抗體的人工制備

1、抗體的人工制備第1頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三人工制備抗體多克隆抗體 （polyclonal antibody ）單克隆抗體 （monoclonal antibody ）基因工程抗體 （genetic engineering antibody) 第2頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三（一）多克隆抗體（polyclonal antibody(PcAb)用傳統(tǒng)方法將抗原物質(zhì)免疫動(dòng)物, 由于這些物質(zhì)由多種抗原分子組成或由多種抗原決定簇組成, 可刺激不同淋巴細(xì)胞克隆, 產(chǎn)生多種Ig, 即多克隆抗體。由此獲得的抗血清是一種多克隆的混合抗體，具有高度的

2、異質(zhì)性。第3頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三缺點(diǎn)它不能針對(duì)某一特定表位，特異性不高，常出現(xiàn)交叉反應(yīng)；同時(shí)也不易大量制備，其應(yīng)用受到限制。 第4頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三多克隆抗體主要來(lái)源于動(dòng)物免疫血清恢復(fù)期患者血清免疫接種人群第5頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三PcAb制備的基本過(guò)程抗原制備動(dòng)物免疫試血測(cè)定抗體效價(jià)血清分離與保存多抗純化與標(biāo)記第6頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三用于制備抗血清的動(dòng)物小鼠、大鼠、兔、羊、馬等大動(dòng)物。 第7頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，

3、星期三（二）單克隆抗體 （monoclonal antibody ，McAb）由單一B細(xì)胞克隆針對(duì)某一抗原決定簇產(chǎn)生的完全均一的只對(duì)某一抗原決定簇起反應(yīng)的特異性抗體, 即為單克隆抗體。通過(guò)雜交瘤技術(shù)獲得。第8頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三針對(duì)一個(gè)抗原決定簇由一個(gè)B細(xì)胞分化、增殖產(chǎn)生的子代細(xì)胞集團(tuán)產(chǎn)生的，針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的抗體，即由單一B細(xì)胞克隆合成的抗體。第9頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第10頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第11頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第12頁(yè)，共49頁(yè)，2

4、022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第13頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三特點(diǎn)：1.高度均一性 2.高度專(zhuān)一性3.大量產(chǎn)生4.及穩(wěn)定性第14頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三應(yīng)用作為診斷試劑用于許多血清學(xué)檢測(cè); 已廣泛應(yīng)用于疾病的診斷、特異性抗原或蛋白的檢測(cè)和鑒定、疾病的被動(dòng)免疫治療 或與核素、毒素、化學(xué)藥物偶聯(lián)導(dǎo)向藥物, 用于腫瘤治療。 第15頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三單克隆抗體的生產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)系統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)系統(tǒng)第16頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)系統(tǒng)將雜交瘤細(xì)

5、胞注入小鼠腹腔，雜交瘤細(xì)胞可在小鼠腹腔中無(wú)限繁殖，導(dǎo)致腹水產(chǎn)生，每毫升腹水可獲得520mg的單克隆抗體，一般一次可收腹水510mL,間隔34d 采一次，可多次反復(fù)采集。第17頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三選擇培養(yǎng)基 常用HAT選擇培養(yǎng)基，H為次黃嘌呤（hypoxanthine）,T為胸腺嘧啶核苷（thymidine)，二者都是旁路合成DN A的原料；A是氨基喋呤（ aminoplerin）,是細(xì)胞合成DNA的阻斷劑。在DMEM培養(yǎng)基中加入 H、A、T三種成分即制成HAT選擇培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞不能生長(zhǎng)，因它缺乏HGPRT酶下能利用旁路途徑合成DN

6、A，內(nèi)源性的合成又受到氨基喋呤的阻斷；至于未融合的脾細(xì)胞則在2周內(nèi)自然死亡所以只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。第18頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)系統(tǒng)懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)細(xì)胞固定化培養(yǎng)系統(tǒng)第19頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三單克隆抗體應(yīng)用 單克隆抗體被廣泛用作診斷檢測(cè)試劑，提高了常規(guī)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)在疾病診斷和分析研究中的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性和檢測(cè)速度。 單克隆抗體可與同位素、毒素、細(xì)胞毒類(lèi)藥物通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)制備成導(dǎo)向藥物（生物導(dǎo)彈），用于腫瘤、自身免疫性疾病治療和防治移植排斥反應(yīng)等。 第20頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20

7、日，13點(diǎn)29分，星期三單克隆抗體應(yīng)用 單克隆抗體可用作生物活性藥物的純化試劑。第21頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三單克隆抗體與多克隆抗體比較 性 狀多克隆抗體單克隆抗體產(chǎn)生抗體的細(xì)胞來(lái) 源多株B細(xì)胞及其子代細(xì)胞 人或動(dòng)物免疫血清，恢復(fù)期血清 單株B細(xì)胞及其子代細(xì)胞B細(xì)胞雜交瘤的小鼠腹腔（或上清液）有效抗體含量0.11.0mg/ml血清0.55.0mg/ml小鼠腹水抗體成分及性質(zhì) 能識(shí)別多種抗原決定簇的各類(lèi)及各亞類(lèi)Ig 只識(shí)別一種抗原決定簇的同一亞類(lèi)Ig，其分子結(jié)構(gòu)純一，獨(dú)特性完全相同第22頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三單克隆抗體與多克隆

