生物選修一知識點

1、.-專題1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用課題1 果酒和果醋的制作代類型：同化合成代自養(yǎng)、異養(yǎng)異化分解代需氧、厭氧、兼性厭氧酵母菌：單細胞真菌；乳白色；表面光滑；含糖較高；偏酸環(huán)境4.0-5.8；無性生殖出芽；20最適合其繁殖；酒精發(fā)酵時溫度控制在18-25發(fā)酵：通過微生物或動植物細胞的培養(yǎng)大量生產(chǎn)各種代產(chǎn)物的過程有氧發(fā)酵&無氧發(fā)酵醋酸菌：原核細菌；分裂生殖；異養(yǎng)好氧型當氧氣和糖源都充足時醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?；醋酸菌的最適生長溫度為30-35充氣口：醋酸發(fā)酵時連接充氣泵，充入無菌空氣，制酒時關閉釀酒前期可通入少量空氣排氣口：酒精發(fā)酵時排出CO2，平衡容器外壓力

2、長導管：防止微生物污染出料口：用來取樣，監(jiān)測菌體數(shù)量或酒精、醋酸濃度，排放廢料材料的選擇與處理：選擇新鮮的葡萄，榨汁前先將葡萄沖洗洗去浮塵，不能反復沖洗，并除去枝梗條件：葡萄汁裝入后要留有1/3的空間；葡萄酒：溫度18-25；時間10-12d；果醋：30-35，7-8d充氣應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？先沖洗葡萄，避免除去枝梗時葡萄破損增加被雜菌污染的幾率制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在18-25？制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在30-35？溫度是酵母菌與醋酸菌生長和發(fā)酵的重要條件，以上是生長的最適溫度制葡萄醋時，為什么要適時通過充氣口充氣？醋酸菌是好氧菌，將酒精變?yōu)榇姿釙r需要醋酸菌的

3、參與，因此需要充氣課題2腐乳的制作多種微生物參與了腐乳的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中其主要作用的是毛霉。毛霉：絲狀真菌，異養(yǎng)需氧，分布廣泛，常見于土壤，適宜發(fā)酵溫度：15-18；孢子生殖；產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸菌絲：直立菌絲氣生菌絲、產(chǎn)生孢子生殖；匍匐菌絲基菌絲：吸收營養(yǎng)實驗設計：常溫一般6個月；15-18不適于細菌、酵母菌和曲霉生長而適于毛霉生長；豆腐塊上的毛霉來自空氣中的毛霉孢子加鹽目的：析出豆腐中的水分，使豆腐塊變硬，在后期制作過程中不會過早酥爛；抑制微生物生長，避免豆腐塊腐敗變質。接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些，否

4、那么容易被雜菌污染鹵湯：由酒以及各種香辛料配制而成；加酒可以抑制微生物的生長，并且使腐乳具有獨特的香味；香辛料可以調制腐乳的風味，也具有防腐殺菌的作用影響腐乳品質的主要因素：菌種和雜菌；溫度過低或過高會影響毛霉的生長和酶的作用，從而影響發(fā)酵進程和發(fā)酵質量；發(fā)酵時間過短發(fā)酵不充分；過長豆腐軟化不宜成型，影響腐乳口味；調味品用鹽量：調味、殺菌、脫水防止雜菌污染的方法：玻璃瓶洗刷干凈后要用沸水消毒；裝瓶時操作小心，整齊的擺放好豆腐、加入鹵湯后要用膠條將瓶口密封最好在封瓶時將瓶口通過酒精燈的火焰防止污染；加鹽腌制、鹵湯中加酒精、香辛料豆腐長白毛是怎么回事？毛霉的直立菌絲為什么要撒很多鹽將長毛的豆腐腌起

5、來？高濃度鹽水中細菌脫水死亡平常吃的豆腐哪種適合用來做腐乳，為什么？含水量適中70%左右；過高不宜成型；過低不適宜毛霉生存豆腐口感不好，豆腐較硬的原因是什么？含水量不當，影響毛霉菌絲深入程度；發(fā)酵時間短，蛋白質未完全水解，加鹽后脫水蛋白質變性；菌種不純，變異，老化、調味品加入量不足專題2微生物的培養(yǎng)與應用課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物：病毒、原核生物界細菌、放線菌、真菌、原生生物；特點：結構簡單、個體微小、分類水平低細菌：基本結構：細胞壁、細胞膜、細胞質、擬核；特殊結構：莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢放線菌：單細胞原核；分立狀菌絲；孢子生殖；大多數(shù)抗生素由放線菌產(chǎn)生菌落：由單個或多個細胞在固體培養(yǎng)基

