課件教程中鑒1班

1、誠(chéng) 信我，所呈交的（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或而使用過的材料。我承諾，（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、。（設(shè)計(jì)）作者（簽名）：年月日目錄摘要I-II前言1儀器與材料3儀器3材料33 實(shí)驗(yàn)方法43.13.23.33.4溶液的.4測(cè)定方法5計(jì)算方法6方法學(xué).64 普洱茶中茶多酚提取工藝74.1 單.74.2 響應(yīng)面法95 結(jié)果135.15.25.36供試品溶液溶液的.13樣品茶多酚含量測(cè)定及其結(jié)果14樣品 DP清除率測(cè)定及其結(jié)果14.15參考文獻(xiàn)1

2、8綜述19致謝25附錄 A 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖26生、熟普洱茶茶多酚的含量測(cè)定及抗氧化性評(píng)價(jià)摘要：目的 對(duì)普洱茶中茶多酚的提取方法進(jìn)行研究，設(shè)計(jì)優(yōu)化方案，得到穩(wěn)定、可靠、高效的提取方法；對(duì)生、熟普洱茶中所含茶多酚進(jìn)行含量測(cè)定和對(duì)比，研究其不同發(fā)酵年限的茶茶多酚含量的變化規(guī)律以及評(píng)價(jià)它們的抗氧化性能力，為普洱茶的現(xiàn)代研究提供科學(xué)依據(jù)。方法 通過超聲對(duì)不同發(fā)酵年限和不同產(chǎn)區(qū)的普洱茶中的茶多酚進(jìn)行提取。通過單不同超聲功率、液料比、提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響，采用響應(yīng)面法優(yōu)化出最適提取工藝參數(shù)。通過可見/紫外分光光度法測(cè)定普洱茶中茶多酚含量，對(duì)比不同發(fā)酵年限和不同產(chǎn)區(qū)的普洱茶的茶多酚含量；通過 DP法測(cè)定

3、普洱茶提取液的 DP清除率，對(duì)比不同發(fā)酵年限和不同產(chǎn)區(qū)的普洱茶的抗氧化性能。結(jié)果 普洱茶中茶多酚成分的最佳提取工藝為：超聲功率 350 w，液料比 54 : 1，提取時(shí)間 39 min。普洱茶中茶多酚的含量隨著發(fā)酵年限的增加而逐漸減少：2010 年2008 年2006 年 2005 年，不同產(chǎn)區(qū)的普洱茶所含茶多酚含量因氣候環(huán)境而有所差異，普洱茶的抗氧化性能與其所含茶多酚含量呈正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論 此提取方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于提取普洱茶中的茶多酚成分。：普洱茶；茶多酚；含量測(cè)定；響應(yīng)面法；DP法；可見/紫外分光光度法Determination of Tea Polyenols

4、 in Puer Raw Teaand Puer Ripe Tea and Evaluation of Their AntioxidativeActivityAbstract: Objective To study the extraction method of tea poly enols from Puer tea, design the optimization scheme, obtain a stable, reliable and highly efficient extraction method; determine and compare the content of te

5、a poly enols in Puer rawtea and Puer ripe tea, and study the different fermen ion years. The variation of teapolyenols contentea leaves and their antioxidant capacity comparison provide ascientific basis for the modern research of Puer tea. Methods Ultrasound was used toextract tea polyenols in Puer

6、 tea from different fermenion years and differentregions. Through the single factor inspection of different ultrasonicer, liquid-to-feed ratio, extraction time on the effect of extraction, using Response SurfaceMethodology to optimize the optimum extraction pros parameters. The content oftea polyand

7、 the fermenenols in Puer tea was determined by visible/ultraviolet spectrootometry,tea polyenol content of Puer tea was compared betn differention years and different production areas; the DPclearance rate of Puer teaextract was determined by DPmethod, and the antioxidant properties of Puer tea indi

8、fferent fermenion years and different regions were compared. Results Theoptimum extraction pros of tea polyenols from Puer tea was as follows: ultrasonicer 350 w, liquid-to-feed ratio 54:1, extraction time 39 min. The content of tea poly enols in Puer tea gradually decreased with the increase of fer

9、men ion years: 2010 years 2008 years 2006 years 2005 years, the content of tea poly enols in Puer tea from different producing areas differed due to climate and environment. Theantioxidant properties of Puer tea are itively related to the content of teapolyenols.The extraction method is simple and r

10、a, the result isaccurate and reliable, and has good reproducibility. It can be used to extract teapolyenols from Puer tea.Key words: Puer tea; tea polyenols; content determination; ResponseSurface Methodology; DPmethod; visible/ultraviolet spectrootometry1 前言云南特色的普洱茶1是一個(gè)特色的茶葉品種，它歷史悠久，文化內(nèi)涵豐富，風(fēng)味獨(dú)特，具有極

11、大的市場(chǎng)前景。認(rèn)為廣義的“普洱茶”應(yīng)包括普洱生茶(Puerraw tea)，普洱(Puer aging tea)和普洱熟茶(Puer ripe tea)等三大系列。普洱生茶是指沒有經(jīng)過發(fā)酵的曬青毛茶，它既可作為綠茶直接飲用又可經(jīng)由自然發(fā)酵轉(zhuǎn)化成為，或經(jīng)由人工發(fā)酵技術(shù)轉(zhuǎn)化為熟茶。普洱是普洱生茶經(jīng)自然發(fā)酵過程形成的，普洱熟茶則是普洱生茶經(jīng)后發(fā)酵過程獲得的。們認(rèn)知的功效24而熱銷于國(guó)內(nèi)普洱茶由于具有獨(dú)特的風(fēng)味和逐漸外市場(chǎng)，并受到了國(guó)內(nèi)外越來越多學(xué)者的矚目和認(rèn)可。經(jīng)研究，普洱茶化學(xué)成分多達(dá) 500 多種，其中有碳水化合物、維生素、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、脂肪和氨基酸等所必需的成分；其中還有多種藥效成分，如茶多

