清潔驗證徐影(XXXX深圳GMP培訓)

1、深圳九新藥業(yè)清潔驗證 2022年9月11日1講座內容清潔驗證目的法規(guī)要求什么要求清潔驗證了解清潔過程方案內容標準樣本類型測試方法類型與問題11 九月 20222清潔驗證目的提供文件依據(jù)證明清潔程序能夠有效地將產品殘留和清潔劑殘留去除到不會危害到病人安全的水平。 3法規(guī)要求中國新版GMP:第八十四條應當按照詳細規(guī)定的操作規(guī)程清潔生產設備。生產設備清潔的操作規(guī)程應當規(guī)定具體而完整的清潔方法、清潔用設備或工具、清潔劑的名稱和配制方法、去除前一批次標識的方法、保護已清潔設備在使用前免受污染的方法、已清潔設備最長的保存時限、使用前檢查設備清潔狀況的方法，使操作者能以可重現(xiàn)的、有效的方式對各類設備進行清潔

2、。如需拆裝設備，還應當規(guī)定設備拆裝的順序和方法；如需對設備消毒或滅菌，還應當規(guī)定消毒或滅菌的具體方法、消毒劑的名稱和配制方法。必要時，還應當規(guī)定設備生產結束至清潔前所允許的最長間隔時限。11 九月 20224法規(guī)要求第一百四十三條清潔方法應當經過驗證，證實其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗證應當綜合考慮設備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應的取樣回收率、殘留物的性質和限度、殘留物檢驗方法的靈敏度等因素11 九月 20225歐盟法規(guī)清潔驗證12.70 清潔程序通常應當經過驗證。一般來說,清潔驗證應當針對那些如果污染或偶然帶入異物對原料藥質量產生最大威脅情況或工藝

3、步驟。例如,在早期的產中,設備清潔程序可能不需驗證,在此遺留物可以在后續(xù)的精制過程中除去。12.71 清潔程序的驗證應當反映出設備實際使用的模式。如果有不同的原料藥或中間體在同一設備中制造,并且用相同的方式對設備進行清潔,應當選用一種具有代表性的中間體或原料藥來進行清潔驗證。這種選擇應當跟據(jù)溶解性以及不同的清潔難度,藥效,毒性和穩(wěn)定性計算出殘留限度來進行。11 九月 2022612.72 清潔驗證方案中應當對所要清潔的設備,程序,物料,可接受的清潔水平,監(jiān)測和控制的參數(shù),以及分析方法進行描述。該方案同樣應當闡明得到樣品的類型,以及如何進行取樣和標識。12.73 取樣應當包括擦拭法,沖洗法或其他

4、可用的方法(即,直接萃取),如果可能,同時檢測可溶解或不可溶解的殘留。所使用的取樣方法應當能夠定量測量清潔后在設備表面殘留水平。在由于設備的設計和/或工藝限制(即,軟管的內表面,導管,小口反應器或處理毒性物料,以及小的復雜,如微粉機和微型流化床),產品接觸表面不容易接觸的時候,設備擦拭取樣可能不切實際。11 九月 2022712.74 所使用的分析方法應當經過驗證,具有檢測殘留物或污染物的靈敏性。每一種分析方法的檢測限度應當具有足夠的靈敏度來檢測已經制訂的殘留或污染接受水平。應當制訂該方法的回收率水平。殘留限度應當具有實用性,可操作性,可證實性,以及最有害的殘留。限度可以制訂在已知的原料藥或其

5、最有害成份的藥理學,毒理學,或生理學活性基礎上。12.75 對于需要降低原料藥中的的總微生物數(shù)或內毒素的工藝,或擔心此類污染的其它工藝(如,用于生產無菌產品的非無菌原料藥),設備清潔/消毒的研究應當著眼于微生物和內毒素污染。11 九月 2022812.76 進行驗證后,應當在適當?shù)拈g隔對清潔程序進行監(jiān)測,以便保證這些程序在日常生產中有效。如果可行,應當用分析檢驗和目測檢查來監(jiān)測設備的清潔程度。允許以目測的方法測定用其他取樣和/或分析方法不能測定的小區(qū)域大致的污染程度。12.8 分析方法驗證12.80 分析方法應當經過驗證,除非所采用的是相關藥典或其它公認參照的標準方法。11 九月 20229F

