新城疫病毒對(duì)血管生長(zhǎng)的抑制作用

1、新城疫病毒對(duì)血管生長(zhǎng)的抑制作用【摘要】目的研究雞新城疫病毒對(duì)血管的生長(zhǎng)抑制作用。方法采用小鼠肺癌轉(zhuǎn)移模型觀測(cè)雞新城疫病毒NDV對(duì)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響及組織內(nèi)微血管的生長(zhǎng)情況；用體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)TT檢測(cè)NDV在不同劑量和作用時(shí)間下對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞EV304細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)；用PI和Hehst33342進(jìn)展熒光染色檢測(cè)NDV作用后細(xì)胞有無(wú)凋亡改變及其形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果NDV在體內(nèi)可以有效抑制小鼠發(fā)生癌轉(zhuǎn)移時(shí)組織內(nèi)微血管的生成，在體外可以抑制EV304細(xì)胞的增殖并導(dǎo)致較為細(xì)微的凋亡現(xiàn)象。結(jié)論體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均說(shuō)明NDV可以抑制腫瘤發(fā)生時(shí)微血管的生長(zhǎng)，這一作用通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖而非直接的細(xì)胞毒作用實(shí)現(xiàn)，

2、該作用機(jī)制可能與某種特定病毒蛋白有關(guān)，尚待進(jìn)一步研究?！娟P(guān)鍵詞】NDV；血管生成抑制劑；肺轉(zhuǎn)移GrthInhibitinfNeastleDiseaseVirus(NDV)nVEinKeyrds：NDV;Angigenesisinhibitr;Pulnaryetastasis腫瘤生長(zhǎng)依賴(lài)從生長(zhǎng)環(huán)境中獲得營(yíng)養(yǎng)并向環(huán)境排泄代謝產(chǎn)物，當(dāng)腫瘤細(xì)胞的量較為少時(shí)，其與環(huán)境之間的物質(zhì)交換可以通過(guò)彌散的方式來(lái)完成，但是，當(dāng)腫瘤組織增大到一定程度時(shí)，物質(zhì)交換就需要通過(guò)其間的血管網(wǎng)來(lái)完成。研究說(shuō)明，腫瘤組織的增長(zhǎng)速度與其對(duì)血液供給的依賴(lài)性成正比。因此，從理論上來(lái)說(shuō)，通過(guò)抑制血管生長(zhǎng)進(jìn)而阻斷腫瘤的血供，可以到達(dá)抑制腫

3、瘤增長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的目的。大量研究說(shuō)明，雞新城疫病毒可以通過(guò)直接的細(xì)胞毒作用和對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用起到抗腫瘤效果1。本研究通過(guò)體內(nèi)、體外兩種方法討論了雞新城疫病毒對(duì)血管生長(zhǎng)的抑制作用，進(jìn)一步提醒了雞新城疫病毒抗腫瘤作用的機(jī)理。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.2肺轉(zhuǎn)挪動(dòng)物模型的建立取接種7天左右的種鼠，頸椎脫臼處死后抽取腹水，用生理鹽水稀釋至2.5106/L。經(jīng)尾靜脈注射接種瘤細(xì)胞，每鼠0.2L2。1.2.3抗腫瘤轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)將接種后的小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組及治療組，每組10只。接種后24小時(shí)起腹腔給藥血凝效價(jià)1640，0.2L/只，每3天給藥一次，對(duì)照組給等量PH7.2的PBS，共給