12、酚、脂多糖、咖啡堿等。而茶多酚一種純天然的抗氧化劑，則是茶對(duì)健康最有益的物質(zhì)之一，它的抗氧化能力是維生素 E 的 20 倍，是維生素 C 的 100 倍。茶的茶多酚作為一種天然的抗氧化劑，約占干物質(zhì)的 15 %30 %5。茶多酚(Tea Polyenols，簡(jiǎn)稱 TP)是一類存在于茶樹中的多羥基酚類化合物的混合物，俗名茶鞣質(zhì)、茶單寧，是一種白色不定型粉末，可溶于甲醇、乙醇、等、易溶于溫水，茶多酚在堿性介質(zhì)中極不穩(wěn)定，在酸性中則穩(wěn)定，耐熱，與檸檬酸、蘋果酸、酒石酸都有較好的協(xié)同作用5。茶多酚的主要成分按其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為：花色素類，黃酮醇類，花白素類，酚酸及縮酚酸類 6 類化合物6。其中酮類，酮類

13、(主要是兒茶素類化合物)占了較大黃酮類，其他酚類物質(zhì)含量則占的，約為茶多酚總量的 60 %80 %，其次是較小。本實(shí)驗(yàn)以測(cè)定茶葉的兒茶素含量來替代茶茶多酚的含量。目前對(duì)茶的茶多酚有多種提取方法，國(guó)內(nèi)外茶多酚的提取技術(shù)主要有溶劑浸提法、金屬離子沉淀法、樹脂吸附法、超臨界萃取法、微波浸提法和超聲波浸提法等。這些方法在工藝操作、溶劑消耗、產(chǎn)品收率和產(chǎn)品質(zhì)量等方面都各有優(yōu)缺點(diǎn)7,8。對(duì)不同茶葉采用加熱回流、常溫浸提、70 溫浸、超聲、重復(fù)提取等方法，以提取物的量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，優(yōu)選出提取粗茶多酚的最佳提取工藝，采用紫外可見分光光度法測(cè)定其茶多酚含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲和多次重復(fù)提取對(duì)茶多酚的提取效率最佳9。超聲

14、波浸提法是利用超聲波的機(jī)械破碎和空化作用，在物料周圍產(chǎn)生空穴、增大和閉合會(huì)產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力，破裂細(xì)胞，使有效成分的溶出速度加快、數(shù)量增加，使茶多酚等浸提成分向溶劑的擴(kuò)散速度加快，從而提高了有效成分的浸提率，縮短浸提時(shí)間 10。超聲波浸提的最大優(yōu)點(diǎn)就是浸提所需的時(shí)間短，因此避免了長(zhǎng)時(shí)間處于高溫下茶多酚的氧化，得到的收率和茶多酚質(zhì)量都比傳統(tǒng)方法高。傳統(tǒng)的數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法(線性回歸分析和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì))在生產(chǎn)優(yōu)化和科學(xué)研究中都有著廣泛的應(yīng)用。但它們都存在著相應(yīng)缺點(diǎn)（如耗時(shí)耗資，不能考慮所有等）11。而響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)方法(Response Surface Methodology，RSM)是一種有效的統(tǒng)

15、計(jì)技術(shù) ,它是利用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過建立數(shù)學(xué)模型來解決受多種影響的最優(yōu)組合問題。通過對(duì) RSM 的研究表明，研究工作者和產(chǎn)品生產(chǎn)者可以在更廣泛的范圍內(nèi)考慮的組合，以及對(duì)響應(yīng)值的，而均比一次次的單分析方法更有效11。所以本實(shí)驗(yàn)將用響應(yīng)面優(yōu)化的方法更科學(xué)地獲得最優(yōu)的茶多酚提取方案。茶多酚的檢測(cè)方法主要有以下幾種：蛋白質(zhì)沉淀法、金屬離子螯合法、氧化法（一是利用高錳酸鉀與茶多酚的氧化，進(jìn)行顏色滴定，但是這種方法誤差較大；二是 GB/T8313-2008 標(biāo)準(zhǔn)中的酚法，利用酚能將茶多酚氧化然后自己被還原呈藍(lán)色的特征進(jìn)定）。茶葉茶多酚測(cè)定，使用方法較多的是 GB/T8313-2002 與 GB/T8313-2

16、008，也就是酒石酸亞鐵法和酚法12。但，某些還原性的氨基酸和植物中的酚性的非酚類物質(zhì)（如抗壞血酸）也可以與酚試劑反應(yīng)變藍(lán)，從而可能產(chǎn)生假陽(yáng)性現(xiàn)象，不利于檢查的準(zhǔn)確性。所以，酚法更適合多酚含量比較單一的或是未氧化發(fā)酵的茶類中茶多酚的測(cè)定，所以此法更適合綠茶和茶葉提取制品中茶多酚的測(cè)定12。GB/T 8313-2002 及 QB2154-1995食品添加劑 茶多酚采用了酒石酸鐵比色法的檢測(cè)方法。該方法簡(jiǎn)便快速，容易掌握，不但回收率高，重現(xiàn)性好，而且顯色穩(wěn)定性很好13。因此，本實(shí)驗(yàn)將選用酒石酸亞鐵法來測(cè)定普洱茶中茶多酚的含量。DP（1，1-二苯基-2-苯肼）是一種穩(wěn)定的有機(jī)基，其乙醇溶液顯紫色，在

17、 517 nm 處有最大吸收峰。有供氫的抗氧化劑存在時(shí)（如酚類），孤電子被配對(duì)，DP溶液的顏色變淺，吸光度值變小，根據(jù)吸光度的變化可測(cè)得抗氧化劑的活性14。本實(shí)驗(yàn)使用清除 DP除率越大表明抗氧化能力越強(qiáng)。法來評(píng)價(jià)不同普洱茶的抗氧化性能。清2 儀器與材料2.1儀器紫外/可見分光光度計(jì)（UV1102；天美科學(xué)儀器）；臺(tái)式離心機(jī)（TDL80-2B；安亭科學(xué)儀器廠）；電子天平（JA2003；恒平科學(xué)儀器）；萬分之一電子分析天平（奧儀器）恒溫?cái)?shù)控超聲器（KQ-500DB；江蘇省昆山市淀山湖鎮(zhèn)）；循環(huán)水式多用真空泵（SHB-III；鄭州電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9246 MBE科工貿(mào)）；博迅實(shí)業(yè)醫(yī)療設(shè)備

