高效液相色譜儀組成及檢測(cè)器種類

1、高效液相色譜儀組成及檢測(cè)器種類第1頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四1.儲(chǔ)液瓶（輸液管入口端安裝有過濾器）；2.高壓輸液泵；3.混合器和阻尼器；4.進(jìn)樣器（閥）；5.色譜柱；6.檢測(cè)器；7.廢液瓶；8.數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng) 第2頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四HPLC儀器結(jié)構(gòu)示意圖貯液器輸液泵梯度裝置進(jìn)樣裝置分離柱控溫裝置檢測(cè)器第3頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四 首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依

2、先后順序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè)器送出的信號(hào)記錄下來，由此得到液相色譜圖。工作過程：第4頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四一、高壓輸液系統(tǒng) 高壓輸液系統(tǒng)由 溶劑貯存器、高壓泵、梯度洗脫裝置和壓力表 等組成。 第5頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四1.溶劑貯存器 溶劑貯存器一般由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為1到2 L，用來貯存足夠數(shù)量、符合要求的流動(dòng)相。第6頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四2.高壓輸液泵 高壓輸液泵是高效液相色譜儀中關(guān)鍵部件之一，其功能是 將溶劑貯存器中的流動(dòng)相以高壓形式連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng)，使樣品在

3、色譜柱中完成分離過程。對(duì)泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無脈動(dòng)，流量精度和重復(fù)性為0.5%左右。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。第7頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四 高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動(dòng)相粘度和柱滲透無關(guān)。第8頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四第9頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。第10頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四

4、3. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動(dòng)相的強(qiáng)度、極性、pH值或離子強(qiáng)度相應(yīng)地變化，達(dá)到提高分離效果，縮短分析時(shí)間的目的。第11頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四僅用弱溶劑僅用強(qiáng)溶劑梯度洗提第12頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四梯度洗脫裝置分類 一類是外梯度裝置（又稱低壓梯度），流動(dòng)相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺(tái)泵即可。 一類是內(nèi)梯度裝置（又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設(shè)置的程序，注入梯度混合室混合，再輸至柱系統(tǒng)。 第13頁，共

5、29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四二、進(jìn)樣系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng)包括進(jìn)樣口、注射器和進(jìn)樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進(jìn)行分離。第14頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置,其結(jié)構(gòu)如圖所示：第15頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四三、分離系統(tǒng) 色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。第16頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四柱管材料：耐腐蝕耐壓內(nèi)徑：2.0、3.0、4.1、4.6mm長(zhǎng)度：5、10、1

6、5、25cm等固定相：顆粒細(xì)、圓、均一、剛性強(qiáng)第17頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四第18頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四 一般在分離前備有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分離柱完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經(jīng)過前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過分離柱時(shí)不再洗脫其中固定相，保證分離技的性能不受影響。 柱子裝填得好壞對(duì)柱效影響很大。對(duì)于細(xì)粒度的填料（20m）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。 柱溫一般為室溫或接近室溫。第19頁，共29頁，2022年，5月20日，20

7、點(diǎn)31分，星期四四、檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。對(duì)檢測(cè)器的要求是：靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對(duì)溫度和流量的變化不敏感等。 第20頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四在液相色譜中，有兩種類型的檢測(cè)器： 一類是溶質(zhì)性檢測(cè)器，它僅對(duì)被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類檢測(cè)器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等； 一類是總體檢測(cè)器，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理和化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)。屬于此類檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器等。第21頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四紫外光度檢測(cè)器第22頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四

8、作用原理 依據(jù)被分析試樣組分對(duì)待定波長(zhǎng)紫外光的選擇吸收性，組分濃度與吸光率的關(guān)系遵守比爾定律。第23頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四工作過程 透鏡將光源射來的光束變成平行光，經(jīng)過遮光板變成一對(duì)細(xì)小的平行光束，分別通過測(cè)量池與參比池，然后用紫外濾片濾掉非單色光，通過雙紫外光敏電阻，根據(jù)輸出信號(hào)差進(jìn)行檢測(cè)。第24頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四特點(diǎn)靈敏度高，檢測(cè)濃度可達(dá)到10-9g/ml；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，對(duì)溫度和流速不敏感；溶劑的選用受限制。第25頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四熒光檢測(cè)器 物質(zhì)受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，可用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，而某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)也可通過化學(xué)衍生轉(zhuǎn)變成能發(fā)射熒光德物質(zhì)而得到檢測(cè)。第26頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四優(yōu)點(diǎn)：是一種選擇性強(qiáng)、靈敏度高，比紫外檢測(cè)器高23個(gè)數(shù)量級(jí)，可達(dá)pg量級(jí)或更低，可用于梯度淋洗。缺點(diǎn)：樣品適用范圍有限，定量分析的線性范圍較窄(104-105)。第27頁，共29頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)31分，星期四示差折光檢測(cè)器 借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率德方法來測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。分為偏轉(zhuǎn)式和反射式兩種類型。 是一種通用型檢測(cè)器，靈敏度可達(dá)10-7 gcm-3。缺點(diǎn)是對(duì)溫度變化敏感，不能用于梯度淋洗。第