樣本采集與實(shí)驗(yàn)室分析-2014課件

1、微生物食物中毒標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)室檢測及結(jié)果分析概述一、標(biāo)本采集二、檢測項(xiàng)目確定三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)四、結(jié)果解讀報告與分析五、案例分析準(zhǔn)確的檢測結(jié)果包括正確采集樣品正確選擇檢測方法多種檢測方法運(yùn)用綜合分析判斷細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本流行病學(xué)實(shí)驗(yàn)室樣本采集方案與檢測人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。樣本前期處理，做好實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。共同商定分析方案：現(xiàn)場工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對現(xiàn)場情況、所收集樣本的情況、現(xiàn)場工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測工作方案。一、標(biāo)本采集 （1）及時性原則 （2）針對性原則 （3）適量性原則 （4）不

2、污染原則規(guī)范采樣是獲得可靠檢測結(jié)果的重要保證合理的采樣時機(jī)和種類足夠的樣品采樣量多種樣品同時采集正確的采樣方法樣品妥善保存運(yùn)輸 杯狀病毒（諾如病毒、扎如病毒）排病毒數(shù)量與病程有關(guān)，發(fā)病4天內(nèi)幾乎100%病人排病毒，易于檢查； 病程59天時50%排病毒；病程10天后約10%排病毒。采樣時機(jī)對檢驗(yàn)結(jié)果的影響注意：樣品標(biāo)簽和登記信息，幫助實(shí)驗(yàn)室選擇最佳樣品檢測，幫助實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的解釋正確采樣方法無菌操作防止采集的標(biāo)本受到影響（三） 臨床標(biāo)本的采集方法1. 糞便標(biāo)本一般采用自然留便，若采樣時病人無便或嬰幼兒則可采用肛拭法。留便：用2個棉拭子分別在自然排出的新鮮糞便中可疑部分多點(diǎn)挑取采集約5g標(biāo)本。腹瀉病

3、人應(yīng)取膿、血、粘液等異常部分。液體糞便取絮狀物約5ml。肛拭法：先用無菌甘油水或生理鹽水濕潤棉簽，多余的液體緊靠管壁擠出；再用棉拭或肛門采便管由肛門插入直腸內(nèi)約3cm5cm（幼兒約2cm3cm）處，輕輕旋轉(zhuǎn)360，擦取直腸表面黏液后取出。避免采便量過少（注意棉簽上應(yīng)沾有糞便）。為作厭氧菌檢查應(yīng)將標(biāo)本置于厭氧袋中轉(zhuǎn)送。（三） 臨床標(biāo)本的采集方法2. 血液標(biāo)本（1）綁上止血帶，并用手觸摸，以確定固定住的靜脈位 置。（2）用2%碘酒消毒皮膚，從穿刺點(diǎn)中心部位開始向外擴(kuò)大，消毒范圍不應(yīng)小于5cm（直徑）。（3）待皮膚干后，再75%酒精擦去碘酒，且不能用手指觸 摸消毒后的皮膚。（4）皮膚酒精干后，穿刺采

4、集血液，采血量成人5-10ml，嬰幼兒1-5ml。（5）根據(jù)需要，血標(biāo)本分為抗凝和不抗凝兩種，于采集后無菌操作分別注入市售抗凝和不抗凝采集管中。需做抗體檢測時，第二份血與第一份血采集時間一般相隔約2周，最短不能少于10天。（三） 臨床標(biāo)本的采集方法3. 嘔吐物用無菌壓舌板或棉拭子挑取少量嘔吐物作為檢材，放入自封塑料袋中并封好袋口或置于滅菌帶蓋瓶中，然后蓋緊瓶蓋，立即置于冷藏箱中。（三） 臨床標(biāo)本的采集方法4. 手表面用滅菌棉拭蘸以滅菌生理鹽水，涂抹手表面，立即置于采樣管中，蓋緊管蓋。（六） 昆蟲等媒介生物的采集方法如采集蒼蠅標(biāo)本：在每個采樣點(diǎn)以1015只蒼蠅作為一份標(biāo)本放入自封袋中，立即封好袋

