基因工程試題

1、基因工程試題A 一、名詞說(shuō)明（每題2 分,共 20 分）1、轉(zhuǎn)染 : 2、質(zhì)粒不親和性 : 3、cDNA 文庫(kù): 4、RACE: 5、基因工程 : 6、RT-PCR 7、插入失活 : 8、S-D 序列: 9、穿梭質(zhì)粒載體 : 10、多克隆位點(diǎn) : 二、挑選題（每題1 分,共 15 分）供體 II 受體 III 載體 IV 抗體 V 配體 1（）基因工程操作的三大基本元件是:I I + II + III I + III + IV II + III + IV II + IV + V III + IV + V 2（）基因工程的單元操作次序是 增,轉(zhuǎn),檢,切,接 切,接,轉(zhuǎn),增,檢 接,轉(zhuǎn),增,檢,切

2、 檢,切,接,增,轉(zhuǎn) 切,接,增,轉(zhuǎn),檢 3 生物工程的上游技術(shù)是 基因工程及分別工程 基因工程及發(fā)酵工程 基因工程及酶工程 基因工程及細(xì)胞工程 基因工程及蛋白質(zhì)工程 4 以下對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確選項(xiàng)：A 依靠于 RNA的 DNA聚合酶或稱為 RNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶 B 依靠于 cDNA的 DNA聚合酶或稱為 cDNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶 C 依靠于 DNA的 DNA聚合酶或稱為 DNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶 D 依靠于 RNA的 RNA聚合酶或稱為 rNA 指導(dǎo)的 RNA聚合酶 5 以下對(duì)限制性內(nèi)切酶描述正確選項(xiàng) 限制性內(nèi)切酶可識(shí)別任一的 DNA序列 使用限制性內(nèi)切酶時(shí),有時(shí)可顯現(xiàn)星活性 限

3、制性內(nèi)切酶可識(shí)別堿基數(shù)不超過(guò) 5 個(gè) 限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都是黏性末端6 T 4 -DNA 連接酶是通過(guò)形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起,其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是 2 -OH 和 5 -P 2 -OH 和 3 -P 3 -OH 和 2 -P 3 -OH 和 5 -P 5 -OH 和 3 -P 7 以下有關(guān)連接反應(yīng)的表達(dá),錯(cuò)誤選項(xiàng) 連接反應(yīng)的正確溫度為 12 16 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10% 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mM 連接酶通常應(yīng)過(guò)量 2-5 倍 DTT 在反應(yīng)中可加也可不加8（）以下哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大 . A 質(zhì)粒 B 黏粒

4、 C 酵母人工染色體 YAC D 噬菌體9 （）載體的功能是 I 運(yùn)輸外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II 為外源基因供應(yīng)復(fù)制才能III 為外源基因供應(yīng)整合才能 I I + II I + III II + III I + II + III 10 考斯質(zhì)粒（ cosmid）是一種 自然質(zhì)粒載體 由 入-DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體 能裂解受體細(xì)胞的烈性載體 具有溶原性質(zhì)的載體 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體11 以下有關(guān)基因的描述,錯(cuò)誤選項(xiàng) 蛋白質(zhì)是基因表達(dá)唯獨(dú)的產(chǎn)物 基因是 DNA鏈上具有編碼功能的片段 基因也可以是 RNA 基因突變不肯定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)變結(jié)構(gòu) 12（）關(guān)于 cDN

5、A的最正確的提法是： A 同 mRNA互補(bǔ)的單鏈 DNA B 同 mRNA互補(bǔ)的雙鏈 DNA C 以 mRNA為模板合成的雙鏈 DNA D 以上都正確 13（）某一重組 DNA （ 6.2 kb ） 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)；用 SmaI 酶切 后凝膠電泳上顯現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子,其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合,該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有 5 個(gè) 4 個(gè) 3 個(gè) 2 個(gè)14（） 同一種質(zhì)粒 DNA,以三種不同的形式存在,電泳時(shí),它們的遷移速率是： A OC DNASC DNPLDNA B SC DNAL DNAOC DNA C L DNAOC DNASC DNA D

6、SC DNAOC DNAL DNA 15（） cDNA 法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是 勝利率高 不含內(nèi)含子 操作簡(jiǎn)便 表達(dá)產(chǎn)物可以分泌 能訂正密碼子的偏愛(ài)性三、簡(jiǎn)答題（每題 5 分,共 25 分）1、什么是包涵體？2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過(guò)程是什么？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？4、作為基因工程載體必需具備的基本條件是什么？5、基因工程產(chǎn)生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題（每題 10 分,共 40 分）1 簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程2 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么？3 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？4 試述 3RACE技術(shù)原理和方法基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評(píng)分標(biāo)

7、準(zhǔn) A 一、挑選題（每題 1 分,共 15 分）1、 A 2、 A 3、 A 4、 A 5 、B 6 、D 7 、E 8 、C 9、 E 10 、B 11 、A 12、 C 13 、D 14 、B 15、 B 二、名詞說(shuō)明（每題 2 分,共 20 分）1、轉(zhuǎn)染：專指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕捉和表達(dá)噬菌體 DNA 分子的生命過(guò)程；2、質(zhì)粒不親和性：在沒(méi)有挑選壓力的情形下,兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)固地共存的現(xiàn)象；3、cDNA 文庫(kù)：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而成的克隆的集合；4、RACE ：是一種通過(guò) PCR 進(jìn)行 cDNA 末端快速克隆的技術(shù),是

