臨床酶學(xué)檢驗技術(shù)

1、臨床酶學(xué)檢驗技術(shù)第1頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第一節(jié) 酶學(xué)基本知識 酶的本質(zhì)-絕大部分的酶是蛋白質(zhì)，有些酶是核酸 和酶蛋白組成的復(fù)合體，極少數(shù)酶的本質(zhì)是核酸。 酶的特性-極高的催化效率、高度的特異性 (specificity)以及催化作用的可調(diào)節(jié)性 酶的結(jié)構(gòu)與功能 單純酶 酶蛋白(apoenzyme) 結(jié)合酶 輔酶(coenzyme) 輔因子(cofactor) 輔基(prosthetic group)第2頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日 酶是蛋白質(zhì)，具有一、二、三級結(jié)構(gòu)，有些酶還具 有四級結(jié)構(gòu)。 單體酶(monomeric enzyme)

2、-只由一條多肽鏈構(gòu)成 寡聚酶 (oligomeric enzyme)-由多個相同或不同 亞基以非共價鍵連接的酶 多酶體系(multienzyme system)-由幾種不同功能 的酶彼此聚合而成的多酶復(fù)合物 酶的必需基團(essential group)-與酶的活性密 切相關(guān)的基團 酶的活性中心(active center)-組成具有能與底 物結(jié)合并起催化反應(yīng)的特定空間結(jié)構(gòu)區(qū)域第3頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日酶的命名、分類與編號 酶的命名-習(xí)慣命名法、系統(tǒng)命名法 酶的分類-可分為六大類 氧化還原酶(oxido-reductases)、轉(zhuǎn)移酶(transferases

3、)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構(gòu)酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases) 酶的編號-用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號 第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類， 第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)。第4頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日 習(xí)慣用名 英文縮寫 EC編號 系統(tǒng)名乳酸脫氫酶 LD（LDH） 1.1.1.27 L乳酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶 MAO 1.4.3.4 單胺：氧化還原酶-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 -GT/GGT 2.3.2.2 -谷氨酰肽：氨基酸-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶門冬氨酸氨基

4、轉(zhuǎn)移酶 AST 2.6.1.1 L-門冬氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶） (GOT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 ALT 2.6.1.2 L-丙氨酸：-酮戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶） (GPT)肌酸激酶 CK 2.7.3.2 三磷酸腺苷：肌酸轉(zhuǎn)磷酸酶堿性磷酸酶 ALP(AKP) 3.1.3.1 正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學(xué)分析中常用酶的名稱與編號第5頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第6頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日三、酶促反應(yīng)動力學(xué)（一）酶促反應(yīng) 方程第7頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日（二）酶促反應(yīng)進程第8頁，共29頁，

5、2022年，5月20日，6點36分，星期日（三）酶動力學(xué)參數(shù) 1反應(yīng)速度2米氏常數(shù) (1)初速度指在反應(yīng)最初階段底物的消耗量很小 （一般在50%以內(nèi)）時的反應(yīng)速度 (2)最大反應(yīng)速度 指當(dāng)酶的結(jié)合位點與底物結(jié)合飽和時的反應(yīng)速度 第9頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日(四)酶偶聯(lián)反應(yīng) A B C D 酶學(xué)分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶 Ei指示酶Ea輔助酶ExEiEa工具酶第10頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第11頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第二節(jié) 血清酶變化的生理病理機制 一、血清酶的來源與去路 （一

6、）血清酶的來源 1血漿固有酶 2非血漿固有酶 外分泌酶 細胞酶 （二）血清酶的去路 1腎小球濾過從尿液中排出 2網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除 3血管內(nèi)失活或滅活 第12頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日二、血清酶變化的生理病理機制 （一）血清酶的生理差異 1性別 2年齡 3飲食 4運動 5妊娠（二）血清酶變化的病理機制 1酶合成異常 2細胞內(nèi)酶的滲漏 3酶進入血液的方式 4其他血管內(nèi)的抑制作用、清除速度 第13頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日 (一)酶活性單位 1慣用單位 2國際單位-在特定的條件下，一分鐘內(nèi)使底 物轉(zhuǎn)變一微摩爾的酶量為一個國際單位。 3Kat

7、al單位-在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉(zhuǎn)化 一摩爾底物的酶量。1katal60106U 第三節(jié) 酶含量的表示方法 一、酶活性濃度表示法 第14頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日（二）酶活性濃度 指單位體積樣品中的酶活性單位 （三）正常上限升高倍數(shù)（ULN) 是指用測得的酶活性結(jié)果除以參考范圍上限 第15頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第16頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日二、酶蛋白質(zhì)量濃度表示法 測定酶蛋白質(zhì)量濃度優(yōu)點 ： 靈敏度高特異性高 可測定無活性的酶 與酶活性測定一起，計算免疫比活性 在同工酶測定中更有價值 第17頁，共

8、29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第四節(jié) 酶催化活性濃度測定的理論基礎(chǔ)一、定時法 二、連續(xù)監(jiān)測法 第18頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日（三）連續(xù)監(jiān)測法的方法設(shè)計 1以人工合成色素原做底物的連續(xù)監(jiān)測2NAD( P)H的連續(xù)監(jiān)測 3以Trinder反應(yīng)做指示反應(yīng)的連續(xù)監(jiān)測 4特殊反應(yīng)類型的連續(xù)監(jiān)測 第19頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第五節(jié) 酶活性測定的影響因素與最適條件的確定一、方法因素的影響（一）正向反應(yīng)與逆向反應(yīng)（二）檢測底物或檢測產(chǎn)物 （三）底物啟動模式與樣品啟動模式 第20頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分

9、，星期日二、測定條件的影響與最適條件的確定（一）底物種類和濃度（二）緩沖液種類、pH和離子強度 （三）反應(yīng)溫度 （四）輔助因子和激活劑（五）抑制劑 （六）酶偶聯(lián)法中的輔助酶和指示酶 （七）延滯期與線性期的確定 （八）樣品與試劑比例 第21頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日三、其他因素對測定結(jié)果的影響（一）儀器（二）校準物 （三）實驗參數(shù) （四）副反應(yīng) 第22頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第六節(jié) 同工酶檢測技術(shù)一、電泳法二、抑制法三、其他方法 （一）熱變性 （二）親和層析法 第23頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日 免疫抑制法

10、 利用同工酶的一種亞基與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。 不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性2：CK-MB活性； 所測CK-MM和CK-MB之總活性CK-MB活性CK-MM活性。第24頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日第七節(jié) 目前常用診斷酶的酶活性測定一、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶與門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測定 第25頁，共29頁，2022年，5月20日，6點36分，星期日L-丙氨酸 -酮戊二酸 -丙酮酸 L-谷氨酸丙酮酸 NADH H+ 乳酸 NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯(lián)法測定ALT340nmA/min-酮酸標本中GLDH標本中試劑1試劑2第26頁，共29頁