HPLC法測定阿莫西林顆粒劑的含量及有關(guān)物質(zhì)

1、HPLC法測定阿莫西林顆粒劑的含量及有關(guān)物質(zhì)【關(guān)鍵詞】阿莫西林顆粒劑含量測定有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜法阿莫西林顆粒劑是香港聯(lián)邦制藥廠產(chǎn)品，是廣譜半合成青霉素類抗生素，具有療效好、不易致過敏等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于兒童呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)感染。阿莫西林顆粒劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)采用選擇性較差，影響因素較多，試劑配制繁雜且有一定毒害，操作步驟也較繁瑣的紫外分光光度法進(jìn)展含量測定，未進(jìn)展有關(guān)物質(zhì)的檢查。該制劑在?國家藥品標(biāo)準(zhǔn)?化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)第二冊中有收載，也未進(jìn)展有關(guān)物質(zhì)檢查。作為兒童藥品，為了更好地控制本產(chǎn)品質(zhì)量，進(jìn)步進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)，保證產(chǎn)品的療效，本文采用高效液相色譜法1-4

2、對阿莫西林顆粒劑中阿莫西林的含量及有關(guān)物質(zhì)進(jìn)展研究，建立了快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的含量測定方法及專屬、靈敏的有關(guān)物質(zhì)檢查方法，可更好用于本品的質(zhì)量控制。2方法與結(jié)果2.1檢測波長的選擇取樣品適量，加流動相溶解并稀釋，在波長200300n之間進(jìn)展紫外掃描，結(jié)果阿莫西林在230n波長處有最大吸收，同時雜質(zhì)在230n也有較大響應(yīng)。因此選擇230n為本法的檢測波長。2.2含量測定A.對照品;B.樣品圖1阿莫西林顆粒劑含量測定的HPL色譜圖略Figure1HPLfaxiillin2.2.2溶液的制備對照品溶液：精細(xì)稱取阿莫西林對照品適量，加流動相制成每1L含0.5g的溶液，即得。供試品溶液：取裝量差異項下

3、的內(nèi)容物，研細(xì)，精細(xì)稱取粉末適量，加流動相溶解并定量稀釋成每1L含0.5g的溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.2.3專屬性試驗取空白輔料按“2.2.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果說明空白輔料對樣品測定無干擾。將供試品在60溫度下放置10d，于第10天取樣，按“2.2.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果說明本品經(jīng)高溫加速實驗后，雜質(zhì)總數(shù)和總量均有所增加，主成分與各種分解產(chǎn)物完全別離。將供試品在相對濕度92.5%KN3飽和溶液，溫度35下放置10d，于第10天取樣，按“2.2.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果說明本品經(jīng)高濕加速實驗后，雜質(zhì)總數(shù)和總量均有所增加，主成分與各種分解產(chǎn)物完全別離。色譜圖見圖

4、2。A.空白輔料;B.高溫降解;.高濕降解;1.阿莫西林圖2阿莫西林專屬性試驗HPL色譜圖略Figure2HPLfaxiillinfrseletivitytest2.2.4線性關(guān)系考察精細(xì)稱取阿莫西林對照品適量，用流動相溶解并稀釋成含阿莫西林0.09947、0.1989、0.3979、0.4973、0.5968、0.7958、0.9947g/L的溶液，按“2.2.1項下的色譜條件進(jìn)展測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為A=29328-6.7868，r=0.9999n=7。結(jié)果說明，阿莫西林質(zhì)量濃度在0.11g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。2.2.5精細(xì)度試驗取同一批供

5、試品批號173741份，按“2.2.1項下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積的平均值為16025.6，RSD為0.04%n=5，說明方法精細(xì)度良好。2.2.6穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液分別于配制后08h內(nèi)按“2.2.1項下的色譜條件進(jìn)展測定，記錄峰面積，結(jié)果阿莫西林的峰面積RSD為0.1%，說明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.7重復(fù)性試驗取同一批樣品批號173746份，分別按“2.2.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定，計算得阿莫西林的平均含量為104.1%，RSD為0.6%n=6，說明分析方法重復(fù)性良好。2.2.8回收率試驗稱取空白輔料，分成9等份，3份為組，分別精細(xì)參加一定量的阿莫西林對照品，充分混合均勻