5、口，置于冷藏箱中。 標(biāo)本采集送檢注意事項(xiàng)送檢標(biāo)本時應(yīng)填寫“標(biāo)本送檢單”，寫明姓名、地址、發(fā)病時間、采集時間、臨床診斷等。標(biāo)本管/袋或瓶上標(biāo)記樣品編號。病人標(biāo)本含有大量病菌，標(biāo)本裝入試管或小瓶時，注意勿污染容器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏等，放在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專人送往檢驗(yàn)室，運(yùn)送過程中注意安全。 標(biāo)本的保存所有標(biāo)本采集后都應(yīng)立即置于冷藏箱中，盡快送往實(shí)驗(yàn)室。不能在3小時內(nèi)送達(dá)者，細(xì)菌標(biāo)本應(yīng)盡可能在現(xiàn)場接種；病毒標(biāo)本可臨時保存在4冰箱，但不能超過3天，如近期不能檢測，則應(yīng)直接在-20 或-80 下凍存，有條件的可將樣品分成幾小份，以避免以后接種標(biāo)本時的反復(fù)凍融。標(biāo)本的運(yùn)輸標(biāo)本采集后必須盡快

6、送至實(shí)驗(yàn)室。用于RNA檢測的標(biāo)本，如果未經(jīng)穩(wěn)定化處理，則必須速凍后，放在干冰中運(yùn)送。標(biāo)本在運(yùn)送時，應(yīng)采用不易破碎的容器裝載標(biāo)本。運(yùn)送要注意生物安全生物安全1.標(biāo)本采集時要嚴(yán)格執(zhí)行生物安全防護(hù)要求，防止污染、傳播和自身感染 。2.標(biāo)本采集完畢，首先消毒，然后脫掉防護(hù)裝備。3.所有使用過的采樣相關(guān)物品要帶離現(xiàn)場，高壓滅菌消毒后丟棄。4.采樣箱每次用完后要及時消毒處理。二、檢測項(xiàng)目的確定標(biāo)本檢測項(xiàng)目的確定檢測那些項(xiàng)目？誰決定檢測項(xiàng)目？ 在暴發(fā)調(diào)查中，實(shí)驗(yàn)室的病因物質(zhì)檢測，不是搜索尋找病因，是對病因假設(shè)的證實(shí)。根據(jù)病因假設(shè)、檢驗(yàn)條件，確定檢驗(yàn)指標(biāo)。流行病學(xué)實(shí)驗(yàn)室樣本采集方案與檢測人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分

7、析處理。共同商定分析方案：現(xiàn)場工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對現(xiàn)場情況、所收集樣本的情況、現(xiàn)場工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測工作方案。三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)怎么檢快速靈敏方法的應(yīng)用儀器自動化方法改進(jìn)分離培養(yǎng)方法怎么檢檢驗(yàn)流程：1 . 樣品采集 2. 初步檢驗(yàn)（直接鏡檢、免疫快診、PCR。) 3. 分離培養(yǎng) (包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)) 4. 初篩試驗(yàn)、純培養(yǎng)（快速診斷方法的使用） 5. 全面鑒定（菌株鑒定、毒素測定）（快速檢測方法）四、結(jié)果的報告與分析結(jié)果的報告與分析檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件和技術(shù)水平，同時還與檢驗(yàn)樣

8、品的采集、保存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在分析檢驗(yàn)結(jié)果時，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn)室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素。結(jié)果的報告與分析陽性結(jié)果不一定能說明病原因子在爆發(fā)事件中的致病作用；反之陰性結(jié)果也不一定能完全否定某種病原因子的病因假設(shè).結(jié)果的報告與分析實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果是確定病因的重要依據(jù)，但實(shí)驗(yàn)室結(jié)果要和現(xiàn)場調(diào)查情況、患者的臨床表現(xiàn)一起分析，才能確定病因。五、案例分析2010年9月8日起，四川某高職學(xué)院陸續(xù)有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹痛、腹瀉為主，部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個別有發(fā)熱等癥狀并到本校醫(yī)院進(jìn)行治療,疾病預(yù)防控制中心疫情處理人員于9月15日接到報告后趕赴現(xiàn)場調(diào)查和采樣。 問

