麝香保心丸對自發(fā)性高血壓大鼠心臟保護作用的研究

1、麝香保心丸對自發(fā)性高血壓大鼠心臟保護作用的研究 胡送友，田登科，陳剛領(lǐng)，劉俊，可燕，卞卡【摘要】目的討論麝香保心丸HP對自發(fā)性高血壓大鼠SHR心臟保護作用及其可能的機制。方法將6周齡SHR分為HP治療組、高血壓模型組,將KY大鼠作為正常血壓組，每組分3批在3個時間點給藥6周、給藥14周、停藥9周處死大鼠，尾套法測定血壓；FRAP法進展心臟組織總抗氧化才能測定；采用RT-PR考察炎癥相關(guān)因子IA-1、VA-1、IL-1和TNFRNA表達；esternBlt與ELISA法分別考察炎癥相關(guān)因子IA-1、VA-1及IL-1、TNF蛋白表達。結(jié)果HP對SHR無明顯降壓作用，但能進步SHR心臟組織總抗氧化

2、才能。PR、esternBlt與ELISA顯示給予HP6周和14周后，均能顯著抑制SHR心臟炎性相關(guān)因子IA-1、VA-1RNA表達及IA-1蛋白表達；給藥14周后，能顯著抑制炎性相關(guān)因子IL-1、TNFRNA表達及蛋白表達；停藥9周后，仍能抑制炎性相關(guān)因子IA-1、TNFRNA表達及IA-1蛋白表達。結(jié)論HP具有獨立降壓以外的對SHR心臟保護作用，其機制可能與抑制心臟組織炎癥反響及降低組織氧化應(yīng)激有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】麝香保心丸自發(fā)性高血壓大鼠炎癥心臟原發(fā)性高血壓Keyrds：Heart-prtetinguskpill;Spntaneuslyhypertensiverats;Inflaatin;H

3、eart;Hypertensin高血壓病會引起血流動力學(xué)異常變化和血管重塑，導(dǎo)致心、腦、腎等靶器官損害。心肌肥大，心肌間質(zhì)纖維化及大小冠脈血管構(gòu)造和功能的改變是高血壓靶器官心臟的主要損害，從預(yù)后意義來講，是最嚴(yán)重的并發(fā)癥。降低并控制血壓的同時，逆轉(zhuǎn)或減輕高血壓靶器官損害已成為國際上高血壓病治療的主要目的。炎癥反響不僅參與了高血壓的發(fā)生開展，更是與高血壓心、腦、腎等多個靶器官損害親密相關(guān)1。我們中心先期研究的結(jié)果也說明,自發(fā)性高血壓大鼠多個靶器官存在著明顯的炎病癥態(tài)存在2。麝香保心丸是最具代表性的治療冠心病的有效中成藥，動物實驗和臨床研究證明3，4，有抗心肌缺血、保護心肌作用，但其作用機制仍未說

4、明，本實驗通過觀察麝香保心丸對自發(fā)性高血壓大鼠SHR心臟炎病癥態(tài)和氧化應(yīng)激的影響，討論麝香保心丸的心肌保護作用及其可能的機制，為其臨床應(yīng)用及二次開發(fā)提供新的根據(jù)。1器材與方法1.1動物與藥物SPF級SHR36只，KY大鼠18只，均為雄性，6周齡，由中科院上海實驗動物中心提供，合格證號SXK滬2022-0005。麝香保心丸由上海和黃藥業(yè)消費(批號G060601)。1.2試劑及儀器TrizlRNA提取試劑均購于Siga公司；RT-PR試劑盒為Bi-Dev-Teh公司產(chǎn)品；引物由上海生物工程技術(shù)公司合成；抗體均購于Sataruz公司；IL-1ELISA試劑盒批號：RT110371與TNFELISA試

5、劑盒批號：RT110371均購于美國ADL公司。PR擴增儀，德國Bietra公司；UV-1700紫外分光光度計，日本島津公司；GIS凝膠圖像分析系統(tǒng)，上海天能科技產(chǎn)品；NIBP鼠尾無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)，上海奧爾科生物科技產(chǎn)品；Spetraax190酶標(biāo)儀，美國leularDevies公司產(chǎn)品；D-78532高速冷凍離心機，德國Hettih公司產(chǎn)品；超低溫冰箱，美國Ther公司產(chǎn)品。1.3動物分組及給藥將36只SHR隨機分為麝香保心丸HP組和SHR模型SHR組，每組18只，以同周齡的KY大鼠為正常對照KY組，每天上午8：009：00HP組每只大鼠給予麝香保心丸13.5g/kg溶于1l蒸餾水中灌胃