18、廠）；二兩裝高速中藥機(jī)（111B；市永歷制藥機(jī)械）。2.2材料試劑：屈臣氏蒸餾水（屈臣氏（）；無水乙醇（A.R.）（市永大化學(xué)試劑）；磷酸二氫鉀（A.R.）（國(guó)藥化學(xué)試劑）；磷酸氫二鈉（A.R.）（酒石酸鉀鈉（A.R.）（市百世化工）；市化學(xué)試劑廠）；硫酸亞鐵（七水）（A.R.）（廣州化學(xué)試劑廠）；1,1- 二苯基-2-M72518024）；兒茶素對(duì)照品（苯肼（ 麥克林生化科技； 批號(hào)：；批號(hào)：151209）。植標(biāo)化純生物技術(shù)材料：云南普洱茶磚（中產(chǎn)畜產(chǎn)云南茶葉公司茶廠；批號(hào)：7581）。普洱生茶（產(chǎn)地）：公司茶廠；產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：DB53/103-2006）；哀牢山（永德縣供銷俊仲號(hào)（云南南澗鳳

19、凰生態(tài)茶廠；執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB/T9833）；產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：Q/PCW 02-2006）；茶王茶廠（普洱茶王茶業(yè)忙肺山茶廠（云南永德縣勐板鄉(xiāng)茶廠；產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：G/ZYCJ 0301-2006）。普洱熟茶(年份)：2005年產(chǎn)大益七子餅茶（熟茶）（云南勐海茶廠；產(chǎn)品批號(hào)：504）；2006年產(chǎn)大益七子餅茶（熟茶）（云南勐海茶廠；產(chǎn)品批號(hào)：603）；2008年產(chǎn)大益普洱茶（熟茶）（云南勐海茶廠；產(chǎn)品批號(hào)：805）；2010年產(chǎn)大益普洱茶（熟茶）（云南勐海茶廠；產(chǎn)品批號(hào)：001）。2.3 材料預(yù)處理機(jī)，過 80 目篩。處理后的普洱茶粉置于取普洱茶葉，用袋，常溫放置，干燥保存，備用。3 實(shí)驗(yàn)方法3.1 溶

20、液的3.1.1 顯色溶液和緩沖溶液的 酒石酸鐵溶液：取 1.000g 硫酸亞鐵(FeSO47H2O)和 5.000g 酒石酸鉀鈉(C4 O6H4KNa4H2O)，蒸餾水溶解并定容至 1 L(低溫保存有效期 10 天)；7.5 的磷酸緩沖液：1/15 mol/L 磷酸氫二鈉:取 23.900 g 十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO412H2O)，蒸餾水溶解后定容至 1L；1/15 mol/L 磷酸二氫鉀：取9.080 g 在 110 下烘干 2 小時(shí)的磷酸二氫鉀(KH2PO4)，蒸餾水溶解后定容至 1L。從上述溶液中取 85 mL 磷酸氫二鈉溶液和 15 mL 磷酸二氫鉀溶液混勻，備用。 70 %醇

21、溶液：精取 175 mL 無水乙醇，蒸餾水定容至 250 ml，混勻，備用。 0.1 mM DP溶液：精密稱取0.0039 g 1,1-二苯基-2-苯肼（DP），70 %乙醇溶液溶解后定容至 100 mL，避光保存，備用。3.1.2 對(duì)照品溶液和標(biāo)準(zhǔn)曲線的取兒茶素對(duì)照品適量，精密稱定，加蒸餾水溶解，制成 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/ mL 的對(duì)照品溶液。分別用移液管精確吸取 2 mL 對(duì)照品溶液至 10 mL 離心管中，往離心管中加入 2 mL 酒石酸鐵溶液、6 mL7.5 的磷酸緩沖液，搖勻，離心，吸取上清液，以蒸餾水做空白對(duì)照調(diào)零，置可見/紫外分光光度計(jì)中進(jìn)定。由文獻(xiàn)可知

22、，測(cè)定波長(zhǎng)為 540 nm。數(shù)值，計(jì)算含量并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見附錄 A 圖 A1）。3.1.3 供試品溶液（普洱茶提取液）的精密稱取 1.000 g 普洱茶粉末，置錐形瓶中，加入一定量 70 蒸餾水，搖勻，置恒溫?cái)?shù)控超聲器中在 70 恒溫水浴下超聲一定時(shí)間，取出，趁熱抽濾，濾渣用 20 mL 70 蒸餾水洗滌，合并濾液，冷卻，體積，用移液管精密吸取 5 mL 濾液至 25 mL 容量瓶中，蒸餾水定容，得到供試品溶液。3.2 測(cè)定方法3.2.1 茶多酚含量測(cè)定分別用移液管精確取 2 mL 供試品溶液至 10 mL 離心管中，往離心管中加入2 mL 酒石酸鐵溶液、6 mL置紫外/可見分光光度計(jì)中進(jìn)值

23、，計(jì)算含量。7.5 的磷酸緩沖液，搖勻，離心，吸取上清液，定。查閱文獻(xiàn)得知測(cè)定波長(zhǎng)為 540 nm。數(shù)3.2.2 DP清除率測(cè)定按下表分別配置 A、A1、A2 反應(yīng)體系，加樣時(shí)先加 70 %醇溶液，然后再加普洱茶提取液和 DP。反應(yīng)組分混和均勻后在溫室下避光反應(yīng) 30 min，以70 %醇溶液作為空白對(duì)照調(diào)零，以對(duì)照 A2 進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，然后以最大吸收波長(zhǎng)（521.9 nm），依次測(cè)定 A2、A、A1 的吸光度。反應(yīng)體系組成見表 3-1。表 3-1 反應(yīng)體系組成各組分加入量（ml）實(shí)驗(yàn)組別Total（ mL）普洱茶提取液0.1mM DP70 %醇溶液A A1A2440404044888樣品組

24、A：只加 DP和普洱茶提取液，吸光度記為 A對(duì)照 A1：不加 DP，只加普洱茶提取液及乙醇溶液，吸光度記為 A1對(duì)照 A2：不加普洱茶提取液，只加 DP和乙醇溶液，吸光度記為 A23.3 計(jì)算方法由文獻(xiàn)并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)，普洱茶中茶多酚含量和 DP清除率計(jì)算方法為： 茶多酚含量(%)=（A-b）/K(1/V1)V2（1/w） (1/m) 100 %式中：A 為吸光度值；b 為標(biāo)準(zhǔn)曲線在 y 軸上截距；K 為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；V1 為吸取的提取液量，mL；V2 為提取液總量，mL；w 為茶葉的干物質(zhì)百分含量，%；m 為樣品質(zhì)量，g 清除率=1-（A-A1）/A2 100 %式中：A：只加 DP和普洱茶提取

