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文檔簡介
1、第3章 消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全目 的 要 求掌握:消毒、滅菌、抑菌、無菌、防腐、無菌操作的概念; 熟悉:高壓滅菌、紫外線及濾過除菌法的應用范圍。1、滅菌(sterilization):殺死物體上所有微生物(包括芽胞)的方法。 2、消毒(disinfection):殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法。 消毒劑:用于消毒的化學藥品。常用濃度下,只對細菌繁殖體有效。3、防腐(antisepsis):防止或抑制微生物的生長的方法。 防腐劑:用于防腐的化學藥品。 第一節(jié) 消毒滅菌常用術語4、清潔(cleaning):是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。 5、無菌(asepsi
2、s)和無菌操作:無菌是無活的M存在,多是滅菌的結果。防止細菌進入人體或其它物品的操作技術,稱為無菌操作。第二節(jié) 消毒滅菌的方法 一、物理消毒滅菌法 (一)熱力滅菌法高溫對細菌有明顯的致死作用:蛋白質變性;核酸斷裂。1、干熱滅菌法 殺菌作用是通過脫水干燥和大分子變性。(1)焚燒 廢棄物品或動物尸體等。(2)燒灼 接種環(huán)、試管口等的滅菌。(3) 干烤 利用干烤箱滅菌(160170C,2h),適用于高溫下不變質、不損壞、不蒸發(fā)的物品(4) 紅外線 是一種0.771000m波長的電磁波,尤以110m波長的熱效應最強。熱效應只能在照射到的表面產(chǎn)生。與干烤相似,多用于醫(yī)療器械的滅菌。2、濕熱滅菌法最常用,
3、效果優(yōu)于干熱滅菌法。同樣條件下濕熱效果強于干熱的原因:濕熱的穿透力強熱蒸汽有潛能 蛋白質含水量越多越容易變性1、高壓蒸汽滅菌法:103.42Kpa經(jīng)121.3,維持1530分鐘,適用于耐高壓和濕熱的物品,如培養(yǎng)基、手術衣、手術器械等。高壓蒸汽滅菌器2、巴氏消毒法:61.162.8持續(xù)30分鐘或71.7持續(xù)30秒,用于酒類和乳制品的消毒。3、流通蒸汽消毒法:利用一個大氣壓下100的水蒸氣進行消毒。細菌繁殖體1530min可被殺滅。 4 、間歇蒸氣滅菌法 利用反復多次的流動蒸汽間歇加熱以達到滅菌的目的。適用于不耐高熱的含糖、牛奶等培養(yǎng)基。 5、煮沸法:100持續(xù)510分鐘,可用于手術器械、食具的消
4、毒。水中加入2%碳酸氫鈉,既可提高沸點達105C,促進殺滅細菌的芽胞,又可防止金屬器皿生銹。 (二)輻射殺菌法1、紫外線: (1)原理:干擾DNA復制(使細菌DNA形成胸腺嘧啶二聚體),從而導致細菌死亡。(2)殺菌特點:265nm波長的紫外線殺菌力最強,但是穿透力較弱。(3)應用:物體表面和空氣的消毒。(4)紫外線對人體皮膚、眼睛有損傷作用。2、電離輻射: (1)原理:x射線、射線、高速電子等產(chǎn)生游離基,破壞DNA。 (2)應用:用于不耐熱塑料、橡膠制品、中草藥及食品的滅菌。 3微波 波長為11000mm的電磁波。可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物質,但不能穿透金屬表面。主要用于食品、非金屬器械、檢
5、驗室用品、無菌室和病室中食品用具、藥杯及其他用品的消毒。(三)濾過除菌法用物理阻流的方法除去液體或空氣中的細菌,達到無菌的目的。所用的器具是濾菌器(薄膜濾菌器、玻璃濾菌器、石棉濾菌器、素陶瓷濾菌器)。主要用于一些不耐高溫滅菌的血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。濾器和生物潔凈室(四)超聲波消毒法不被人耳感受的高于20kHz/s的聲波,稱為超聲波。超聲波可裂解多數(shù)細菌,尤其是G-菌。主要用于粉碎細胞,以提取細胞組分或制備抗原等。如超聲振蕩儀(五)干燥和低溫抑菌法 低溫:保存菌種。1、冰箱2、液氮罐3、冷凍真空干燥法:為目前最好的保存菌種的方法,可保存數(shù)年至數(shù)十年。二、化學消毒滅菌法(一)常用消毒
6、劑的殺菌機制: 1、促進菌體蛋白質變性或凝固。2、使微生物細胞成分氧化、水解。 3、干擾和破壞細菌酶的活性。 4、損傷細菌的細胞膜 。 常用消毒劑的種類、濃度和用途1類 型 名 稱 濃 度 用 途消毒劑氧化劑 高錳酸鉀 0.10.5% 皮膚粘膜消毒 過氧化氫 325 創(chuàng)口皮膚消毒 過氧乙酸 0.12 塑料玻璃器材醇 類 乙醇 70%80 皮膚消毒酚 類 石炭酸 25 地面器械 來蘇 25 表面醛 類 甲醛 38 室內空氣熏蒸 戊二醛 2 內鏡消毒常用消毒劑的種類、濃度和用途2類 型 名 稱 濃 度 用 途鹵 素 氯化合物 1001000ppm 飲水、游泳池 自由氯/L 碘化物 3050ppm
7、皮膚消毒烷 基 環(huán)氧乙烷 4501200mg/L 手術器械敷料 雙氯苯雙胍 0.54 皮膚粘膜 己烷洗必泰表 面 新潔爾滅 0.050.1 皮膚粘膜器械活性劑 杜滅酚 0.050.1 皮膚創(chuàng)口器械(二)化學消毒按殺菌能力劑分三類:1、高效消毒劑(high-level disinfectants)(1)含氯消毒劑;(2)過氧化物消毒劑;(3)醛類消毒劑;(4)環(huán)氧乙烷2、中效消毒劑(intermediate-level disinfectants)(1)含碘消毒劑;(2)醇類消毒劑3、低效消毒劑(low-level disinfectants)(1)季銨鹽類;(2)氯已定;(3)高錳酸鉀 固體二
8、氧化氯消毒劑第二節(jié) 消毒滅菌的運用一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌(一)高危器械物品 用時需進入無菌組織的物品。所有這些物品都應該滅菌。 (二)中危器械物品 用時不進入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。(三)低危器械物品 只接觸未損傷皮膚但不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。(四)快速周轉的醫(yī)療器械 (四)黏膜的消毒 (五)病人排泄物與分泌物的消毒滅菌 (六)病人污染物品的消毒 (七)飲水的消毒 (八)環(huán)境的消毒 微生物的種類、物理狀態(tài)、數(shù)量消毒劑的性質、濃度與作用時間溫度 酸堿度有機物第四節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素第五節(jié) 病原微生物實驗室生物安全 生物安全(biosaf