6、，置50L量瓶中，按“2.2.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果阿莫西林平均回收率為100.0%，RSD=0.2%，說明本方法準(zhǔn)確可靠。2.2.9檢測限在“2.2.1項的色譜條件下，當(dāng)阿莫西林對照品進(jìn)樣濃度為0.05g/L時，記錄的色譜峰峰高約為基線噪音3倍，根據(jù)進(jìn)樣量20L計算，阿莫西林的檢測限為1ng。2.3有關(guān)物質(zhì)表1線性梯度洗脫略Table1Gradientelutin2.3.2溶液的制備對照品溶液：精細(xì)稱取阿莫西林對照品，加流動相A制成每1L含20g的溶液，即得。供試品溶液：取裝量差異項下的內(nèi)容物，研細(xì)，精細(xì)稱取粉末適量，加流動相A溶解并稀釋成每1L含2g的溶液，濾過，取續(xù)

7、濾液，即得。A.對照品;B.樣品;.空白輔料;1.阿莫西林圖3阿莫西林顆粒劑有關(guān)物質(zhì)測定的HPL色譜圖略Figure3HPLfaxiillinandipurities2.3.3專屬性試驗將供試品在60溫度下放置10d，于第10天取樣，按“2.3.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果說明本品經(jīng)高溫加速實驗后，雜質(zhì)總數(shù)和總量均明顯增加，主成分與各種分解產(chǎn)物完全別離。將供試品在相對濕度92.5%KN3飽和溶液，溫度35下放置10d，于第10天取樣，按“2.3.2項方法制備溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果說明本品經(jīng)高濕加速實驗后，雜質(zhì)總數(shù)和總量均有所增加，主成分與各種分解產(chǎn)物完全別離。色譜圖見圖4。A.高溫降解;B.

8、高濕降解;1阿莫西林圖4阿莫西林專屬性試驗HPL色譜圖略Figure4HPLfaxiillinfrseletivitytest2.3.4線性關(guān)系考察精細(xì)稱取阿莫西林對照品適量，用流動相溶解并稀釋成含阿莫西林0.0497、0.0248、0.0124、0.0062、0.0012g/L的溶液，按“2.3.1項下的色譜條件進(jìn)展測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為A=29328-6.6772，r=0.9998n=5。結(jié)果說明，阿莫西林質(zhì)量濃度在0.0490.0012g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。2.3.5重復(fù)性試驗取同一批樣品批號173746份，按“2.3.2項方法制備溶液，

9、進(jìn)樣測定，計算得單個最大雜質(zhì)含量為0.53%，RSD為2.1%，總雜質(zhì)含量為1.2，RSD為2.0%n=6，說明分析方法重復(fù)性良好。2.3.6檢測限在“2.3.1項的色譜條件下，當(dāng)阿莫西林對照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度為0.1g/L時，記錄的色譜峰峰高約為基線噪音3倍，根據(jù)進(jìn)樣量20L計算，得阿莫西林的檢測限為2ng。2.4樣品測定按擬定的方法測定4批樣品中阿莫西林的含量，結(jié)果見表2。表2含量與有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果略Table2ntentsandrelatedsubstanefaxiillin3討論3.1取3批樣品同時采用原標(biāo)準(zhǔn)的UV法和本文的HPL法進(jìn)展含量測定，結(jié)果見表3。結(jié)果說明HPL法測得的含量均小于

10、UV法，可能是因為HPL法選擇性好，能將阿莫西林與相似構(gòu)造雜質(zhì)別離，因此說明采用HPL法可更專屬、快速地測定阿莫西林顆粒劑中阿莫西林的含量。表32種含量測定方法的比擬略Table3ntentsfaxiillinbytethds3.2分別對剛消費及存放1年后產(chǎn)品進(jìn)展有關(guān)物質(zhì)考察比擬，結(jié)果單個最大雜質(zhì)含量由0.23增加為0.53，總雜質(zhì)含量由0.44增加為1.14，說明對阿莫西林顆粒有關(guān)物質(zhì)的檢查是非常必要的。3.3分別選用色譜柱TherDS182004.6，5、Tigerkin182004.6，5、SHIADZUDS182504.6，5，取同一批樣品分別進(jìn)展試驗，結(jié)果3種色譜柱理論塔板數(shù)均到達(dá)2000以上，主峰與各雜質(zhì)的別離度均符合要求，測定結(jié)果重現(xiàn)性好。3.4本文建立了專屬、靈敏、快速、準(zhǔn)確的阿莫西林顆粒劑的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法，可以更好的控制該藥品的質(zhì)量。本文結(jié)果提示這種主要用于兒童的藥品，對其進(jìn)展有關(guān)物質(zhì)檢查非常必要?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國家藥典委員會中華人民共和國藥典：2022年版二部S北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2022：296.2李