6、上繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體鑒定菌種的必要一句研究和應用微生物的前提：防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件；確保無處不在的其他微生物無法混入瓊脂：從紅藻中提取的多糖，在98以上熔化，在44一下凝固，在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈現(xiàn)固態(tài)培養(yǎng)基一般成分：水、碳源提供C、氮源提供N、無機鹽培養(yǎng)基條件：營養(yǎng)物質、pH、特殊營養(yǎng)物質、氧氣培養(yǎng)基用途：液體：增菌不能形成菌落；固體：分離純化、鑒定；半固體：動力檢測、保種消毒：用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或部的部分微生物不包括芽孢和孢子；煮沸消毒法、巴氏消毒法、用化學藥劑進行消毒、紫外線消毒滅菌：使用強烈的理化因素殺死物體外

7、所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌實驗程序：器具的滅菌、培養(yǎng)基的配置、培養(yǎng)基的滅菌、倒平板、微生物的接種、恒溫箱中培養(yǎng)、菌種的保存制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基：計算、稱量、熔化、滅菌、倒平板、無菌檢查37溫室中培養(yǎng)24-48h純化大腸桿菌常用方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法；核心：防止雜菌污染、保證培養(yǎng)物純度平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的菌落稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)在稀釋度足

8、夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個細胞從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落菌種的保存：頻繁使用的菌種臨時保藏，4斜面培養(yǎng)基：增大接種面積；長期保存甘油管藏，-20低溫、干燥、隔絕空氣無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來生物污染外，還有什么目的？還能有效避免操作者自身被微生物感染培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右才能用來倒平板，用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？用手觸摸，不燙手即可為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？灼燒滅菌，防止瓶口微生物污染培養(yǎng)基平板冷凝后，為什么要將平板倒置？避免培養(yǎng)基表面的水過快的揮發(fā)；防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底

9、的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物么？為什么？不能，因為空氣中微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生在灼燒接種環(huán)后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種在做第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條上末端細菌數(shù)目比線條起始處少，每次從上次末端劃線能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)增加而逐步減少，最終能得到由單個細胞繁殖而來的菌落涂布平板時取菌液應如何進行無菌操作？酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管要在酒精燈火焰周圍比較無土栽培技術、植物組織培養(yǎng)技術、微生物培養(yǎng)技術的異同相同：都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)不同：無土栽培

10、不需要無菌條件，而其他兩個需要課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)篩選菌株原理：在尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應的環(huán)境中去尋找；微生物的篩選，要人為提供有利于目的菌株生長的條件營養(yǎng)、溫度、pH等，同時抑制或阻止其他微生物生長選擇培養(yǎng)基：允許特定的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類的微生物生長的培養(yǎng)基稀釋涂布平板法統(tǒng)計數(shù)目：通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)推測出樣品約有多少活菌；一般選擇菌落數(shù)30-300的平板進行計數(shù)；統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際活菌數(shù)少原因：當多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落顯微鏡直接計數(shù)缺點：不能區(qū)分死活；不適于對運動細菌的計數(shù)；需要相對高的細菌濃度；個體

11、小的細菌在顯微鏡下難以觀察公式：每克樣品中的菌株數(shù)=某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)涂布平板時所用的稀釋液體積默認0.1mL稀釋倍數(shù)設置對照目的：排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度土壤取樣：土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基之稱，微生物數(shù)量最大，種類最多，微生物70-90%為細菌；細菌適宜在接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3-8cm的土壤層取樣操作：從肥沃、濕潤的土壤中取樣，先鏟去表層土3cm左右再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中樣品的稀釋：通常保證獲得菌落數(shù)為30-300，適于計數(shù)的平板；不同微生物在土壤中含量不同，因此要采用不同的稀釋度細菌：104、10

12、5、106；放線菌：103、104、105；真菌：102、103、104微生物的培養(yǎng)與觀察：不同微生物需要不同的培養(yǎng)溫度和時間細菌：30-37、1-2d；放線菌：25-28、5-7d；霉菌：25-28、3-4d；每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目菌落特征：形狀、大小、隆起程度、顏色無菌操作：取土樣用的小鐵鏟和盛土樣用的信封在使用前都需要滅菌；應在火焰旁稱取土壤，在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞；在喜事土壤溶液的過程中，每一步都需要在火焰旁邊操作做好標記：注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度進一步鑒