6、DA的要求 在FDA的GMP211.67章節(jié)中規(guī)定了設備清潔驗證的要求： 建立書面標準操作程序（SOP），其中必須詳細規(guī)定設難關備各部件的清洗過程； 必須建立書面的清洗方法驗證通則； 清洗方法驗證通則應規(guī)定執(zhí)行驗證的負責人、批準驗證工作的負責人、驗證標準（合格標準）、再驗證的時間； 對各生產系統(tǒng)或設備部件進行清洗驗證之前，應制定專一特定的書面驗證計劃，其中應規(guī)定取樣規(guī)程、分析方法（包括分析方法的靈敏度）。10FDA的要求按上述驗證計劃進行驗證工作，記錄驗證結果。 做出最終的驗證報告，報告應由有關管理人員批準，并說明該清洗方法是否有效。11什么需要驗證一般來說只有對設備與產品接觸的表面進行清潔的

7、程序需要進行驗證。對于產物可能轉移到的非接觸部件，如密封，法蘭，攪拌軸，烘箱的風扇，加熱裝置等，應給予考慮。一般來說在連續(xù)批次生產的情況下，無需在每一批次完成后進行清潔。但是清潔間隔與方法應該被確立。 PICS JUL 200411 九月 202212什么需要驗證: FDA“當清潔只用于同一產品的不同批次生產中（或在原料生產中同一中間體的不同批）時，公司只需要滿足設備的“看的見的清潔”即可。這種批次間清潔工藝無需驗證.”FDA 清潔工藝的驗證 1993年7月11 九月 202213清潔驗證的失敗案例1992年，F(xiàn)DA對一家進口原料廠發(fā)出警告，該廠使用同一臺設備生產甾體及非甾體類物質，F(xiàn)DA認為

8、清潔驗證不當，只對前一種產品殘留做了驗證，但用TLC法對后一產品淋洗水檢測發(fā)現(xiàn)了副產物及降解物的證據(jù)。11 九月 202214監(jiān)管要求最終的目標降低交叉污染的風險使得產品受污染報廢的可能性最小患者的負面效應可能性最小降低產品投訴的發(fā)生率降低衛(wèi)生部門或其他機構檢查不合格的風險延長設備的使用壽命11 九月 202215化學污染 ，如活性成分、產品、清潔劑殘留污染類別16物理污染，如機械雜質、外來異物污染類別17微生物污染特別注意那些具有促生長和含有大量水分的物料污染類別18污染控制廠房：溫濕度、流型、換氣次數(shù)及微生物監(jiān)測 設備：設計和材質的可清潔性、規(guī)定的清潔和維修規(guī)程人員：更衣、清潔和人流物料和

9、廢物流向19清潔等級不同產品的批次之間 Product residue 產品殘留 Cleaning agents residue, if applicable 清潔劑殘留（如適用） 同一產品的批次之間 Cleaning agents residue, if applicable 清潔劑殘留（如適用） Degradants 降解物20清洗方法手工清洗由操作人員用檫洗或用高壓軟管進行的清洗自動清洗由自動控制對容器及管道進行高壓沖洗直至干燥的清洗半自動清洗結合以上兩者的清洗過程11 九月 202221清潔需注意的要點清潔速率同流速的關系清潔速率流 速層流湍流湍流公式： NRe=VD/其中：V：流速D

10、：特征距離（管子/管道直徑） ：流體密度 ：動態(tài)流體粘度管子或管道：如果NRe2000 如果NRe4000層流湍流22清潔需注意的要點 湍流的清潔速率大大大于層流的清潔速率；盲管和垂直管道中的清潔液的速率要大于湍流所需的速率，通常要求大于1.52米/秒（5英寸/秒）； 在設備設計時需要考慮盲管的清潔問題，通常要求L/D20200.52BFreely soluble22501000010100.53CFreely soluble1000400010100.254DFreely soluble50040003.84.70.55EFreely soluble2000120004.263.840.75

11、6FFreely soluble20006000202017GFreely soluble100060002.763.900.511 九月 202254選擇MTDD的最小值，以及批量與LDSD比值的最小值選擇LD50的最小值，以及批量與LDSD比值的最小值選擇最小的批量值11 九月 202255最終選擇：0.1611 九月 202256清潔劑的限定值 清潔劑的組分不應該具有治療作用 為了確定清潔劑的安全性，各家公司經常采用唯一可知的清潔力活力的指標-LD50 LD50 根據(jù)動物模型的不同 (e.g., 大鼠, 幾內亞豬,小鼠等) 以及給藥方法的不同 (e.g., 口服, 外用,靜脈注射, i.