25、液；A1：不加 DP，只加普洱茶提取液和 70 %乙醇溶液；A2：不加普洱茶提取液，只加 DP和 70 %乙醇溶液3.4 方法學(xué)3.4.1 精密度試驗(yàn)精密吸取 2 mL 經(jīng) 3.1.3 項(xiàng)下得到的普洱茶提取液 5 份，按 3.2.1 項(xiàng)下顯色原理顯色，并在確定的波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，計(jì)算得 RSD 值為 0.944 %，證明儀器的精密度良好。結(jié)果見表 3-2。表 3-2精密度試驗(yàn)結(jié)果12345平均值RSD (%）吸光度0.2170.2190.2140.2170.2190.2170.9443.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取 2 mL 經(jīng) 3.1.3 項(xiàng)下得到的普洱茶提取液，按 3.2.1 項(xiàng)下顯色方法顯色

26、，并在確定的波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，每隔5min 測(cè)定一次，計(jì)算得RSD 值為0.874 %，證明儀器和溶液的穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表 3-3。表 3-3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果0 min5 min10 min15 min20 min平均值RSD (%）吸光度0.2180.2190.2200.2210.2230.2200.8743.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)精稱同一批普洱茶茶葉粉末 5 份，按3.1.3 項(xiàng)下方備供試品溶液，按 3.2項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)定，表明該操作的重復(fù)性良好。結(jié)果見表 3-4。表 3-4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果12345平均值RSD (%）茶多酚含量(%）12.97413.43512.95112.75512

27、.73212.9692.1804 普洱茶中茶多酚提取工藝4.1 單4.1.1 超聲功率取同一批次普洱茶粉末 6 份，各 1.000 g，精密稱定，均加入 50 mL 70 蒸餾水，置恒溫?cái)?shù)控超聲器（總功率為 500 w）中，分別以超聲總功率的 50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、100 %超聲提取 30min。按 3.1.3 的方液。按 3.2 的方法測(cè)定，并按 3.3 的方法計(jì)算茶多酚含量。備供試品溶表 4-1 不同超聲功率提取效果超聲功率 (%)5060708090100茶多酚含量 (%)11.5911.7111.8312.6511.9611.7712.812.612.412

28、.21211.811.611.4506070超聲功率 (%）8090100圖 4-1 不同超聲功率提取效果由表 4-1、圖 4-1 可以看出隨著超聲功率的增加，茶多酚含量先增加再減少，并在超聲功率為 80 %時(shí)達(dá)到最大，說明超聲功率為 80 %（即 400 w）左右時(shí)，茶多酚提取效果達(dá)到最好。所以最佳超聲功率范圍確定為 70 %90 %。4.1.2 液料比取同一批次普洱茶粉末 6 份，各 1.000 g，精密稱定，分別加入 30 mL、40mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL 70 蒸餾水，置恒溫?cái)?shù)控超聲器中，以超聲功率 80 %超聲提取 30 min。按 3.1.3 的方法測(cè)

29、定，并按 3.3 的方法計(jì)算茶多酚含量。備供試品溶液。按 3.2 的方表 4-2不同液料比提取效果液料比304050607080茶多酚含量 (%)10.5011.4712.6512.0012.1312.151312.51211.51110.510304050607080液料比圖 4-2不同液料比提取效果由表 4-2、圖 4-2 可以看出隨著液料比的增加，茶多酚含量逐漸增加，并在茶多酚含量 (%）茶多酚含量 (%）液料比為 50 : 1 時(shí)達(dá)到最大，隨后稍下降并趨于穩(wěn)定，說明液料比為 50 : 1 左右，茶多酚提取率達(dá)到最大。所以最佳液料比范圍確定為 40 : 160 : 1。4.1.3 提取時(shí)

30、間取同一批次普洱茶粉末 6 份，各 1.000 g，精密稱定，均加入 50 mL 70 蒸餾水，分別置恒溫?cái)?shù)控超聲器中，在超聲功率 80 %下超聲提取，提取時(shí)間為 10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min。按 3.1.3 的方品溶液。按 3.2 的方法測(cè)定，并按 3.3 的方法計(jì)算茶多酚含量。備供試表 4-3 不同提取時(shí)間提取效果提取時(shí)間(min)102030405060茶多酚含量(%)11.9512.4412.5213.3212.6512.7513.413.21312.812.612.412.21211.8102030405060提取時(shí)間（min）圖

31、 4-3 不同提取時(shí)間提取效果由表 4-3、圖 4-3 可以得出隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，茶多酚含量逐漸增加， 40 min 左右達(dá)到峰值，之后隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，茶多酚含量逐漸減少后又略微增加，但并未達(dá)到 40 min 時(shí)的峰值，故最佳提取時(shí)間范圍確定為 3050 min。4.2 響應(yīng)面法4.2.1選擇依據(jù)前期的單實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選用超聲功率、液料比、提取時(shí)間為因素，使用 design-Expert8.0.6設(shè)計(jì)見表 4-4。，設(shè)計(jì)三三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)，各水平茶多酚含量 (%）表 4-4 響應(yīng)面試驗(yàn)水平表水平A 超聲功率( %)B 提取時(shí)間(min)C 液料比-10170809030405040：15

32、0：160：14.2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)依據(jù) Box-Benhnken 的中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，選取茶多酚含量(Y)作為響應(yīng)值，設(shè)計(jì) 33 水平的響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共有 17 個(gè)試驗(yàn)，其中析因試驗(yàn) 12 個(gè)，中心試驗(yàn) 5 個(gè)，用于誤差估算。分別精密稱定 17 份 1.000 g 普洱茶粉末，按 3.1.3的方備供試品溶液，按 3.2 的方法測(cè)定，并按 3.3 的方法計(jì)算含量，結(jié)果見表 4-5。表 4-5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果超聲功率(%)提取時(shí)間(min)液料比茶多酚含量 (%)12345678910111213141516177070708070808080809090908080809080