9、ety)是生物技術安全(safety of biotechnology)的簡稱。 狹義地指現(xiàn)代生物技術的研究、開發(fā)、應用及轉基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危害。 廣義地指與生物有關的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風險。 病原微生物所致的安全問題,如病原微生物實驗室的安全隱患、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等,也是人類社會所面臨的最現(xiàn)實的生物安全問題。 病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染。 關于病原微生物實驗室生物安全,我國法令包括對病原微生物的分類管理,對實驗室的分級管理,實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任等。 一、病原
10、微生物的分類 根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度,病原微生物分為四類: 第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物,以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。 第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病,比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。 第三類是指能夠引起人或動物疾病,但一般情況下對人、動物或環(huán)境不構成嚴重危害,傳播風險有限,實驗室感染后很少引起嚴重疾病,并且具備有效治療和預防措施的微生物。 第四類是指在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。 二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對
11、人體、動植物或環(huán)境危害較低,不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子,對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害,具有有效的預防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性,主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病,或對動植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預防治療措施。四級 對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性,通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預防治療措施。 一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。 從事高致病性病原微生物相關實驗活動
12、應當有名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內,只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關實驗活動。應有健全安全保衛(wèi)制度 。 實驗室工作人員應掌握實驗室技術規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應有符合要求的防護用品,應建立健康檔案;進行預防接種。 實驗室應有科學、嚴格的管理制度,定期對實驗室設施設備、材料等進行檢查、維護和更新,應對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置,防止環(huán)境污染。 生 物 安 全三、實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任 實驗室感染控制工作包括定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌(毒)種和樣本保存與使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其
13、他廢物處置等實施情況。 實驗室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時,預防、控制措施包括:封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微生物擴散的場所;開展流行病學調查;對病人進行隔離治療,對相關人員進行醫(yī)學檢查;對密切接觸者進行醫(yī)學觀察;進行現(xiàn)場消毒;對染疫或者疑似染疫的動物采取隔離、撲殺等措施。 監(jiān)督的主要內容是監(jiān)督病原微生物實驗室執(zhí)行國家有關法律、行政法規(guī)、國家標準和要求的記錄、檔案及報告的情況。 法律責任的核心是承擔造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的法律責任。思 考 題名詞解釋:滅菌、消毒、防腐、無菌、無菌操作。 試述高壓蒸汽滅菌法、紫外線殺菌法的原理、適用、特點? 濾過除菌法的應用范圍。影響
14、消毒劑消毒滅菌效果的因素有哪些?噬菌體的概念及特點噬菌體是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒;個體微小,可以通過細菌濾器;無細胞結構,主要由衣殼(蛋白質)和核酸組成;只能在活的微生物細胞內復制增殖,是一種專性胞內寄生的微生物。噬菌體分布極廣。第4章 噬菌體第一節(jié) 噬菌體的生物學性狀1.形態(tài)與結構 噬菌體有三種基本形態(tài),即蝌蚪形、微球形和細桿形。大多數(shù)噬菌體呈蝌蚪形。結構:由頭部和尾部組成;化學組成:蛋白質與核酸;核酸類型:為DNA或RNA,大多數(shù)DNA噬菌體的DNA為線狀雙鏈;噬菌體具有抗原性;抵抗力:比一般細菌繁殖體強。 毒性噬菌體(virulent phage) 能在宿主細胞內增殖,產(chǎn)生許多子代噬菌體,并最終裂解細菌。 液體培養(yǎng)基:透明澄清 固體培養(yǎng)基:噬斑空斑試驗第二節(jié) 毒性噬菌體 噬斑:在固體培養(yǎng)基上,將適量噬菌體和宿主菌液混合接種培養(yǎng)后,培養(yǎng)基表面可出現(xiàn)透亮的溶菌空斑,每個空斑系由一個噬菌體復制增殖并裂解宿主菌后形成的。噬斑形成單位:不同噬菌體噬斑的形態(tài)與大小不盡相同。通過噬斑計數(shù),可測知一定體積內的噬菌體數(shù)量。 毒性噬菌體的復制周期 毒性噬菌體在宿主菌內的增殖過程(復制周期或溶菌周期)包括吸附、穿入、生物合成
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