13、定分離菌種：細菌合成脲酶將尿素分解成氨，使pH升高；加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后如pH升高指示劑將變紅課題3 分解纖維素的微生物的分離纖維素：是地球上含量最豐富的多糖類物質，植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物；木材、作物秸稈等也富含纖維素；水溶性：羧甲基纖維素；不溶于水：微晶纖維素纖維素酶：復合酶，C1酶、Cx酶纖維素纖維二糖；葡萄糖苷酶纖維二糖葡萄糖纖維素分解酶的篩選：剛果紅染色法剛果紅可以和像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應；培養(yǎng)基中加入剛果紅，會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，這樣就可以通過

14、是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離得到所需微生物實驗流程：土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解酶的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落本實驗流程與課題2中的實驗流程有那些異同？多了“選擇培養(yǎng)為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？生物與環(huán)境存在互相依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對更高，因此在這種土壤中獲得目的微生物的幾率高于普通環(huán)境將濾紙埋在土壤中有什么作用？濾紙應該埋進多深？濾紙能使纖維素分解菌相對聚集，實際是人工設置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境；10cm左右的土壤先培養(yǎng)微生物再加入剛果紅與在倒平板時就

15、加入剛果紅的優(yōu)缺點？方法一：優(yōu)點：顯示出的顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用缺點：操作繁瑣；加入CR溶液會使菌落之間發(fā)生混雜方法二：優(yōu)點：操作簡便，不存在菌落混雜問題缺點：培養(yǎng)基中含有淀粉類物質，可能使產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應；有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分為什么選擇培養(yǎng)基能夠“濃縮所需的微生物？可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，那些不適應這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制菌種分解尿素的細菌纖維素分解菌條件尿素作唯一氮源纖維素作碳源鑒定方法現(xiàn)象培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑變紅培養(yǎng)基中應用CR染色法出現(xiàn)

16、透明圈鑒定原理能合成脲酶，把尿素分解聲稱氨使pH升高，加入酚紅指示劑變紅色能產(chǎn)生纖維素酶，將纖維素分解成二糖或葡萄糖，使纖維素-剛果紅復合物降解而出現(xiàn)透明圈步驟土壤取樣制備培養(yǎng)基梯度稀釋涂布平板培養(yǎng)觀察土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋CR染色挑取菌落進一步培養(yǎng)專題3植物的組織培養(yǎng)技術課題1 菊花的組織培養(yǎng)植物的繁殖：種子繁殖、營養(yǎng)繁殖扦插、嫁接、壓條、植物組織培養(yǎng)容易進行無性繁殖的職務一般也容易進行組織培養(yǎng)植物細胞表現(xiàn)全能性的條件：離體，無菌，營養(yǎng)，激素細胞分化：在植物的個體發(fā)育過程中，細胞在形態(tài)、結構和生理功能上都會出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程叫做細胞分化愈傷組織：愈傷組織的細胞排列疏松而無

17、規(guī)那么，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞脫分化：由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程也叫去分化再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或者芽等器官，這個過程叫再分化再分化形成的試管苗，移植到地里，可以發(fā)育成完整的植物體影響植物組織培養(yǎng)的因素：植物材料的選擇，適宜的培養(yǎng)基，植物激素，pH，溫度，光照，無菌技術材料：植物材料的選擇直接關系到實驗的成??；同一種植物材料的年齡、保存時間長短等也會影響實驗結果；菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株莖上部新萌生的側枝MS培養(yǎng)基成分：20多種大量元素：N、P、S、K、Ca、Mg；微量元素：Zn、Fe、B、Cu、Mo、Mn、Co

18、、I；有機物：甘氨酸、維生素、蔗糖等；植物激素常需要培養(yǎng)基作用：大量元素、微量元素：提供植物細胞生活所必需的無機鹽；蔗糖：提供碳源同時能夠維持細胞滲透壓；甘氨酸、維生素等：主要是為了滿足離體植物細胞在正常代途徑收到影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求與微生物培養(yǎng)基的區(qū)別：微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主；MS培養(yǎng)基提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括大量元素和微量元素兩大類植物激素：濃度具有兩重性順序：先生后分：有利于細胞分裂、不分化；先分后生：既分裂也分化；同時：分化頻率提高；比例：生根分芽其他條件：pH=5.8；T=18-22；每日用日光燈照射12h；制備MS固體培養(yǎng)基：配置各種母液將各種成分按照配方比例配

19、制成濃縮液，計算用量加水稀釋；配置培養(yǎng)基加入瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物、植物激素的母液；菊花莖段組織培養(yǎng)可以不必添加植物激素；滅菌培養(yǎng)基連同其他器械高壓蒸汽滅菌外植體的消毒：生長旺盛的嫩枝流水沖洗刷洗，沖洗20min左右無菌吸水紙吸干表面水分70%酒精中搖動2-3次，持續(xù)6-7s無菌水清洗無菌吸水紙吸干表面水分0.1%HgCl2aq浸泡1-2min無菌水清洗至少3次接種：插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種6-8個外植體培養(yǎng)：無菌箱中，定期消毒；18-22，每日用日光燈照射12h移栽：移栽前先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過