33、3040403050404040403040403040505050506040605050505050506040405060504013.083613.205612.376212.892113.344812.974413.435312.950712.754512.626112.685611.789311.188212.732411.980112.416711.07254.2.3建立模型及顯著性檢驗(yàn)采用響應(yīng)面對(duì)表 4-5 中 17 個(gè)茶多酚含量數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸擬合，得到茶多酚含量（Y）對(duì)上述 3 個(gè)的二次多項(xiàng)回歸方程為：Y=12.97-0.31*A-0.12*B+0.54* C-0.12*

34、A * B+0.017* A * C-0.20* B * C+0.31* A2-0.42* B2-0.77* C2。對(duì)該回歸模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表 4-6。表 4-6 模型方差分析來源平方和度均方F 值P 值顯著性模型 A-功率 B-時(shí)間 C-液料比AB AC BCA2 B2 C2殘差失擬項(xiàng)純誤差總和校正復(fù)相關(guān)系數(shù)7.100.780.122.350.0551.121E-0030.160.420.732.500.570.250.327.67911111111173416復(fù)相關(guān)系數(shù)0.790.780.122.350.0551.121E-0030.160.420.732.500.0820.084

35、0.0809.639.481.4528.710.680.0141.945.098.9130.481.060.00340.01780.26700.00110.43800.91020.20670.05870.02040.00090.4601顯著 不顯著0.82930.4065信噪比9.965由表 4-7 可知，模型（P0.05），屬于顯著水平，證明各與響應(yīng)值之間有顯著關(guān)系。失擬項(xiàng)（P0.05），不顯著，模型的校正復(fù)相關(guān)系數(shù) RAdj2=0.829，證明數(shù)據(jù)可靠性較高。信噪比 9.9654，證明回歸方程擬合度和度均較高。所以本響應(yīng)面試驗(yàn)所得的二次回歸方程能較好地對(duì)響應(yīng)值進(jìn)行。4.2.4 響應(yīng)曲面的分

36、析采用響應(yīng)面，分析超聲時(shí)間、液料比、提取時(shí)間各之間的交互作用對(duì)茶多酚含量的影響，并繪制響應(yīng)曲面圖，見圖 4-4。A.超聲功率和液料比B.超聲功率和提取時(shí)間C.提取時(shí)間和液料比圖 4-4 各交互作用的響應(yīng)面分析從響應(yīng)曲面圖的顏色可做初步判定，隨著顏色變化趨勢(shì)的增加，其顏色加深，則說明兩對(duì)響應(yīng)值的影響程度越大；響應(yīng)曲面的傾斜度則說明兩對(duì)響應(yīng)值的影響大小，當(dāng)傾斜度越大，即坡度越陡，說明兩交互作用越顯著。故由響應(yīng)曲面圖可知，超聲功率和提取時(shí)間均對(duì)茶多酚的含量有較大影響，圖 A、C中兩交互作用較顯著，圖 B 中兩交互作用不算顯著。4.2.5 最佳提取工藝及其驗(yàn)證由響應(yīng)面design-expert8.0.

37、6 進(jìn)行分析，模擬得到普洱茶中茶多酚成分的最佳提取工藝為：超聲功率 70 %（350 w），液料比 53.52 : 1，提取時(shí)間 39.12 min。最佳方案中 的茶多酚提取率為 13.55 %。結(jié)合實(shí)際情況，將最佳提取工藝確定為：超聲功率 70 %（350 w），液料比 54:1，提取時(shí)間 39 min。精密稱取普洱茶葉粉末 1.000 g，平行三份，采用上述優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果見表 4-7。表 4-7最佳提取方案的驗(yàn)證序號(hào)茶多酚含量 (%)平均含量 (%)RSD (%)12313.5212.7813.032.8613.11結(jié)果表明，實(shí)際中的茶多酚含量（平均值：13.11 %）與最佳方

38、案中的茶多酚含量（值：13.55 %）相差不大。證明方程與實(shí)際情況有較合理的擬合，從而驗(yàn)證了所建模型的正確性。5 結(jié)果5.1 供試品溶液溶液的取不同發(fā)酵年限的同一產(chǎn)地的熟普洱茶茶葉共 4 份和不同產(chǎn)地同一發(fā)酵年限的生普洱茶茶葉共 4 份，各 1.000 g，精密稱定，分別按 4.2.5 中的茶多酚最佳提取工藝方案（超聲功率 350 w，液料比 54 : 1，提取時(shí)間 39 min）進(jìn)行提取，提取結(jié)束，趁熱抽濾，濾渣用 20 mL 70 蒸餾水洗滌，合并濾液，冷卻，體積，用移液管精密吸取 5 mL 濾液至 25 mL 容量瓶中，定容，于容量瓶中吸取2 mL 溶液至 10 mL 離心管中，往離心管

39、中加入 2 mL 酒石酸鐵溶液、6 mL7.5 的磷酸緩沖液，搖勻，離心，吸取上清液作為供試品溶液。平取其平均值。定三次，5.2 樣品茶多酚含量測(cè)定及其結(jié)果按 3.2 的方法測(cè)定，并按 3.3 的方法計(jì)算含量。得到不同發(fā)酵年限同一產(chǎn)地熟普洱茶和不同產(chǎn)地同一發(fā)酵年限的生普洱茶的含量測(cè)定結(jié)果。結(jié)果見表 5-1、5-2。表 5-1不同發(fā)酵年限樣品含量測(cè)定結(jié)果樣品發(fā)酵年限（年）茶多酚含量 (%)2005200620082010RSD14.0515.9419.7322.4820.95從測(cè)定結(jié)果可以看出，隨著發(fā)酵年份的增加，同一產(chǎn)地的熟普洱茶茶所含的茶多酚含量越少，由 RSD 值為 20.95 %可知同一

40、產(chǎn)地不同發(fā)酵年限的熟普洱茶茶所含茶多酚含量差異顯著。表 5-2不同產(chǎn)地樣品含量測(cè)定結(jié)果樣品產(chǎn)地茶多酚含量 (%)哀牢山俊仲號(hào)茶王茶廠40.3038.8836.3738.334.23忙肺山RSD茶廠從測(cè)定結(jié)果可以看出，不同產(chǎn)地的生普洱茶茶所含茶多酚含量有所差異，由RSD 值為4.23 %可知不同產(chǎn)地的生普洱茶茶所含茶多酚含量差異不顯著，但不同產(chǎn)地普洱茶由于地理環(huán)境、加工方式的差別使茶多酚含量具有一定的差異。5.3 樣品 DP清除率測(cè)定及其結(jié)果按 3.1.3 方備供試品溶液，按 3.2 方法測(cè)定不同發(fā)酵年限和不同產(chǎn)地的普洱茶提取液的 DP清除率。結(jié)果見圖 5-1，5-2.7876747270686