6、；KY組與SHR組給予一樣體積的蒸餾水。分別在給藥6周、給藥14周和停藥9周后分3批處理動物。1.4檢測指標(biāo)1.5統(tǒng)計學(xué)方法各組結(jié)果以s表示,組間差異用單因素方差分析和q檢驗。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1HP對SHR血壓值的影響由表2可見，模型組SHR收縮壓較正常對照KY大鼠明顯升高(P0.05)。給藥HP6周，14周及停藥9周后，SHR的收縮壓與模型組大鼠比較無明顯差異(P0.05)。表2HP對SHR血壓值的影響略2.2HP對SHR心臟IA-1和VA-1表達的影響如圖1(a)、1(b)、1()所示，模型組SHR心臟IA-1和VA-1的RNA表達顯著高于正常KY組(P0.05)，

7、HP治療后(給藥6周，給藥14周)可顯著降低SHR心臟IA-1和VA-1的RNA表達程度(P0.05)；停藥9周后，仍可顯著降低IA-1RNA表達程度(P0.05)，但對VA-1RNA影響無統(tǒng)計學(xué)差異。如圖2(a)、2(b)、2()所示，與KY大鼠比較，模型組SHR心臟可見IA-1蛋白的高表達(P0.05)。在各處理批次給藥6周，給藥14周，停藥9周HP均可以顯著降低IA-1蛋白的表達程度(P0.05),但對VA-1蛋白影響無統(tǒng)計學(xué)差異。2.3HP對SHR心臟IL-1和TNF表達的影響如圖1(a)、1(d)、1(e)所示，模型組SHR心臟TNF的RNA表達顯著高于正常組(P0.05)，HP治療

8、后(給藥6周，給藥14周，停藥9周)可顯著降低SHR心臟TNF的RNA表達程度(P0.05)；但對IL-1而言，僅在HP給藥14周后，能顯著降低SHR心臟的IL-1RNA表達程度(P0.05)，給藥6周后與停藥9周后對對SHR心臟IL-1RNA影響均無統(tǒng)計學(xué)差異。如表3所示，與KY大鼠比較，模型組SHR心臟可見TNF與IL-1蛋白的高表達(P0.05)。HP給藥14周后均可以顯著降低IL-1和TNF的蛋白表達程度(P0.05)；給藥6周與停藥9周對SHR心臟TNF與IL-1蛋白影響均無統(tǒng)計學(xué)差異。表3HP對SHR心臟炎性因子TNF及IL-1蛋白表達的影響略2.4HP對SHR心臟總抗氧化才能的影

9、響由表4可見，12，20，29周齡SHR心臟組織總抗氧化程度均明顯低于KYP0.05，給予HP6周和14周后，均可以顯著進步SHR心臟組織總抗氧化程度P0.05，在停藥9周后，心臟組織總抗氧化程度仍明顯高于SHR組P0.05。表4HP對SHR心臟總抗氧化才能的影響略轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3討論高血壓病對靶器官心臟的主要損害是心肌肥大，心肌間質(zhì)纖維化以及大小冠脈血管構(gòu)造和功能的改變。長期的壓力負(fù)荷會導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大、間質(zhì)膠原增多。心肌膠原基質(zhì)的聚集和纖維化使心臟的順應(yīng)性和舒張功能降低。上述變化的發(fā)生是由心臟機械因素或體液因素所激活，并有多種生長因子及血管活性物質(zhì)所介導(dǎo)，如血管緊張素Ang、醛固酮