12、p., 皮下等） 由于我們希望保證殘余量對于使用下一劑藥物的患者是安全的，我們不能直接引用LD50的數(shù)據(jù)。 因而大部分公司首先計算ADI（可接受的每日攝入）或NOEL（無觀察效應水平）這兩個值 NOEL或ADI公式的形式與藥理學特性限定值的形式相同57清潔劑的限定值NOEL，根據(jù)大鼠口服給藥的LD50得出的典型公式為：NOEL = LD50 mg/kg x (5.6 x 10-4) x 70 kg轉換因子與安全因子將大鼠口服的 LD50 轉換為人體的NOEL注意: 安全因子可以防范: 個體反應差異, 因劑量 / 應答曲線變異而可能造成的最壞情況，以及使得未觀察到的效應被外顯出來。平均成人體重

13、注意: 可能更安全的方法是采用兒童體重或不考慮，盡管前文所述的安全因子被更多認為已經可以彌補這一問題。Ref: Doursan and Stara, J. Regulatory Toxicology and Pharmacology , 3, 224-238, 1983.Other Refs: D.W. Layton, et al., J. Regulatory Toxicology and Pharmacology , 7, 96 1987.Doursan, Toxicology , Vol. 1, No. 1, pp. 35-48, 1986.Doursan, Toxicology and

14、 Industrial Health , Vol. 4, No. 4, pp. 23-33, 1985.58清潔劑的限定值采用NOEL的全部公式為：Resultx Rinse or Diluent VolumeSurface Areax Recovery (decimal)LD50 mg/kg x (5.6 x 10-4) x 70 kg x BatchNP1xSizexDoseNPSFoptSampled 大部分公司仍執(zhí)行1/1000的安全因子；就像基于治療劑量的公式一樣，盡管計算出的值是“可接受”的，這并不意味著你希望下一名患者攝入該劑量。 采用的安全因子的數(shù)值經常會由公司慎重決定，并且取

15、決于生產環(huán)境的危險因素，可能受到污染的產品的風險以及殘留物的性質。第6模塊 限定值第 34頁59清潔劑殘留可接受限度 清潔劑殘留的可接受標準一般對最終淋洗水取樣分析清潔劑和溶劑的總殘留，瞬息的分析方法如下： TOC（總有機碳）1010-6 紫外分光光度法吸光度0.05，波長范圍210-360nm限度和接受標準60 微生物殘留可接受標準 清洗的微生物驗證應該和清洗的化學驗證同步進行； 棉簽擦拭法：洗出液取樣或壓痕法采樣； 淋洗液法：取定量的淋洗液過濾后，取濾膜培養(yǎng)。11 九月 202261應該考慮何種微生物殘余物，何時考慮?如果您的最終產品，根據(jù)產品規(guī)格，需要限制生物負荷與內毒素，清潔驗證則必須

16、包括這兩項 生物負荷包括細菌，酵母菌與霉菌。它們可以在水系統(tǒng)與環(huán)境中出現(xiàn)，可能由原材料，設備與人員產生。 內毒素是一種脂多糖，見于葛蘭氏陰性細菌的細胞膜；當細菌死亡時釋放，進入血液循環(huán)時會引起患者發(fā)熱。第6模塊 限定值第 36頁62微生物與內毒素污染的特征是什么? 生物負荷是由活體生物造成的，內毒素由活體系統(tǒng)產生，所以致熱源負荷與生物負荷水平主要取決于環(huán)境條件 設備是干燥，覆蓋并密閉的嗎? 環(huán)境是否為無菌環(huán)境或至少清潔生產區(qū)域以減少活體/非活體微粒水平，并對溫度與相對濕度進行控制？（對于生產與清潔設備儲存都適用） 環(huán)境條件由于四季更替會產生多大的變化？ 就像環(huán)境監(jiān)測一樣，生物負荷與致熱源評估不