41、6646260585625201510501234系列1系列2發(fā)酵年限：2005 年2006 年2008 年2010 年圖 5-1 不同發(fā)酵年限普洱茶提取液的 DP清除率和茶多酚含量414039383736353492908886848280781234系列1系列2產(chǎn)地：哀牢山俊仲號(hào)茶王茶廠忙肺山茶廠圖 5-2 不同產(chǎn)地的普洱茶提取液的 DP清除率和茶多酚含量從測(cè)定結(jié)果可以看出，普洱茶提取液的 DP的增加而減少，不同產(chǎn)地的普洱茶提取液的 DP清除率隨著普洱茶的發(fā)酵年限清除率不一樣，普洱茶提取液的 DP清除率與普洱茶中多酚含量呈正相關(guān)。6本實(shí)驗(yàn)課題首先通過單實(shí)驗(yàn)，以下三個(gè)對(duì)提取效果的影響：超DP

42、清除率/ %DP清除率/ %茶多酚含量(%）茶多酚含量 (%）聲功率（總功率的 50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、100 %）、液料比（30 : 1、 40 : 1、50 : 1、60 : 1、70 : 1、80 : 1）、提取時(shí)間（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min），為后面的響應(yīng)面試驗(yàn)提供了科學(xué)合理的數(shù)據(jù)支持：最佳超聲功率范圍確定為 70 %90 %、最佳液料比范圍確定為 40 : 160 : 1、最佳提取時(shí)間范圍確定為 30 min50 min。進(jìn)行單節(jié)省了探索時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)效率。，既明確了實(shí)驗(yàn)方向，又Design-Exp

43、ert8.0.6 進(jìn)行分析，根據(jù)前期的單實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，由響應(yīng)面模擬得到普洱茶中茶多酚成分的最佳提取工藝參數(shù)為：超聲功率 350 w，液料比53.52 : 1，提取時(shí)間 39.12 min。最佳方案中的茶多酚含量為 13.55 %。結(jié)合實(shí)際條件，把最優(yōu)提取方案確定為：超聲功率 350 w，液料比 54 : 1，提取時(shí)間39 min。響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法利用合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，并通過試驗(yàn)得到大量數(shù)據(jù)，再利用多元二次回歸方程擬合響應(yīng)與響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，通過對(duì)回歸方程的分析來得到最優(yōu)工藝參數(shù)，解決多變量問題。本實(shí)驗(yàn)采用的響應(yīng)面分析，是一種優(yōu)化方法，它將體系的響應(yīng)（普洱茶中茶多酚的含量）作為三個(gè)（超聲功率、

44、液料比、提取時(shí)間）的函數(shù)，再用圖形技術(shù)的方式把它們的函數(shù)關(guān)系表達(dá)出來，可以讓憑借對(duì)響應(yīng)曲面 3D 圖的直接觀察來選擇實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的最優(yōu)化Design-Expert 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，條件。而且在分析工具地選擇上，使用響應(yīng)面它簡(jiǎn)單、直接、易操作，功能非常明確，為設(shè)計(jì)試驗(yàn)（design）、回歸分析（ysis）、優(yōu)化（optimization）。能夠讓在實(shí)驗(yàn)當(dāng)學(xué)合理、簡(jiǎn)便準(zhǔn)確地獲得普洱茶中茶多酚的最佳提取工藝參數(shù)。根據(jù)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得出的普洱茶中茶多酚成分的最佳提取工藝方案，使用紫外/可見分光光度法測(cè)定同一產(chǎn)地不同發(fā)酵年限熟普洱茶和不同產(chǎn)地同一發(fā)酵年限生普洱茶中茶多酚成分的含量。通過將結(jié)果制成折線圖和柱形圖，

45、能更加直觀地觀察和分析不同發(fā)酵年限的普洱茶和不同產(chǎn)地普洱茶中茶多酚含量的差異。隨著發(fā)酵年份的增加，同一產(chǎn)地的熟普洱茶茶所含的茶多酚含量越少。同一發(fā)酵年限不同產(chǎn)地的生普洱茶茶所含茶多酚含量由于不同產(chǎn)地普洱茶由于地理環(huán)境、加工工藝的差別使其主要成分含量具有一定的差異。使用 DP法測(cè)定不同普洱茶提取液的 DP茶的抗氧化性能跟茶清除率來表明樣品的抗氧化性能差異，結(jié)果表明，普洱的多酚含量呈正相關(guān)關(guān)系。綜上所述，通過單試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)，能夠科學(xué)合理地獲得不同發(fā)酵年限和不同產(chǎn)地的普洱茶茶多酚含量的差異。最佳提取工藝方案為：超聲功率 350w，液料比 54 : 1，提取時(shí)間 39 min。同一產(chǎn)地不同發(fā)酵年限

46、的熟普洱茶茶多酚含量比較：2010 年2008 年2006 年2005 年。不同產(chǎn)地同一發(fā)酵年限的生普洱茶茶多酚含量有所差異。普洱茶的抗氧化性能跟茶的多酚含量呈正相關(guān)關(guān)系。參考文獻(xiàn)1 楊崇仁，陳可可，2006(02)：37-38茶葉的分類與普洱茶的定義J茶葉科學(xué)技術(shù)，2，秘鳴，等普洱茶的功效及品質(zhì)形成機(jī)理研究進(jìn)展J茶葉，2003，29(2)：75-773 趙，云南普洱茶功效的研究J食品研究與開發(fā)，2005，26(2)：114-118443-445 趙普洱茶藥理作用研究進(jìn)展J福建茶葉，2005(1)：，等天然抗氧化劑茶多酚提取、分離和純化方法J廣東化工，2010，37(08)：7-867茶葉生物

