小鼠口服急性毒性試驗等

1、食品毒理學實驗 課程簡介： 本實驗課程主要面向“食品質(zhì)量與安全”等專業(yè)本科生，是食品類專業(yè)課程食品毒理學的實踐環(huán)節(jié)，共有學時數(shù)16學時，教學內(nèi)容包括“小鼠口服急性毒性試驗”等。實驗教學中主要為技能型實驗環(huán)節(jié)，以提高學生應(yīng)用毒理學基本實驗測試食品及藥品毒性的動手操作應(yīng)用能力。目錄實驗1 毒理學實驗動物基本操作技術(shù)訓練實驗2 小鼠口服急性毒性試驗實驗3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗實驗4 小鼠精子畸形試驗實驗1 毒理學實驗動物基本操作技術(shù)訓練1、了解常用實驗動物的種類、特性；2、掌握大鼠、小鼠、家兔的捉拿與固定技術(shù)；3、學會大、小鼠性別的辨認；4、掌握大、小鼠灌胃染毒技術(shù)，家兔被皮技術(shù)；5、熟悉大

2、、小鼠生物材料采集方法；6、掌握大鼠斷頭處死、小鼠脫頸椎處死方法；7、對大、小鼠進行常規(guī)解剖，辨認各臟器及正常解剖位置 【實驗?zāi)康摹俊緦嶒瀮?nèi)容與方法 】（一）實驗動物的捕捉固定【實驗內(nèi)容與方法 】（二）實驗動物性別鑒定（三）染毒技術(shù)（四）動物的麻醉與外死 （1）頸椎脫臼法 （2）斷頭法 （3）擊打法 （4）急性大出血法 （5）藥物致死法 實驗2 小鼠口服急性毒性試驗 【實驗?zāi)康摹?、學習急性毒性試驗的試驗設(shè)計原則，2、學會經(jīng)口灌胃技術(shù)、隨機分組方法，3、掌握主要的LD50計算方法和急性毒性分級標準。 選擇健康的試驗動物，根據(jù)體重按隨機分組的方法，依據(jù)LD50計算的設(shè)計原則將動物分成數(shù)個染毒組。

3、一次或24h內(nèi)多次給予受試物后，了解動物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)及其嚴重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系，求出半數(shù)致死量（LD50），并根據(jù)LD50值將受試物進行急性毒性分級。 【實驗原理】健康小鼠或大鼠的選擇，性別的辨認。稱重、編號和隨機分組方法。受試化學物溶液的配制。小鼠和大鼠經(jīng)口灌胃技術(shù)。毒性體征的觀察、LD50計算和毒性分級。 【實驗內(nèi)容】LD50計算根據(jù)受試物的種類由指導教師事先確定采用何種方法(改進寇氏法，霍恩法等)進行計算，并在試驗前設(shè)計劑量分組和每組動物數(shù)。選擇適宜的方法求出LD50及95的可信限范圍。如毒性反應(yīng)存在性別差異，應(yīng)分別求出不同性別

4、動物的LD50值。 結(jié)果評定 根據(jù)實驗動物中毒體征、死亡時間和特征、LD50，接受試物種類，分別參照相應(yīng)的經(jīng)口急性毒性分級標準進行評定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。 實驗3 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 【實驗?zāi)康摹?、了解骨髓細胞微核實驗及毒理學意義2、掌握實驗原理其實驗方法。外來化學物干擾細胞的有絲分裂或使染色體發(fā)生斷裂損傷，使細胞在有絲分裂后期受損的染色體或其片斷不能及時進入細胞核，而留在細胞質(zhì)中，形成大小為主核1/20 至1/5 的微核。骨髓嗜多染紅細胞為剛剛成熟排出主核的細胞，細胞中如果有微核形成則會很清晰觀察到。檢測的遺傳學終點：染色體分離改變或完整性改變。毒理學意義：由于微

5、核是骨髓細胞染色體斷裂后產(chǎn)生，所以可用來檢測化學物是否具有致突變作用?！緦嶒炘怼浚ㄒ唬?實驗動物的處理 （二） 微核分析片準備 （三） 固定（四） 染色 【實驗方法與步驟】（五） 結(jié)果觀察與計算 先于低倍鏡下選擇細胞分布均勻、染色均勻，細胞無損區(qū)域，再在油鏡下計算500個嗜多染細胞的微核率。 微核出現(xiàn)率微核出現(xiàn)個數(shù)/細胞數(shù)100 正常對照實驗示范（六）結(jié)果評價將各組微核率進行X2檢驗，判斷其影響程度，還可進行劑量反應(yīng)關(guān)系評價 實驗4 小鼠精子畸形試驗 【實驗?zāi)康摹?1、 掌握小鼠精子畸形試驗方法：包括動物選擇、劑量分組、取材、制片、染色、觀察整個過程；2、 熟悉畸形精子形成的原因：控制精子形態(tài)的基因受損、精子發(fā)生過程受影響、能量提供不足、精子膜受損等。二、實驗器材、試劑 （一）器材生物顯微鏡、解剖剪、鑷子、表面皿、離心管、小漏斗、吸管、滴管、載玻片、擦鏡紙等。（二）試劑1、 1%伊紅染色液：稱取