藥物分析講義和練習(xí)課程

1、第八章藥物的雜質(zhì)檢查要求第一節(jié)雜質(zhì)的限量檢查重點(diǎn)：1、雜質(zhì)的來源2、雜質(zhì)限量的計(jì)算一、雜質(zhì)的來源和分類藥物純度：指藥物純凈程度，反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣，含有雜質(zhì)是影響藥物純度的主要雜質(zhì)：1. 副作用的物質(zhì)2. 本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)。在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，對藥品的雜質(zhì)檢查是非常重要的一項(xiàng)內(nèi)容。不但規(guī)定有雜質(zhì)檢查的項(xiàng)目，同時(shí)還規(guī)定有檢查的方法和雜質(zhì)的限量。雜質(zhì)的來源：1、生產(chǎn)過程中引入：（1）原料、反應(yīng)及副產(chǎn)物試劑、溶劑、催化劑類生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)藥物的雜質(zhì)檢查（一）雜質(zhì)的限量檢查1.雜質(zhì)的來源與分類雜質(zhì)與藥物純度雜質(zhì)的來源與分類2

2、.雜質(zhì)限量的檢查與計(jì)算雜質(zhì)限量檢查法雜質(zhì)限量的計(jì)算（二）一般雜質(zhì)的檢查1.氯化物檢查法檢查方法與注意事項(xiàng)2.硫酸鹽檢查法檢查方法與注意事項(xiàng)3.鐵鹽檢查法檢查方法與注意事項(xiàng)4.重金屬檢查法檢查方法與適用范圍5.砷鹽檢查法檢查方法與注意事項(xiàng)6.干燥失重測定法測定方法與適用范圍7.熾灼殘?jiān)鼨z查法檢查方法與注意事項(xiàng)8.易炭化物檢查法檢查方法9.殘留溶劑測定法常見的分類及殘留量的測定方法10.溶液顏色檢查法檢查方法11.澄清度檢查法檢查方法（三）特殊雜質(zhì)的檢查1.雜質(zhì)檢查項(xiàng)目與限度雜質(zhì)項(xiàng)目確定原則與限度制訂依據(jù)2.雜質(zhì)檢查分析方法分析方法的選擇與要求2、貯藏過程中產(chǎn)生：水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶形轉(zhuǎn)變

3、、聚合、潮解和發(fā)霉等雜質(zhì)的分類：藥物中的雜質(zhì)按來源分為一般雜質(zhì)：指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)；如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘?jiān)取Ｒ话汶s質(zhì)其檢查方法收載藥典的附錄中。特殊雜質(zhì)：指某一個(gè)或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中引入的雜質(zhì)，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載藥典正文各藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。按結(jié)構(gòu)分為：無機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)雜質(zhì)。按是否有害分為：普通雜質(zhì)、毒性雜質(zhì)。二、雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)限量：指藥物中允許雜質(zhì)存在的最大量，通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示S：供試品的量，

4、C：雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，V 雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，L 雜質(zhì)限量檢查溴化鈉中的砷鹽，規(guī)定含砷量不得過 0.0004%，取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 2.0ml（每 1ml 相當(dāng)于 1g 的 As）標(biāo)準(zhǔn)砷斑，應(yīng)取供試品A.0.1gB.0.2gC.0.5gD.1.0gE.2.0g答疑【正確5689080101】C：已知 L=0.0004%，C=1g/ml，V=2.0ml，求 S。S=CV/L=12.0/0.0004%=5105g=0.5g。葡萄糖中重金屬的檢查：取葡萄糖 4.0g，加水 23ml 溶解后，加醋酸鹽緩沖液（ 3.5）2ml，依法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。問應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（每 1ml 相當(dāng)于 10g

5、 的 Pb）多少毫升（ml）?考點(diǎn)：雜質(zhì)的限量計(jì)算，例題（詳見講義）第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法重點(diǎn)：1、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽檢查法所用的試劑、測定條件2、炙灼殘?jiān)?、干燥失重、易碳化物、殘留溶劑所采用的方法一、氯化物檢查法原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化物的白色混濁比色。測定條件：1、標(biāo)準(zhǔn) NaCl 溶液 0.01mgCl-/ml，在測定條件下，以 50ml 中含 5080g 的 Cl 為宜，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn) NaCl溶液 58ml。 原因：在此范圍內(nèi)氯化物所顯渾濁梯度明顯，便于比較。2、反應(yīng)需在硝酸酸性條件下進(jìn)行，且以 50ml 供試溶液中含稀硝酸 10ml