9、題1：現(xiàn)場調(diào)查內(nèi)容？1）基本情況學(xué)校情況，食堂情況，飲用水情況2） 發(fā)病情況3）臨床表現(xiàn) 4）治療情況 1）、基本情況該學(xué)院位于岷江二號橋旁，占地三百七十余畝，全院有教職工330人，學(xué)生4500人，學(xué)生均住校。8月23日新學(xué)期整體搬入該新校址。學(xué)院生活飲用水為自備式供水，水源位于岷江旁，取水點(diǎn)位于學(xué)院污水排污口下方200米；學(xué)校未集中供應(yīng)開水，學(xué)生寢室多配有飲水機(jī)，主要飲用“龍蓀泉”、“清心泉”牌桶裝礦泉水。學(xué)校的水處理廠沒有定期對水源水進(jìn)行消毒和監(jiān)測。同時，污水處理設(shè)備一直未啟用，且污水管道在鋪設(shè)時不符合標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致生活污水泄露，并蓄積在取水點(diǎn)上方的低洼地帶，該校生活飲用水取水點(diǎn)設(shè)置見圖1。

10、2）、發(fā)病情況 9月8日以來陸續(xù)有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹痛、腹瀉為主，部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個別有發(fā)熱等癥狀。共計(jì)249例。病例在9月13日以后逐漸增多，9月1416日發(fā)病人數(shù)達(dá)到高峰，17日以后發(fā)病人數(shù)有所下降，每日新增病例數(shù)見圖2。病例中男性72人，女性177人，性別比例1：2.46。學(xué)生243人，年齡在1423歲之間；教師1人，食堂工作人員4人，工人1人?；疾W(xué)生廣泛分布于各個專業(yè)、班級 3）、臨床表現(xiàn) 共對176例患者進(jìn)行了調(diào)查，97.7%（172人）出現(xiàn)腹瀉癥狀，89.8%（158人）在24小時內(nèi)腹瀉次數(shù)3次，腹瀉糞便形狀以水樣便為主（132人），33.0%（58人）有里急后重；21.6

11、%（38人）出現(xiàn)嘔吐癥狀，55.1%（97人）有頭昏頭痛癥狀，15.9%（28人）出現(xiàn)發(fā)熱癥狀。4）治療情況醫(yī)生采取輸液、吃藥方式抗生素治療。結(jié)果： 部分學(xué)生反復(fù)出現(xiàn)癥狀 部分學(xué)生經(jīng)治療無效 樣本采集問題2 采集哪些樣本？樣本采集食堂廚師肛拭食堂樣本水源水經(jīng)學(xué)校消毒裝置消毒后的出廠水學(xué)生食堂管網(wǎng)末梢水學(xué)生宿舍飲用礦泉水病例糞便、肛拭、嘔吐物等 實(shí)驗(yàn)室檢測問題3： 實(shí)驗(yàn)室檢測什么項(xiàng)目？檢測項(xiàng)目細(xì)菌：腸道致病菌（致瀉性大腸埃希氏菌、沙門菌、志賀菌、致病性弧菌等）腹瀉病毒飲用水衛(wèi)生指標(biāo)檢測結(jié)果1、細(xì)菌檢測結(jié)果：9例病人糞便樣品和3份水樣品致瀉性大腸菌毒素基因均為陽性。 病原菌分離 ：檢測結(jié)果2、腹瀉病毒檢測結(jié)果病人糞便樣品杯狀病毒陽性 檢測結(jié)果 3、水衛(wèi)生指標(biāo)