20、毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，長壯后再移栽到土壤中實驗中的無菌技術：培養(yǎng)基及接種用具徹底滅菌；外植體的消毒；接種的無菌操作；無菌箱中的培養(yǎng)；移栽到消過毒的環(huán)境中一段時間在植物組織培養(yǎng)的過程中，為什么要進行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？植物材料體積小，抗性差，對培養(yǎng)條件要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于微生物的生長，而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染就會導致實驗前功盡棄。因此要進行嚴格的無菌操作選取菊花莖段為什么要選取生長旺盛的嫩枝？外植體的生殖狀態(tài)是進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導脫分化和再分化課題2月季的花藥培養(yǎng)單倍體育種：采用花藥培養(yǎng)的方法

21、，使花粉粒發(fā)育為單倍體植株，再經(jīng)過人工誘導使染色體數(shù)目加倍，重新恢復到正常植株的染色體數(shù)目。這樣的植株不僅能夠正常生殖，而且每對染色體上的成對的基因都是純合的，自交產(chǎn)生的后代不會產(chǎn)生性狀分離；單倍體育種不僅縮短了育種周期，也為新品種的培育開辟了新途徑被子植物的花粉發(fā)育：1個花粉母細胞減數(shù)分裂4個小孢子四分體時期單核期雙核期有絲分裂4個營養(yǎng)細胞+4個生殖細胞有絲分裂8個精子花粉粒：二核花粉粒：成熟時只含花粉管細胞核、生殖細胞核，精子在花粉管中形成；三核花粉粒：成熟前形成鏡子，成熟時含有一個營養(yǎng)核和兩個精子產(chǎn)生花粉植株的途徑：花藥中的花粉脫分化愈傷組織/胚狀體再分化叢芽誘導生根移栽；這兩種途徑之間

22、沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類與濃度配比影響花藥培養(yǎng)的因素：主要因素：材料的選擇、培養(yǎng)基的組成；其他因素：親本植株的生長條件、材料的低溫預處理、接種密度材料的選擇：花期早期初花期誘導成功率高；單核期對離體刺激敏感，誘導成功率高單核期前質地幼嫩，極易破碎；單核期以后花瓣松動，微生物可能入侵花藥，消毒困難；花蕾完全未開放；通過鏡檢確定劃分是否處于適宜發(fā)育期最常用醋酸洋紅法，但某些花粉的細胞核不易著色；焙花青鉻釩法能將花粉細胞染成藍黑色材料的消毒：花蕾用70%酒精浸泡30s取出，無菌水清洗無菌吸水紙吸干0.1%HgCl2溶液或1%Ca(CL0)2或飽和漂白粉溶液2-4min取出，無菌水

23、清洗接種和培養(yǎng)：無菌條件下去除萼片和花瓣，立即將花藥接種到培養(yǎng)基上剝離花藥時要盡量不損傷花藥，否那么接種后容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織；徹底去除花絲與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成；每瓶接種7-10個，培養(yǎng)溫度25左右，不需要光照幼小植株形成后需要光照；20-30d后花藥開裂楚愈傷組織或胚狀體愈傷組織：及時轉移到分化培養(yǎng)基；胚狀體：及時將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上；由于營養(yǎng)和生殖核融合，染色體數(shù)目常會發(fā)生變化，需要對培養(yǎng)出來的植株作進一步的鑒定和篩選為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？花瓣松動，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難完全未開放的花蕾不含微生物植物組織

24、培養(yǎng)技術和花藥培養(yǎng)技術有何異同？相同：培養(yǎng)基的配制方法、無菌技術、接種操作等不同：花藥選材，裂開后釋放的愈傷組織、胚狀體；更換培養(yǎng)基；培養(yǎng)基的配方等專題4酶的研究與應用課題1 果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用果膠：是植物細胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，是由半乳糖醛酸聚合而成的一種高分子化合物，不溶于水影響出汁率，使果汁渾濁果膠酶：能分解果膠、瓦解細胞壁與胞間層，使榨取果汁變得容易；果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸，使渾濁的果汁變得澄清；果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等；來源于植物、霉菌、細菌、酵母菌酶的活性：酶催化一定化學反應的能力可以用一