6、為宜。加稀硝酸的目的：避免弱酸銀鹽的沉淀的形成而干擾檢查。加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁。3、試劑：硝酸銀4、供試液和對照液稀釋后，再加硝酸銀溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀5、避光、暗處放置 5 分鐘后比濁，目的：防止 AgCl 見光分解6、比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。干擾及其消除：溶液如果渾濁過濾，取濾液檢查。溶液如果有顏色內(nèi)消色法：供試品溶液處理后作為對照溶液。外消色法：根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)設(shè)計(jì)排除干擾的方法。如高錳酸鉀中氯化物的檢查，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。二、硫酸鹽檢查法4與氯化鋇在鹽酸酸性溶液中生成硫酸鋇的白色渾濁液，比較。2原理：利用 SO測定條

7、件：1、標(biāo)準(zhǔn)K2SO4 溶液 0.1mg/ml，50ml 溶液中含 0.10.5mg 的所顯渾濁梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn) K2SO4 溶液15ml。2、反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進(jìn)行，且以 50ml 供試溶液中含稀鹽酸 2ml 為宜。加鹽酸的目的：可防止碳酸鋇或磷酸鋇等沉淀的生成 。值約為 1 為宜原因：若酸度過高，可使硫酸鋇溶解度增大，檢查的靈敏度下降。 3、試劑：氯化鋇4、供試液和對照液稀釋后，再加氯化鋇溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀5、比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。三、鐵鹽檢查法原理：原理為鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫 酸銨生成紅色可溶性硫 酸鐵配位離子，與對照比較。測定條件：3+1

8、、用 FeNH （SO ） 12H O（硫酸鐵銨）配制標(biāo)準(zhǔn)鐵貯備液（加入硫酸防止 Fe的水解），標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液442210mg Fe3+/ml，50ml 溶液中含 1050mg 的 Fe3+顯色梯度明顯，一般取標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液 1.05.0ml2、反應(yīng)需在鹽酸酸性條件下進(jìn)行，防止 Fe3+的水解。且以 50ml 供試溶液中含稀鹽酸 4ml 為宜。3、試劑：硫 酸銨。加過量硫 酸銨，使反應(yīng)向正反應(yīng)方向進(jìn)行。4、加氧化劑氧化 Fe2+為 Fe3+。加過硫酸銨可氧化 Fe2+為 Fe3+，同時(shí)可防止光線使硫色。酸鐵還原或分解褪5、比色方法：同置于白色背景上，自上向下觀察。干擾及消除可用正丁醇提取后，分取正丁醇

9、層比色。氯化物、硫酸鹽、鐵鹽檢查方法的比較四、重金屬檢查法檢查重金屬：銀、鉛、 、銅、鎘、錫、銻、鉍等能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬。中國藥典重金屬檢查法一共收載有四法，以 Pb 為代表。氯化物檢查法硫酸檢查法鐵鹽檢查法原理-Fe（SCN）6 紅色標(biāo)準(zhǔn)溶液NaCl 溶液，10mgCl-/ml，5-8mlK2SO4 溶液，0.1mg/ml，1-5ml硫酸鐵銨，10mg Fe3+/ml，1-5ml反應(yīng)試劑硝酸銀氯化鋇硫 酸按（過量）反應(yīng)條件稀硝酸，10ml稀鹽酸，2ml稀鹽酸+氧化劑（過硫酸銨），4ml干擾及消除沉淀過濾過濾萃取顏色內(nèi)消色法、外消色法內(nèi)消色法、外消色法比色黑色背景黑色背景白色