17、是一次性行為 推薦做法是，應該對生物與內毒素負荷水平進行監(jiān)測，設定警報與行動值，并且在每一次超過限定值后進行適當?shù)募m正行動。第6模塊 限定值第 37頁63微生物與內毒素污染的預防 可以采用某些方法以減少殘余物，方法包括：去除法（如沖洗，擦洗）與殺滅/滅活法（如化學處理，干熱） 殺滅微生物污染可能造成內毒素污染的可能性，除非殺滅方法同時也是一種去內毒素工藝（如干熱） 清潔與消毒不能在一個步驟中完成： 殘余物會影響化學制劑的穿透 沖洗，例如常用的清潔后沖洗可能引入額外的生物負荷 用于消毒的制劑往往是弱清潔劑，而清潔劑又不適于用于殘余物消毒第模塊 限定值第 38頁64取樣方法的選擇 有以下所知的三種

18、取樣方法：Swabbing Method 棉簽擦拭法Rinse Sampling Method 沖淋取樣法Placebo method 模擬法65棉簽擦拭法優(yōu)點： 直接對表面污染進行評估能將不溶物或難溶物從設備表面實際去除在最后數(shù)據(jù)評價中能夠包括可接觸但難于清洗部位的數(shù)據(jù)66棉簽擦拭法 缺點：不易在大型設備上實施從小面積獲得的結果外推至設備的整個產品接觸表面 不易對難接近的區(qū)域進行取樣67棉簽擦拭法需考慮以下因素：Swab characterization, e.g. absorption capacity and interference 棉簽特性，如溶劑吸收能力、干擾性Swab recov

19、ery, e.g. 70% 棉簽回收率，如 70%Sampling locations and number of samples 取樣位置和取樣數(shù)量Sample surface area, e.g. 25 100cm2 取樣面積，如25 100cm2Swabbing technique, e.g. direction and numbers of strokes 取樣方法，如擦拭方向和次數(shù)Saturation and extraction solvents 浸濕和萃取溶劑68沖淋取樣法Advantages: 優(yōu)點： Ease of sampling 易于取樣 Evaluation of en

20、tire product contact surface 對整個產品接觸表面進行評價 Evaluation of inaccessible equipments or ones that cannot be easily or routinely disassembled 可對難以接近、不易拆卸或日常生產中不拆卸的設備進行評價69Disadvantages: 缺點： No physical removal of contaminant 不會實際去除污染物 Rinsing solvent may not reach inaccessible parts 沖淋溶劑或許達不到一些難以觸及的部件 Us

21、e of organic solvents for water insoluble materials 對一些不溶于水的物質使用有機溶劑進行溶解沖淋取樣法70模擬法設備清潔干燥后，在該設備內進行模擬物料處理，然后取一部份進行測試Discouraged vigorously by regulatory authorities due to： 法規(guī)部門強力不推薦使用此法，原因如下：No means to ensure residues are uniformly distributed throughout the equipment 無人能確保殘留均勻地遺留在設備整個表面Residue of l

22、arger particle size not uniformly dispersed in placebo 較大顆粒的殘留不能均勻地分散到模擬物料中71分析方法的選擇Basic requirements: 具備以下基本要求：Appropriate sensitivity to the calculated limit 適宜的靈敏度，可檢測到計算出的限度Practical and rapid, as much as possible use instrumentation existing in company 實用、快速，盡量使用公司現(xiàn)有的儀器Be validated in accordan

23、ce with ICH, USP, EP and Chinese Pharmacopoeia requirements 按照ICH、美國藥典、歐洲藥典和中國藥典進行了驗證Include a recovery study to challenge sampling and testing method 應包括回收率測試，該測試對取樣方法和測試方法進行了挑戰(zhàn)72分析方法的選擇Specific Methods: 特定法：Chromatographic method Highly specific, sensitive and quantitative (e.g. LC/MS, GC/MS, HPLC