47、化學(xué)M：中國(guó)農(nóng)業(yè)，2003，8-20，319-330茶茶多酚的提取、測(cè)定及應(yīng)用J孫，第二師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，26(9)：47-508 阮棟梁，等茶多酚的提取和應(yīng)用的研究進(jìn)展J渤海大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，28(1)：6-119幫，不同提取方法對(duì)茶藥用成分茶多酚含量影響的比較研究J云南中醫(yī)中藥雜志，2014，(09)：66-6810 Xiao-mei H, Wei C Conditions optimization for extracted technology ofteapolyenols assisted by ultrasonic J113an Agricultural Sci

48、en, 2009, (9)：111-11 慕運(yùn)動(dòng)響應(yīng)面方法及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用J鄭州2001(03)：91-94學(xué)報(bào)，12，等酒石酸亞鐵法和酚法測(cè)定茶多酚的差異原因研究J茶葉通訊，2013，40(03)：28-2913，影響酒石酸鐵比色法測(cè)定結(jié)果的J監(jiān)督與選擇，2008(Z1)：67-6914，等白茶中茶多酚提取工藝及抗氧化活性的研究J.，中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2014，14(12)：24-31綜述普洱茶的現(xiàn)代研究概況1 分類、來源及植物形態(tài)普洱茶（學(xué)名：Camellia sinensis var. assamica），大喬木，高達(dá) 16 米，嫩枝有微毛，頂芽有白柔毛。葉薄革質(zhì)，橢圓形，上面干后褐綠

49、色，略有光澤，下面淺綠色，中肋上有柔毛，其余被短柔毛，老葉變禿；側(cè)脈 8-9 對(duì)，在上面明顯。花腋生，被柔毛。苞片 2，早落。萼片 5，近圓形，外面?；ò?6-7 片，倒卵。長(zhǎng) 8-10 毫米，離生，。子房 3 室，被茸毛；花柱長(zhǎng) 8 毫米，形，先端 3 裂。蒴果扁三角球形。來自中國(guó)植物志）每室 1 個(gè)，近圓形，直徑 1 厘米。（標(biāo)本信息云南特色的普洱茶是一個(gè)特色的茶葉品種，它歷史悠久，文化內(nèi)涵豐富，風(fēng)味獨(dú)特，具有極大的市場(chǎng)前景。認(rèn)為廣義的“普洱茶”應(yīng)包括普洱生茶(Puerraw tea)，普洱(Puer aging tea)和普洱熟茶(Puer ripe tea)等三大系列。普洱生茶是指沒有

50、經(jīng)過發(fā)酵的曬青毛茶，它既可作為綠茶直接飲用又可經(jīng)由自然發(fā)酵轉(zhuǎn)化成為，或經(jīng)由人工發(fā)酵技術(shù)轉(zhuǎn)化為熟茶。普洱是普洱生茶經(jīng)自然發(fā)酵過程形成的，普洱熟茶則是普洱生茶經(jīng)后發(fā)酵過程獲得的1。平時(shí)所說的普洱茶和所飲用的普洱茶一般都指陳化普洱茶和普洱熟茶。普洱茶一般可制成餅、沱、磚、金瓜等各種外形。普洱茶( 生茶和熟茶) 均屬后發(fā)酵茶，亦屬于“黑茶”范疇，但與其他黑茶相比較，普洱茶加工所用的茶葉品種較為特殊，其屬于固態(tài)發(fā)酵，在發(fā)酵過程中，微生物生長(zhǎng)所依附的固體材料不含或幾乎不含液體2。故也有人認(rèn)為普洱茶應(yīng)獨(dú)立于“黑茶”。2 化學(xué)成分由于普洱茶發(fā)酵過程中有大量微生物參與，其中以黑曲霉菌最多，微生物參與發(fā)酵導(dǎo)致普洱

51、熟茶的化學(xué)成分十分復(fù)雜，所以普洱生茶與普洱熟茶的化學(xué)成分差異較大3-5。普洱熟茶中兒茶素含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于普洱生茶，目前從普洱熟茶中僅分離得到 6 種兒茶素類成分，而普洱生茶的兒茶素類成分的種類更豐富，普洱生茶除了含有與普洱熟茶相同的 6 種兒茶素類成分以外，還含有其他 7 種兒茶素類成分6。7研究使用色譜法從普巧茶中分離得到了 19 個(gè)化合物，并通過中 1H-NMR、13C-NMR 和質(zhì)譜等波譜技術(shù)將結(jié)構(gòu)鑒定為：沒食子酸(1)，兒茶素(2)，表兒茶素(3)，沒食子兒茶素(4)，表沒食子兒茶素(5)，表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(6)，表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯(7)，蘆?。?），山奈酚-3

52、-0-糖苷)（9），山奈酚-3-0-D-葡萄糖苷（10），山奈酚（11），槲皮素(12)，槲皮素-3-0-D-葡萄糖苷（13），二氨(17)，花旗素(14)，(15)，素(16)，沒食子兒茶素沒食子酸酯(18)，綠原酸(19)。 其中化合物(17)，(18)為首次在普巧茶中分離得到，化合物(16)為首次在普巧生茶中分離得到。綜上所述，普洱茶中化學(xué)成分豐富而復(fù)雜，也對(duì)應(yīng)著有復(fù)雜豐富的藥理作用。3 藥理作用最近 10 年茶和茶多酚的藥理活性被廣泛研究，證實(shí)了茶飲料的確具有降低的作用8-9。人們通常認(rèn)為，茶飲料之所以有這么多保心疾病和健作用，主要是由于其中茶多酚，但是普洱茶相對(duì)于其他茶類來說，茶多酚

53、含量不占有優(yōu)勢(shì)，卻有獨(dú)特的藥理活性6。3.1 降血脂作用普洱茶能明顯降低小鼠血漿的膽固醇酯以及甘油三酯( TG)的含量10，對(duì)普洱茶進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，普洱熟茶能夠顯著降低血漿中低密度脂蛋白( LDL-C) 與甘油三酯( TG) 含量，提高血漿中高密度脂蛋白( HDL-C) 含量，而且有明顯的量效關(guān)系11。從而得知普洱茶具有降血脂作用。3.2 抗氧化作用普洱茶與其他茶類飲料一樣，可以抑制各種脂和非脂的氧化損傷12-13，抗氧化功效主要?dú)w因于其特異的多酚類物質(zhì)14-16，使用乙酸乙酯、正丁醇萃取普洱茶水提液，使用黃嘌呤氧化酶方法測(cè)定其清除超氧基的能力，分析O2清除其主要活性成分及抗氧化作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)