10、背景第一法：硫代乙酰胺法原理：適用范圍：適用于在實(shí)驗(yàn)條件下供試液澄清、無色，對檢查無干擾或經(jīng)處理后對檢查無干擾的藥物。測定條件：1、每 1ml 含 10gPb 的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，適宜比色范圍為 27ml 溶液中含 1020mg 的 Pb2+。2、用醋酸鹽緩沖液（ 3.5）控制溶液值為 33.53、試劑：硫代乙酰胺干擾及消除：供試品有顏色：外消色法內(nèi)消色法第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法適用范圍：用于在水中難溶，或能與重金屬離子形成配位化合物而影響檢查的有機(jī)藥物。原理：500600熾灼后的殘?jiān)?，?jīng)處理后，依一法檢查。第三法：硫化鈉法適用范圍：適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、原

11、理：妥類。重金屬檢查法的比較五、砷鹽檢查法中國藥典采用古古：和二乙基二硫代氨基甲酸銀法檢查藥物中微量的砷鹽。硫代乙酰胺法熾灼殘?jiān)蚧c法適用范圍溶解后溶液澄清、無色的藥物難溶于水，或能與重金屬離子形成配位化合物的藥物溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物原理樣品特殊處理無熾灼加硝酸加鹽酸氨水調(diào)中性硫代乙酰胺反應(yīng)無原理：是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的砷化氫氣體，遇溴化 試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下所生成的砷斑比較，來判斷藥物中砷鹽的含量。測定條件：1、2、3、標(biāo)準(zhǔn)砷溶液臨用新配，1mgAs/ml標(biāo)準(zhǔn)砷斑用 2ml 標(biāo)

12、準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于 2g酸性氯化亞錫及碘化鉀的作用是：As），清晰的砷斑還原 As5+為 As3+，加快反應(yīng)速度；實(shí)驗(yàn)裝置：1、密封性2、棉花過濾砷化氫氣體干擾及消除：鋅或供試品中含有硫化物在導(dǎo)氣管中裝入適量醋酸鉛棉花，用以吸收產(chǎn)生的硫化氫氣體。 二乙基二硫代氨基甲酸銀法原理：砷化氫與 Ag（DDC）吡啶溶液作用，使 Ag（DDC）中的銀還原為紅色膠態(tài)銀，直接比色或于 510nm波長處測定吸收度，進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)裝置：1、有機(jī)堿吸收反應(yīng)中產(chǎn)生的酸2、棉花過濾砷化氫氣體測試條件：1、2、3、供試溶液（或標(biāo)準(zhǔn)砷溶液）與古相同試驗(yàn)條件與古相同用有機(jī)堿吸收反應(yīng)中產(chǎn)生的二乙基二硫代氨基甲酸（HDDC）六、干

13、燥失重測定法古二乙基二硫代氨基甲酸銀法原理第一步第二步砷化氫與溴化 試紙反應(yīng)黃色至棕色斑點(diǎn)砷化氫與二乙基二硫代氨基甲酸銀反應(yīng)紅色標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)砷溶液，1mgAs/ml，用量 1-2ml反應(yīng)試劑溴化 試紙二乙基二硫代氨基甲酸銀吡啶溶液結(jié)果判斷目視比較色斑目視比色510nm 測定吸光度干燥失重是指藥物在規(guī)定條件下經(jīng)干燥后所減失的重量，根據(jù)所減失的重量和取樣量計(jì)算供試品干燥失重的百分率。主要檢查藥物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如殘留的常壓恒溫干燥法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。干燥至恒重。干燥溫度一般為 105。常壓室溫干燥法等。用于受熱易分解或揮發(fā)的藥物等。常用的干燥劑有硅膠、硫酸和五氧化二磷等。減壓恒

14、溫干燥法適用于低，受熱不穩(wěn)定（但能耐受一定溫度）及水分難趕除的藥物。減壓室溫干燥法適用于低或不能加熱的樣品。減壓干燥器常用干燥劑：五氧化二磷、無水氯化鈣、硅膠熱重分析法簡稱 TGA，是在程序控制溫度下，測量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度關(guān)系的方法。適用于結(jié)晶水的測定，也適用于貴重藥物或在空氣中易氧化藥物干燥失重的測定。七、熾灼殘?jiān)鼨z查法檢查有機(jī)藥物中混入的各種無機(jī)雜質(zhì)（如金屬的氧化物或鹽等）。原理：樣品炭化后+H2SO4 濕潤700800熾灼至恒重?zé)胱茪堅(jiān)蛩峄曳郑┘恿蛩崽幚砜梢源龠M(jìn)有機(jī)物的破壞，還可使雜質(zhì)轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的硫酸鹽。八、易炭化物檢查法檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)方法：H2S