10、等。Ang通過其型受體ATR介導(dǎo)膠原生成，使蛋白質(zhì)合成增加，心肌細(xì)胞發(fā)生肥大。另一方面，緩激肽、前列腺素、N可以使膠原降解。膠原合成與降解比例失調(diào)最終導(dǎo)致心肌肥厚的發(fā)生。本實驗結(jié)果顯示SHR7周齡時動脈收縮壓明顯高于同齡KY，且血壓隨年齡增加而升高，29周齡時血壓已顯著高于同齡KY，提示7周齡SHR可能已產(chǎn)生心肌損傷。HP有抗心肌缺血、保護心肌作用，但其作用機制仍未說明。本實驗以SHR為高血壓心臟損害動物模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)給予HP6周和14周后，能顯著抑制SHR心臟炎性相關(guān)因子IA-1、VA-1RNA表達及IA-1蛋白表達；給藥14周后，能顯著抑制炎性相關(guān)因子IL-1、TNFRNA表達及蛋白表達；

11、停藥9周后，仍能抑制炎性相關(guān)因子IA-1、TNFRNA表達及IA-1蛋白表達。眾多證據(jù)顯示710,炎癥反響可能參與了高血壓心臟損害。使用免疫抑制劑sA影響NF-B依賴信號通路或者使用NF-B的抑制劑治療dTGR大鼠，均能減輕炎癥細(xì)胞浸潤和心肌肥厚。IA-1、VA-1可介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附，白細(xì)胞粘附于內(nèi)皮細(xì)胞和組織浸潤，導(dǎo)致組織損傷，是炎癥反響重要的標(biāo)記物7。Ykyaa報道8心肌細(xì)胞與激活的單核細(xì)胞體外培養(yǎng)，心肌細(xì)胞蛋白合成增加，在參加抗IA-1單克隆抗體后，心肌細(xì)胞蛋白合成受到顯著抑制。IL-1可使-腎上腺素受體與腺苷酸環(huán)化酶脫耦聯(lián)，心肌收縮力降低。研究報道9壓力負(fù)荷刺激巨噬細(xì)胞趨化因子

12、表達增加，引起巨噬細(xì)胞大量聚集，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生許多細(xì)胞因子，以IL-1分泌尤為顯著，其能促進心肌細(xì)胞的生長和左室重構(gòu)。連續(xù)給大鼠腹腔注射TNF會使左室功能時間依賴性降低并伴隨左室肥厚，機制可能是使心肌細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白水解酶活性增加,導(dǎo)致基質(zhì)降解,同時刺激成纖維細(xì)胞增殖,參與心室重構(gòu)10。Sun2對SHR高血壓靶器官心臟組織炎病癥態(tài)考察后，發(fā)現(xiàn)SHR心臟組織炎癥相關(guān)因子IA-1,TNF,IL-1，PPAR顯著高于KY，提示SHR心臟存在著明顯的炎病癥態(tài)。由此可見炎性相關(guān)因子IA-1,VA-1，TNF,IL-1在高血壓心臟損害中起著重要作用。本實驗研究發(fā)現(xiàn)HP對SHR的血壓無明顯影響，說明HP可能

13、是通過抑制心臟組織炎癥反響對SHR心臟起保護作用，且這種作用是獨立于降壓作用的。已有研究顯示11SHR心臟重量與體重之比在高血壓前期如34周齡以較KY明顯增加，心臟后乳頭肌心肌細(xì)胞增大。甚至有研究發(fā)現(xiàn)，SHR左室重量與體重之比早在剛出生時即較同齡KY明顯增加。說明SHR心臟肥大可能并不完全與高血壓病有關(guān)。炎癥損傷多伴隨大量RS的產(chǎn)生，如-2、H和H22，導(dǎo)致氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。RS可直接修飾蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類和DNA，引起組織損傷。RS還可通過激活對氧化復(fù)原敏感的核轉(zhuǎn)錄因子NF-B，上調(diào)粘附分子、細(xì)胞因子、趨化因子等促炎因子的表達，如IA-1、IL-1、TNF等，引起血管炎癥。過量產(chǎn)生的-2可消耗N生成氧化才能更強的過硝基陰離子N-，使N的生物利用度降低，損傷血管的舒張功能12,13。此外，-2程度的增加，能通過下調(diào)可溶性鳥苷酸環(huán)化酶sG)表達、抑制sG活性和GP依賴性蛋白激酶GK-1活性而影響平滑肌層的N/GP信號途徑從而影響血管功能14。本實驗研究發(fā)現(xiàn)12，20，29周齡SHR心臟組織總抗氧化程度均明顯低于KY，提示S