)用9. 定性,定量, 定位,定時(shí)分析10. xyt 、xyzt 和 xt 掃描 時(shí)間序列掃描11. 旋轉(zhuǎn)掃描，區(qū)域掃描,光譜掃描 12. 對(duì)細(xì)胞及組織的損傷更小 共焦掃描系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)：物鏡標(biāo)本針孔激光共聚焦的原理OLYMPUS197XY

50、掃描顯微鏡Z雙鏡掃描Olympus FV1000 configurationWHAT IS CONFOCAL MICROSCOPY 生物用激光共焦掃描顯微鏡主要是對(duì)_顯微觀察方法的改進(jìn)？熒光主要應(yīng)用：生物熒光相關(guān)研究領(lǐng)域 幾乎含蓋整個(gè)生物領(lǐng)域的定位、定量、定時(shí)、定性相關(guān)的研究 1、活細(xì)胞或組織切片觀察，進(jìn)行細(xì)胞精細(xì)結(jié)構(gòu)觀察 和三維重建如何選擇合適的共聚焦2、多維圖象獲得，X、Y、Z、T、（光譜波長(zhǎng)）、 （旋轉(zhuǎn)角度）I（光強(qiáng)度）等多維組合觀察4、細(xì)胞內(nèi)離子熒光標(biāo)記，細(xì)胞內(nèi)Ph值和鈣、鎂離子濃度比例 和動(dòng)態(tài)變化測(cè)定3、熒光探針標(biāo)記的活細(xì)胞，膜標(biāo)記、免疫物質(zhì)、受體或配體， 核酸觀察，多重?zé)晒鈽?biāo)記觀察

51、5、利用TIRF技術(shù)觀察單分子熒光，放大研究一個(gè)特定分子 在膜表面的運(yùn)動(dòng)6、蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)、生物化學(xué)等等顯微鏡的新進(jìn)展激光共聚焦顯微鏡dEpi-FluorescenceTIRFMEvanescent fieldto observe cell surface and intracellular in the same cell顯微鏡的新進(jìn)展全內(nèi)反射顯微鏡顯微鏡的新進(jìn)展全內(nèi)反射顯微鏡abAPO100XOHR(NA1.65) PLAPO100XOTIRFM(NA1.45)PLAPON60XOTIRFM(NA1.45)TIRF系統(tǒng)物鏡顯微鏡的新進(jìn)展全內(nèi)反射顯微鏡分子馬達(dá)研究Cell 表面成像細(xì)胞/底物接

52、觸膜表面動(dòng)力學(xué)/蛋白質(zhì)定位研究單分子成像肌球蛋白，肌動(dòng)蛋白與Cy3標(biāo)記ATP胞吐/胞吞作用(配合高速CCD)TIRFM的應(yīng)用顯微鏡的新進(jìn)展全內(nèi)反射顯微鏡顯微鏡的新進(jìn)展活細(xì)胞工作站c光損傷小 細(xì)胞活力 延時(shí)拍攝穩(wěn)定性 高速熒光光閘 CO2培養(yǎng)裝置 各種熒光蛋白 方形視場(chǎng)光闌 高速高靈敏CCD 軟件控制硬件設(shè)備Live Cell 焦點(diǎn)零漂移系統(tǒng) 電動(dòng)Z軸馬達(dá)氣墊式防震臺(tái)顯微鏡的新進(jìn)展活細(xì)胞工作站1、全電動(dòng)倒置顯微鏡IX812、活細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)3、光源、高速電動(dòng)熒光光閘4、電動(dòng)載物臺(tái)/電動(dòng)Z軸5、高速高靈敏冷CCD6、焦點(diǎn)零漂移系統(tǒng)ZDC7、多種部件同時(shí)工作的控制軟件8、其他顯微鏡的新進(jìn)展活細(xì)胞工作站顯微鏡的新進(jìn)展智