15、O4 炭化后與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較九、殘留溶劑測定法殘留溶劑是指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑去的殘留溶劑的分類過程中使用的，但在工藝過程中未能完全除第一類溶劑是應(yīng)該避免使用的溶劑，一般為物或危害環(huán)境的物質(zhì)。如苯、四氯化碳第二類溶劑是應(yīng)限制使用的溶劑，一般具有非吡啶毒性，不可逆或可逆毒性。如甲苯、甲醇、正己烷、第三類溶劑是毒性低，對危害較小的溶劑。限度 0.5%。第四類溶劑是目前尚無足夠毒理學(xué)資料的溶劑。如石油醚、異丙醚 殘留溶劑的檢查方法采用氣相色譜法檢查藥物中的殘留溶劑。色譜柱：不同極性的載氣：氮?dú)鈾z測器：FID、ECD或高分子多孔小球?yàn)樘盍系奶畛渲┰嚻罚喉斂者M(jìn)樣、溶液直接進(jìn)樣色譜系統(tǒng)適用

16、性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性測定方法：內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法十、溶液顏色檢查法溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)含量的方法1、目視比色法與標(biāo)準(zhǔn)比色液比較的方法，全波長范圍定性觀察所用試劑：比色用重鉻酸鉀液（黃色），比色用硫酸銅液（藍(lán)色）比色用氯化鈷液（紅色）2、分光光度法照分光光度法于規(guī)定波長處測定吸光度3、色差計(jì)法使用色差計(jì)測定供試品溶液與水的色差值E*，與標(biāo)準(zhǔn)比色液與水的色差值E*比較，十一、澄清度檢查法檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。用作注射劑的原料藥，一般應(yīng)作此項(xiàng)檢查。檢查方法：對照法所用試劑：濁度標(biāo)準(zhǔn)液1.00%硫酸肼溶液與 10%托品溶液等量混合配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液濁度標(biāo)準(zhǔn)原液濁度標(biāo)準(zhǔn)液（

17、5 個(gè)級號）中國藥典規(guī)定，“澄清”系指供試品溶液的澄清度相當(dāng)于所用溶劑，或未超過 0.5 號濁度標(biāo)準(zhǔn)液。第三節(jié) 特殊雜質(zhì)的檢查重點(diǎn):雜質(zhì)檢查項(xiàng)目確定的依據(jù)一、雜質(zhì)檢查項(xiàng)目與限度特殊雜質(zhì)檢查的目的：控制不同藥物在生產(chǎn)和貯藏過程中可能引入的特有雜質(zhì)。確定雜質(zhì)檢查項(xiàng)目1、含量在 0.1%以上，或有強(qiáng)烈生物作用，或穩(wěn)定性試驗(yàn)的降解產(chǎn)物2、共存物質(zhì)為毒性雜質(zhì)，手性異構(gòu)體3、根據(jù)生產(chǎn)工藝確定殘留溶劑確定雜質(zhì)限度1、新藥：藥理毒理及臨床研究2、仿制藥：與已上市的藥品比較3、毒性、穩(wěn)定性為依據(jù)二、雜質(zhì)檢查的方法用于雜質(zhì)限量檢查的方法需要驗(yàn)證專屬性、檢測限和耐用性；用于雜質(zhì)定量測定的方法需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度、精密度、

18、專屬性、定量限、線性、范圍和耐用性?？键c(diǎn)：1、重金屬檢查法、砷鹽檢查法（試劑、加入的目的、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)裝置）2、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽檢查法所用試劑，可能結(jié)合具體藥物3、其他幾種雜質(zhì)檢查法的檢查目的及適用范圍檢查藥物中的殘留溶劑，各國藥典均采用重量法紫外-可見分光光度法 C.薄層色譜法D.氣相色譜法E.高效液相色譜法答疑【正確：5689080201】D殘留溶劑的檢查方法，殘留溶劑由于其揮發(fā)性，可用氣相色譜法進(jìn)行檢查。由于殘留溶劑為有機(jī)試劑，所以檢測器為 FID 檢測器，對于含鹵素的殘留溶劑，也可以用 ECD 檢測器。中國藥典鐵鹽檢查法使用的試劑有A.鹽酸 B.醋酸C.過硫酸銨 D.硫 酸銨E.