8、抗體比較 性 狀多克隆抗體單克隆抗體用 途用于常規(guī)多價(jià)抗原的免疫學(xué)檢測(cè)、易出現(xiàn)交叉反應(yīng) ； 用于緊急預(yù)防及治療各種微生物、外毒素引起的疾病 作為第一抗體，用ELISA、放免、免疫酶聯(lián)等方法檢測(cè)微量抗原，可避免交叉反應(yīng)；將腫瘤特異性McAb與藥物連結(jié)， 用于治療腫瘤 第23頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三但是由于人-人雜交瘤的技術(shù)限制，目前絕大多數(shù)單克隆抗體是鼠源性的。由于是異種抗原，重復(fù)體內(nèi)使用鼠源性抗體將促使機(jī)體產(chǎn)生抗鼠Ig的抗體，不僅降低臨床療效，亦可能引起嚴(yán)重的超敏反應(yīng)，因而限制了其臨床應(yīng)用。第24頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三（三）

9、基因工程抗體 :人-鼠嵌合抗體、改型抗體、雙特異性抗體、小分子抗體、人源化抗體?？杀３謫慰寺】贵w均一性、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn), 又能克服其為鼠源性的不足。 第25頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第26頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三由基因重組技術(shù)制備的抗體稱(chēng)為基因工程抗體(gene engineering antibody，GeAb)，也稱(chēng)第三代人工抗體。其原理是由B細(xì)胞獲得編碼抗體的基因，或以聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)體外擴(kuò)增抗體基因片段，經(jīng)體外DNA重組后，轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，使其表達(dá)特定抗體。目前已成

10、功表達(dá)的基因工程抗體有嵌合抗體、重構(gòu)建抗體、單鏈抗體等，其中嵌合抗體研究較多。第27頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三另外重組噬菌體抗體(recombinant phage antibody)是近年以重組噬菌體展示系統(tǒng)制備的GeAb。將抗體VH、VL基因經(jīng)體外PCR擴(kuò)增后與噬菌體外殼編碼基因連接，重組后可在噬菌體表面表達(dá)抗體融合蛋白，經(jīng)固相抗原吸附技術(shù)很容易篩選出表達(dá)特異抗體的噬菌體用以大量表達(dá)和制備抗體。 第28頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三抗體基因片段的獲得從B細(xì)胞DNA庫(kù)中篩選；用探針從雜交瘤細(xì)胞、免疫脾細(xì)胞的DNA庫(kù)或cDNA庫(kù)中篩選

11、；以PCR法直接擴(kuò)增。第29頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三一、嵌合抗體（Chimeric antibody) 是指在同一抗體分子中含有不同種屬來(lái)源抗體片段的抗體，又稱(chēng)雜種抗體。迄今構(gòu)建的嵌合抗體多為“鼠-人”類(lèi)型，也就是抗體的Fab或F(ab)2來(lái)源于鼠類(lèi)。而Fc片段來(lái)源于人類(lèi)。第30頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三重構(gòu)抗體第31頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第32頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第33頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第34頁(yè)，共49頁(yè)，2022

12、年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第35頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第36頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第37頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第38頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第39頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第40頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三第41頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三I advise you to buy out his all share of power. 我建議你買(mǎi)下他的全部

13、股權(quán)。buy out 買(mǎi)斷全部股份、商業(yè)股權(quán)或利息（To purchase the entire stock, business rights, or interests of）。例句：We are now financially sound enough to buy out the next failure.如今，我們（公司）財(cái)務(wù)運(yùn)營(yíng)足夠健全，承擔(dān)得起再一次的失敗。第42頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三I would not wish to be inferior to others. 我不希望自己比別人差。be inferior to，比差，劣于，次于，不如例句

14、He is inferior to others in many respects.他在許多方面不如別人。第43頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三I hate to see you in such low spirits. 我討厭看到你這么情緒低落。主要是注意spirit這個(gè)詞的復(fù)數(shù)形式。作為“精神、心靈”意義的時(shí)候，是不可數(shù)名詞；而作為“情緒，心情”的意義時(shí)，則一般都使用復(fù)數(shù)形式。例句：He felt in excellent spirits when he arrived home.他回到家里時(shí)情緒非常好。第44頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星

15、期三Its very creepy to walk alone at 1 am. 凌晨一點(diǎn)一個(gè)人走很害怕。Creepy和scary這兩個(gè)形容詞都是用來(lái)形容令人“害怕”的感覺(jué)。但這兩者其實(shí)有些小小的差異。Creepy 的話是指“心里毛毛的”那種感覺(jué)，而scary則是真的令人感到害怕，所以在程度上來(lái)說(shuō)scary比creepy還要來(lái)得恐怖些。比方說(shuō)像是看恐怖電影，也許你可以說(shuō) Its creepy. 和 Its scary. 都可以，但是如果像是去從事高空彈跳 (bungee jump)，我想對(duì)大部分的人來(lái)說(shuō)都是scary而不只是creepy了。（本句選自小笨霖英語(yǔ)筆記本）第45頁(yè)，共49頁(yè)，202

16、2年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三Please hand the document in to me. 請(qǐng)把那份文件交給我。hand in“提交，交出，遞交”。這個(gè)句子也可以說(shuō)成，Please submit the document to me.例句：Please hand your homework in at once. 請(qǐng)把你們的家庭作業(yè)立刻交上來(lái)。第46頁(yè)，共49頁(yè)，2022年，5月20日，13點(diǎn)29分，星期三A man is assisting police with their inquiries. 一名男子協(xié)助警方調(diào)查。Assist with/in 協(xié)助，幫助。例：A team of