54、，乙酸乙酯組分較強(qiáng)的活性，而剩余水層較強(qiáng)的OH 清除活性。因茶、沒食子酸主要在乙酸乙酯組分中，正丁醇組分含較多茶褐素，推測(cè)前者起作用的機(jī)制可能與沒食子酸、兒茶素和茶等活性成分有關(guān)，后者可能與茶褐素等其他物質(zhì)有關(guān)。因此，控制普洱茶發(fā)酵過程可能會(huì)獲得具有不同基清除作用的活性成分17。3.3 保肝作用近來人們通過體內(nèi)以及體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)普洱茶具有保肝的功效，長(zhǎng)期服用普洱茶可以保護(hù)肝臟免除氧化損傷。國(guó)內(nèi)有學(xué)者通過大鼠模型發(fā)現(xiàn)普洱茶通過調(diào)節(jié)血脂能夠顯著降低大鼠肝臟脂肪病變的程度，從而達(dá)到保肝的效果6。3.4活性通過研究普洱茶分離組分對(duì) PPAR 受體的激活作用，得知普洱茶中多酚類物功效18。質(zhì)兒茶素有3.5

55、 普洱茶抗腫瘤活性普洱茶所含的兒茶素類是其主要的活性物質(zhì)，其中含量及活性較高的表沒食子兒茶素沒食子酸(EGCG)是一種廣譜抗癌化合物，可抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移，并誘導(dǎo)其凋亡。動(dòng)物試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，兒茶素對(duì)不同腫瘤的形成及發(fā)展明顯的抑制作用。作用機(jī)制研究顯示兒茶素通過抗氧化、抑制相關(guān)酶活性及抑制信號(hào)傳導(dǎo)等、細(xì)胞增殖、細(xì)胞再生及轉(zhuǎn)移,并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡19。同來抑制腫瘤細(xì)胞時(shí)，由沒食子兒茶素沒食子酸酯和長(zhǎng)春新堿的組合物，或長(zhǎng)春新堿與沒食子兒茶素沒食子酸酯的組合的組合物可明顯改善長(zhǎng)春新堿抑制腫瘤細(xì)胞增殖的療效。該組合物基本上對(duì)鼠的肝臟和腎臟沒性; 并且活性成分中的沒食子兒茶素沒食子酸酯資源豐富，價(jià)格低廉，

56、因此腫瘤抑制率增加，腫瘤患者治療費(fèi)用降低20。3.6 其他活性除以上活性外，普洱茶還具有一定的抗菌、抗炎、抗、抗誘變活性，和抗動(dòng)脈粥樣硬化，抗疲勞，抗輻射的作用17，證明普洱茶在現(xiàn)代研究中還有很大的發(fā)展前景和發(fā)展空間。4 安全性評(píng)價(jià)普洱茶的急性毒性小于烘青綠茶，普洱茶對(duì)原核細(xì)胞、真核細(xì)胞、生殖細(xì)胞都沒有致突變性，排除了普洱茶對(duì)引起斷裂損傷、堿基置換和移碼等致突變性，證明普洱茶具有較高的食用安全性,表明正規(guī)廠家生產(chǎn)的普洱茶是安全的 21。以普洱茶特征成分對(duì)種小白鼠進(jìn)行經(jīng)毒理學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果表明，普洱茶特征成分提取物屬實(shí)際無毒級(jí)，也未見有致突變作用22。5 展望普洱茶有著千年歷史，卻依然那么有。與綠茶

57、、紅茶相比，影響普洱茶優(yōu)劣的很多，且普洱茶茶中成分復(fù)雜，研究普洱茶物質(zhì)基礎(chǔ)有利于制定普洱茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，解釋其養(yǎng)生功效的機(jī)理，有利于現(xiàn)代健康事業(yè)的發(fā)展。普洱茶具有多種功效，但是其主要化學(xué)成分卻與其他茶葉無異，量的特征性成分的差異，這些差異成分對(duì)普洱茶的功效及生物活性又發(fā)揮著何種作用，急切的需要進(jìn)一步探究。因此對(duì)普洱茶特有成分的分離和，是制約其藥理研究的限制，所以深入開展針對(duì)普洱茶特有成分的藥理機(jī)制研究，才能進(jìn)一步闡明其獨(dú)特的藥理機(jī)制，并為其市場(chǎng)開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。特別隨著社會(huì)進(jìn)步，一方面人們生活水平提高，另一方面人們生活節(jié)奏加快，生活壓力增大，多數(shù)人免疫力低下，身體處于亞健康，心腦疾病日趨年輕

58、化。加之飲食和油炸食品的普及，肥胖現(xiàn)象普遍。這使得人們不得不注重平時(shí)身體的。普洱茶作為常用飲品，其內(nèi)含物茶多酚、茶色素和茶多糖等化合物，它們具有明顯的抑制腫瘤、降低血糖、血脂、保護(hù)心肌和提高免疫力等功效，且毒副作用小，因此應(yīng)對(duì)普洱茶的化學(xué)成分及其生物活做更深入的研究，以提高普洱茶的附加值，更大程度地研究利用普洱茶，從而造福于人類。參考文獻(xiàn)1 楊崇仁，陳可可，2006(02)：37-38茶葉的分類與普洱茶的定義J茶葉科學(xué)技術(shù)，2 Zhao M, Zhang D L, Su X Q, et alAnegrated metagenomics / metaproteomicsinvestigation

59、 of the microbial communities and enzymes in solid-se fermenion ofPu-erh tea JSci rep 2015, 5：101173，李家華，趙，等過程中主要微生物對(duì)云南普洱茶品質(zhì)形成的研究茶葉科學(xué)，2004，24( 3)：2124新，等云南普洱茶過程中生化成分的變化及其與品質(zhì)形成的關(guān)系茶葉科學(xué)，1998，18( 1)：585 陳可可，普洱熟茶后發(fā)酵加工過程中曲霉菌的分離和鑒定云南植物研究，2006，28( 2)：1236，等普洱茶化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展J，張藥學(xué)，2011，23(01)：47-5178 Mu普洱茶化學(xué)成分研究D，工業(yè)大學(xué)，2016al K J, MacDermott K, Vinson J A, et alA 6month random-ized pilotstudy of black tea and