24、) 色譜法：具有高專屬性、高靈敏度，并且可定量（如液質聯(lián)用儀、氣質聯(lián)用儀、液相色譜儀）Thin layer chromatography (TLC) Highly specific, moderately sensitive, semiquantitative 薄層色譜法：具有高專屬性、適度的靈敏性，可半定量Specific ion meter Quantitative, only be used if active ingredient alone posses a specific ion 特定離子計：可定量，但只有當活性成分本身擁有一個特定離子時才能采用73分析方法的選擇Nonspeci

25、fic Methods: 非特定法：Spectrophotometric method in visible, infrared or UV ranges 分光光度法（可見區(qū)、紅外區(qū)或紫外區(qū)）Total organic carbon (TOC) 總有機碳Other methods, e.g. pH, conductivity 其他方法，如酸度、電導率74分析方法的驗證Should demonstrate the followings: 應證實以下要素： Accuracy (recovery) and range 準確度（回收率）和范圍 Precision 精確度 Linearity 線性 Se

26、lectivity選擇性 Detection limit 檢測限度 Quantitation limit 定量限度 Stability of standard and sample solution 標準溶液和樣品溶液的穩(wěn)定性75分析方法的驗證 通常清潔分析方法驗證包括取樣方法驗證和檢驗方法驗證 棉簽取樣方法的驗證： 取樣過程需經過驗證，通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和重現(xiàn)性。通常取樣回收率和檢驗方法回收率結合進行，總回收率一般（企業(yè)可以根據(jù)實際情況確定）不低于70%，多次取樣回收率的相對標準偏差應不大于20%； 棉簽取樣過程的驗證實際上是對取樣棉簽、溶劑的選擇、取樣人員操作、殘留物轉移到

27、取樣棉簽、樣品溶出（萃取）過程的全面考察。76棉簽取樣方法的驗證（續(xù)） 驗證方法如下： 1）準備一塊與設備表面材質相同的板材，如平整光潔的316L不銹鋼板； 2）在鋼板上劃出100100的區(qū)域； 3）將5倍限度量的待檢測物溶液，定量裝入校驗的微量注射器； 4）將其溶液盡量均勻地涂布在100100的區(qū)域內； 5）自然干燥或用電吹風溫和地吹干不銹鋼板； 6）用選定的擦拭溶劑潤濕擦拭棉簽，按下圖所示進行擦拭取樣； 7）重復以上規(guī)程3次；77棉簽取樣方法的驗證（續(xù)） 8）將擦拭棉簽分別放入棉簽管中，加入預定溶劑5ml，超聲； 9）用經驗證的檢驗方法檢驗，計算回收率和回收率的RSD。 下圖為棉簽擦拭取樣

28、方法：第一步第二步7811 九月 202279淋洗液取樣方法的驗證 通常淋洗法限度檢查不需做回收率驗證：定量檢查應做回收率驗證，可以利用淋洗溶劑沖洗已知量（在限度附近）的分析物確定回收率，回收率通常應不低于95%； 淋洗的取樣方法為根據(jù)淋洗水流經設備的線路，選擇淋洗線路相對最下游的一個或幾個排水口為取樣口。分別按照微生物檢驗樣品和化學檢驗品的取樣規(guī)程收集清潔程序最后一步淋洗即將結束時的水樣； 淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測，也可對沖洗液做稀釋后檢測；無論直接檢測還是稀釋檢測都應在接到樣品后首先將樣品同空白溶劑做視覺檢查，確定是否有顏色差異和異物存在；如果有述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判定樣品不合格。80取

29、樣方法和取樣點的確認 （2）取樣點的確認 通常可能擦拭設備的全部表面，因此，應該選擇設備的最差區(qū)域作為取樣點。這些區(qū)域應在清潔難度和殘留水平方面代表著對清潔規(guī)程最大程度的挑戰(zhàn)，例如：料斗的底部、槳拌槳葉底部和閥門的周圍。 如果進行微生物取樣，取樣計劃應包括微生物的可能最差區(qū)域，例如：較難靠近的地方以及可收集水的排水區(qū)域。微生物和化學取樣應在不同區(qū)域進行，測試方案中應包括設備及其取樣點的描述或圖表。81分析方法的驗證 通常清洗分析方法分為限度檢查和定量檢查，不同的檢查方法驗證的參數(shù)也不相同。 （1）回收率 回收率的分析方法驗證已在取樣方法的驗證中詳細描述，不在此贅述。 （2）精密度 精密度系指在