19、氯化亞錫答疑【正確：5689080202】ACD鐵鹽的檢查方法。鐵鹽檢查利用的是，在鹽酸酸性溶液中與硫 酸銨生成紅色可溶性硫酸鐵配位離子的反應(yīng)。所以用到的試劑是鹽酸、硫 酸胺。由于鐵有二價(jià)、三價(jià)之分，鐵鹽檢查是三價(jià)鐵的反應(yīng)，所以應(yīng)該將二價(jià)鐵轉(zhuǎn)化為三價(jià)鐵，因此還需要氧化劑過硫酸銨。為 ACD。硫 酸銨硫酸硫代乙酰胺D.氯化鋇 E.硝酸銀檢查以下雜質(zhì)應(yīng)使用試劑是1.鐵鹽答疑【正確5689080203】A2.重金屬 答疑【正確5689080204】C3.氯化物 答疑【正確5689080205】E4.易炭化物 答疑【正確5689080206】B：鐵鹽檢查利用三價(jià)鐵在鹽酸酸性溶液中與硫酸銨生成紅色可溶性

20、硫 酸鐵配位離子，用到的試劑是硫 酸銨。為 A。重金屬檢查有四種方法，前三種用到的試劑都是硫代乙酰胺法，第四種硫化鈉法用到的試劑是硫化鈉。所以為 C。氯化物檢查利用的是氯離子與硝酸銀反應(yīng)生成氯化銀沉淀，用的試劑是硝酸銀，所以是硫酸，所以為 E。易碳化物檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)，用的試劑為B。選項(xiàng)D 檢查的是硫酸鹽，利用的是硫酸根與氯化鋇反應(yīng)生成硫酸鋇沉淀。A.干燥失重測定法 B.熾灼殘?jiān)鼨z查 C.兩者皆是D.兩者皆不是1.有機(jī)物雜質(zhì)檢測法答疑【正確5689080207】D2.不溶物的測定法答疑【正確5689080208】D3.雜質(zhì)檢查法答疑【正確5689080209】

21、C4.有機(jī)藥物中不揮發(fā)無機(jī)物的檢測法答疑【正確5689080210】B5.藥物中揮發(fā)性物質(zhì)的檢測法答疑【正確5689080211】A：干燥失重主要檢查藥物中的水分，也包括其他揮發(fā)性物質(zhì)如殘留的等。熾灼殘?jiān)鼨z查主要檢查有機(jī)藥物中混入的各種無機(jī)雜質(zhì)。所以題 4 選擇 B，題 5 選擇 A。干燥失重 熾灼殘?jiān)鼨z查都是屬于雜質(zhì)檢查，所以題 3 選擇 C。題 1 有機(jī)物雜質(zhì)檢測法用的是易碳化物檢查法，所以選 D。題 2 不溶物測定利用的是物質(zhì)的溶解性。所以選 D可用于檢查的雜質(zhì)為A.氯化物 B.砷鹽 C.鐵鹽 D.硫酸鹽 E.重金屬1.在酸性溶液中與氯化鋇生成渾濁液的方法答疑【正確5689080212】D2.在酸性溶液中與硫 酸鹽生成紅色的方法答疑【正確5689080213】C3.在實(shí)驗(yàn)條件下與硫代乙酰胺形成均勻混懸溶液的方法答疑【正確5689080214】E4.Ag-DDC 法答疑5689080215【正確】B5.古答疑【正確5689080216】B：此題的是各種雜質(zhì)檢查的方法。題 1 檢查的是硫酸鹽，利用硫酸根與氯化鋇反應(yīng)。題 2 選 C。利用三價(jià)鐵與硫 酸銨生成紅色配合物。題 3 檢查的是重金屬，屬于重金屬檢查的第一法。題 4 檢查的是砷鹽，屬于砷鹽檢查的第二法。題 5 檢查的也是砷鹽，屬于砷鹽檢查的第一法。A.古（Gutzeit）法B.二乙基二硫代氨基甲酸銀法C.A 和 B