8、以 mRNA 為模板反轉(zhuǎn)錄成 cDNA 第一鏈后用 PCR 技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到 3,或 5,端之間未知序列的方法；5、基因工程 :在分子水平上的進(jìn)行的遺傳操作,指將一種或多種微生物的基因或基因組提取出來(lái),或人工合成基因,按著人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)密的設(shè)計(jì),經(jīng)過(guò)體外加工重組,轉(zhuǎn)移到另一種生物體的細(xì)胞內(nèi),使之能在受體細(xì)胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術(shù)；6、RT-PCR: 先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA ,以寡聚dT 為引物合成cDNA 第一鏈,然后用已知一對(duì)引物,擴(kuò)增嵌合分子,這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR 7、Insert inaction: 即插入失活,基因工程載體上的某些挑選標(biāo)記基因經(jīng)常含某種或某幾種

9、限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn),在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理,并將外源DNA 片段插入該位點(diǎn),就插入的外源DNA 片段將破壞原有基因的讀碼框,往往導(dǎo)致原有的挑選標(biāo)記基因無(wú)法翻譯表達(dá),或即使翻譯表達(dá),形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì),這一現(xiàn)象稱為插入失活；8、S-D 序列：在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上,含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同 16S 核糖體 RNA 3,末端堿基互補(bǔ)的序列,該序列最初由 Shine 、Dalgarno 發(fā)覺(jué),故后來(lái)命名為 ShineDalgarno 序列,簡(jiǎn)稱 S-D序列；9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的挑選標(biāo)記,因而可在兩種不同宿主

10、細(xì)胞中 存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體；10、MCS ：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的 DNA 片段；三、簡(jiǎn)答題（共 25 分,每題 5 分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí),經(jīng)常以不溶性蛋白集合成的晶狀物形式存在,這種晶狀體即包涵體；包涵體的 形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象,這是由于肽鏈折疊過(guò)程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合,而 不是形成成熟的自然態(tài)或完全解鏈的蛋白；2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容？基本反應(yīng)過(guò)程是什么？PCR 反應(yīng)體系所要求的條件: a、被分別的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA 引物（約 20 個(gè)堿基左右）；b、具有熱穩(wěn)固性的酶如：T

11、agDNA 聚合酶； c、dNTP ；d、作為模板的目的DNA 序列, E 無(wú)菌水,F,緩沖液 PCR 反應(yīng)體系的基本反應(yīng)過(guò)程：預(yù)變性、變性、退火、延長(zhǎng)、復(fù)延長(zhǎng)；3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度； DNA 樣品的純度； DNA 的甲基化程度；酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間； DNA 分子的構(gòu)型；限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液；4、作為基因工程載體必需具備的基本條件是什么？能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)固的自我復(fù)制 具有合適的限制內(nèi)切酶位點(diǎn) 具有合適的挑選標(biāo)記基因5、基因工程產(chǎn)生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)覺(jué)和技術(shù)上的三大創(chuàng)造；理論上的三大發(fā)覺(jué)：證明了 DNA 是遺傳物

12、質(zhì) 揭示了 DNA 分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理 遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定 技術(shù)上的三大創(chuàng)造：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)覺(jué)與 DNA 切割 DNA 連接酶的發(fā)覺(jué)與 DNA 片段的連接 基因工程載體的討論與應(yīng)用 四、問(wèn)答題（每題 10 分,共 40 分）1 簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程 A 目的基因分析（1）ORF 分析（ 2）酶切位點(diǎn)分析 B 載體挑選與分析（1）多克隆位點(diǎn)分析（2）抗性標(biāo)記分析（3）啟動(dòng)子與其他挑選標(biāo)記分析 C 連接體系與連接時(shí)間確定 2 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么？?jī)?yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培育便利、操作簡(jiǎn)潔、成本低廉,基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景學(xué)問(wèn)清

13、晰,對(duì) 其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較明白,而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐,大腸桿菌已進(jìn)展成為一種安全的 基因工程試驗(yàn)體系,有多種適用的寄主菌株和載體系列,大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)；缺點(diǎn)：在通常情形下,細(xì)菌的RNA聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；很多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾,如正確的折疊和組裝,而細(xì)菌中通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制,從而可能導(dǎo)致真核基因 在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú)法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別,并被當(dāng)做“ 異已分子” 降解掉；3 如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？提高啟動(dòng)子強(qiáng)度 縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離 高效的翻譯起

14、始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)固性 用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整 SD 序列與 AUG 間的距離用點(diǎn)突變的方法轉(zhuǎn)變某些堿基增加 mRNA 的穩(wěn)固性的 減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷：誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制 提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)固性,防止其降解：克隆一段原核序列,表達(dá)融合蛋白采納某種突變菌株表達(dá)分泌蛋白質(zhì)4 試述 3RACE 技術(shù)原理和方法PCR 用于擴(kuò)增代表 mRNA 轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與其 3 或 5 末端之間區(qū)域的部分 cDNA 稱為快速擴(kuò)增 cDNA末端技術(shù)；假如已敿目的 mRNA 的一片段鏈內(nèi)短序列,據(jù)此或設(shè)計(jì)基因特異引物,用原先存在的 polyA 尾（3 末端）或附加的同聚尾（5 末端）互補(bǔ)的序列做末端引物,就可