30、規(guī)定的條件下，從同一個均勻樣品中，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。通常用相對標準偏差（RSD）來表示。定量檢查的RSD應不大于10%。 淋洗法和棉簽法用于限度檢查通常不需要做精密度實驗。82分析方法的驗證 （3）線性/范圍 線性系指在設計的范圍內，測定結果與試樣中被測物濃度呈正比關系的程度。 范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 定量檢查應至少測試5個濃度范圍并且包含清潔的最低限和最高限度，線性的相關系數(shù)應不低于0.98%；濃度范圍應達到殘留物限度的50%-150%。 淋洗法和棉簽法用于限度檢查時不需做線性/范圍驗證。83分析方法的驗證 （4）檢測

31、限和定量限 檢測限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被檢測出的最小量；定量限系指在確定的試驗條件下，試樣中被測物能被準確測定的最小量，其測定結果應具有一定準確度和精密度。 淋洗法和棉簽法用于限度檢查只需做檢測限實驗。 通常檢測限是指信噪比為3：1時被分析物的濃度，定量限是指信噪比為10：1時被分析物的濃度。84分析方法的驗證 （5）專屬性 專屬性系指在其他成分（如：雜質、降解產物、相似物等）存在下，分析方法能準確測出被測物的特性。 評價空白溶劑、分析系統(tǒng)、棉簽本身是否有干擾。 通常采用的驗證方法為：進針空白溶劑評價溶劑干擾、進樣量為0評價系統(tǒng)干擾、進針棉簽浸泡的溶劑評價棉簽干擾。 （6）樣

32、品溶液穩(wěn)定性 通常樣品室溫或5冰箱冷藏放置24-72小時，測定結果應不低于原值的90%。85分析方法的驗證 （7）系統(tǒng)適用性 定量檢查測定時，應制備2份對照品，對照品一致性檢查應為不超過5%；對照品的RSD不應超過10%。 （8）限度檢查時溶液的進樣順序 限度檢查測定時測定順序依次為空白溶劑、樣品、對照品。 下面是限度檢查和定量檢查時所需驗證的參數(shù)：86限度檢查和定量檢查時所需驗證的參數(shù)檢查方法參 數(shù)87計劃及執(zhí)行一般來說，以下部門參與清潔驗證： Production 生產部 Engineering 工程部 Research & Development 研發(fā)人員 Validation 驗證人員

33、 Quality Control 質量控制 Quality Assurance 質量保證88計劃及執(zhí)行應編寫一個綜合的清潔驗證主計劃，其至少包括以下內容： Purpose 目的 Overview of site/facility/area 廠房/設施/區(qū)域的概括描述 Overview of manufacturing processes 生產工藝概括描述 Overview of cleaning methods 清潔方法的概括描述 Responsibilities of various departments 各部門的職責 Cleaning validation policy 清潔驗證的策略8

34、9計劃及執(zhí)行清潔驗證主計劃應至少包括以下內容（續(xù)）： List of equipments and products 設備和產品明顯表 Product and equipment group, if applicable 產品和設備組（如適用） Worst-case product and equipment, if applicable 最壞條件產品和設備（如適用） Calculation of contamination limit 污染限度計算 Execution planning 執(zhí)行計劃90計劃及執(zhí)行應對需要驗證的每個設備編寫一個清潔驗證方案，主要內容如下： Purpose and

35、scope 目的和范圍 Responsibility 責任 Equipment description 設備描述 Cleaning procedure 清潔程序。1、生產結束至開始清潔的最長時間（也稱待清潔設備保留時間）； 2、已清潔設備用于下次生產前的最長存放時間（也稱潔凈保留時間）； 3、連續(xù)生產最長時間91計劃及執(zhí)行清潔驗證方案的主要內容如下（續(xù)）： Sampling procedure and location diagram 取樣程序和取樣位置示意圖 Analytical test procedure and method validation 分析測試方法和方法驗證 Acceptance cle