4、藥5次。接種后第15天頸椎脫臼處死小鼠，解剖取肺并檢查有無(wú)其他臟器及部位的轉(zhuǎn)移。肺組織常規(guī)固定、包埋、切取最大截面計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移灶數(shù)，并觀察肺組織內(nèi)血管的生長(zhǎng)情況。1.2.5熒光顯微鏡檢測(cè)藥物對(duì)EV304細(xì)胞核形態(tài)學(xué)特征的影響分別將Hehst33342和碘化丙啶PI配成100g/L的母液，用前等量混合。細(xì)胞經(jīng)14NDV處理16h、24h、48h后分組搜集。每個(gè)標(biāo)本取200L移入EP管中，參加熒光染料Hehst33342至終濃度10g/L，碘化丙啶PI20g/L，37下染色15in，取20L細(xì)胞懸液迅速滴于載玻片上，加蓋玻片，紫外光激發(fā)，在熒光顯微鏡下觀察可見(jiàn)4種細(xì)胞形態(tài)，活細(xì)胞VN染為藍(lán)色，核呈正常

5、構(gòu)造；早期凋亡細(xì)胞VA染為藍(lán)色，核呈固縮狀或圓珠狀；非凋亡的死亡細(xì)胞NVN染為紅色，核呈正常構(gòu)造；晚期凋亡細(xì)胞NVA也染為紅色，但可見(jiàn)明顯的染色質(zhì)凝聚，細(xì)胞凋亡率可由以下公式計(jì)算4：凋亡率=VA+NVAVN+NVN+VA+NVA100%2結(jié)果2.1雞新城疫病毒對(duì)小鼠肺血管生成的影響S180肉瘤尾靜脈內(nèi)接種以形成肺轉(zhuǎn)移灶為主，亦有其他部位的轉(zhuǎn)移。10只對(duì)照組小鼠肺外表及肺內(nèi)均出現(xiàn)直徑0.52.0的粒狀轉(zhuǎn)移灶，肺組織顏色深紅，有明顯的充血病癥圖略，其中出現(xiàn)胸膜黏連3只，腹膜、腋下轉(zhuǎn)移性包塊2只。治療組肺組織發(fā)白，除2只肉眼可見(jiàn)極小的轉(zhuǎn)移灶外，其余均為鏡下轉(zhuǎn)移灶圖略。光鏡下S180肉瘤實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移對(duì)

6、照組的轉(zhuǎn)移灶內(nèi)及周?chē)┴S富，瘤細(xì)胞密集，生長(zhǎng)旺盛，有明顯的血管增生擴(kuò)張、充血和出血，一些血管腔內(nèi)有從轉(zhuǎn)移灶侵入的瘤細(xì)胞。并見(jiàn)大片壞死區(qū)，見(jiàn)圖1，此外，對(duì)照組肝臟也可見(jiàn)少量散在的轉(zhuǎn)移灶。NDV組小鼠肺內(nèi)也見(jiàn)散在的小轉(zhuǎn)移灶，其中有散在的凋亡細(xì)胞。未見(jiàn)血管擴(kuò)張、充血，無(wú)血管長(zhǎng)入，組織內(nèi)血管細(xì)、少、閉鎖，亦未見(jiàn)成片的壞死灶，見(jiàn)圖2。2.2TT法觀察NDV對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞EV304的影響各濃度NDV對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞EV304的增殖均有抑制作用，且呈良好的時(shí)間量效關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1，治療組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率同對(duì)照組的抑制率比擬有極顯著差異P0.01。表1TT法觀察雞新城疫病毒對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞EV304增殖的抑制作用與空白組比擬:P0.05；*與空白組比擬:P0.012.3熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞核變化在熒光顯微鏡下，可以觀察到存活細(xì)胞和凋亡早、晚期及壞死的細(xì)胞。藥物作用0、12、24、48h其凋亡率分別為0.5%、4%、6%、11%，隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡率增高，呈時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，見(jiàn)表2。統(tǒng)計(jì)說(shuō)明，NDV組第12、24、48小時(shí)時(shí)間段凋亡率與陰性組相比雖然表現(xiàn)為不同程度的增加，但均未見(jiàn)顯著性差異。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)給藥組隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其與空白組相比細(xì)胞密度的降低并不主要表現(xiàn)為死亡細(xì)胞的增加，而是NDV抑制細(xì)胞增殖的