25、定條件下催化反應的反應速度表示，即單位時間單位體積中反應物減少量或產(chǎn)物的增加量；影響因素：溫度、pH、酶的抑制劑等為什么混合蘋果泥和果膠酶之前，要將果泥和果膠酶分別裝在不同的試管中恒溫處理？可以保證底物和酶在混合時溫度相同，避免了果泥和果膠酶混合時影響混合物溫度，從而影響果膠酶活性的問題在探究溫度或pH對酶活性的影響時，是否需要設置對照？應該如何設置？為什么？需要。不同溫度、pH梯度之間可作為對照，稱為相互對照為什么要將溫度或pH作為自變量？有什么不變量？蘋果泥用量、果膠酶用量、反應時間、過濾時間等；只有保證一個自變量，才能說明問題為什么能夠通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低

26、？果膠酶將果膠分解為小分子物質，小分子物質可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大小反映了果膠酶的催化分解果膠的能力，不同溫度、pH下，果膠酶活性越大，蘋果汁的體積會越大當探究溫度對果膠酶活性的影響時，哪個因素是自變量，哪些因素應該保持不變？自變量：溫度；不變量：pH、蘋果泥的量、反應時間、過濾時間、果膠酶的濃度與用量大規(guī)模生產(chǎn)與實驗室制備有什么不同點？工業(yè)制法有兩次瞬間高溫滅菌；酶處理的時間相對較長；有離心分離步驟和濃縮步驟課題3 酵母細胞的固定化葡萄糖異構酶：能將葡萄糖轉化為果糖，穩(wěn)定性好，可持續(xù)發(fā)揮作用可用于高果糖漿的生產(chǎn)反應柱：將酶固定在顆粒狀載體上，再將這些酶顆粒裝到一個反應柱；柱子底端裝著

27、分布著許多小孔的篩板酶顆粒無法通過篩板上的小孔，而反映溶液卻可以自由出入；原理：反應物溶液從上端流入，使反應物溶液通過反應柱，與固定化酶接觸，得到產(chǎn)物，從反應柱的下端流出；能大大降低生產(chǎn)成本與提高果糖的質量和產(chǎn)量固定方法：固定化酶：化學結合法、物理吸附法；固定化細胞：包埋法原因：體積大的細胞難以被吸附或結合，體積小的酶容易從包埋材料中漏出固定化酶與固定化細胞的聯(lián)系與區(qū)別：聯(lián)系：應用相同，都能催化某些反應；區(qū)別：固定化細胞技術操作容易，成本低，容易回收；固定化細胞對酶活性影響更??；固定化細胞固定的是一系列酶，可以連續(xù)催化酶反應；由于大分子難以通過細胞膜，因此固定化細胞的應用有一些限制包埋法：將微

28、生物細胞均勻的包埋在不溶于水的多孔性載體中常用載體：明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素、聚丙烯酰胺酵母細胞的活化：缺水狀態(tài)下，微生物處于休眠狀態(tài)；活化就是處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復正常的生活狀態(tài)固定酵母細胞步驟：酵母細胞的活化；配置0.05mol/LCaCl2溶液使膠體聚沉；配置海藻酸鈉溶液影響實驗成敗的關鍵步驟；小火間斷加熱；海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合先將海藻酸鈉溶液冷卻至室溫；固定化酵母細胞海藻酸鈉濃度對實驗的影響：濃度過高將很難形成凝膠珠；濃度過低形成的凝膠珠包埋酵母細胞數(shù)目少顏色過淺；影響實驗效果用固定化酵母細胞發(fā)酵：將凝膠珠用蒸餾水沖洗2-3次；向葡萄糖溶液中加入固定酵母細胞，置于

29、25下發(fā)酵24h類型優(yōu)點不足直接使用酶催化效率高，低能耗低污染對環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，生產(chǎn)成本高；反應后酶混在產(chǎn)物中可能影響產(chǎn)品質量固定化酶酶既可以與反應物接觸又能與產(chǎn)物分離，同時固定在載體上的酶還可以被反復利用一種酶只能催化一種化學反應，而在生產(chǎn)實踐中很多產(chǎn)物的形是通過一系列酶促反應才能得到的固定化細胞成本低，操作容易固定后的細胞與反應物不容易接觸，可能導致反應效果下降專題5DNA和蛋白質技術課題1 DNA的粗提取與鑒定DNA粗提取原理：利用DNA與RNA、蛋白質和脂質等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分DNA的溶解性：當NaCl溶

30、液濃度為2mol/L時DNA溶解度最大，濃度為0.14mol/L時DNA溶解度最小，利用這一原理可以使DNA在鹽溶液中溶解或析出；DNA不溶于酒精，但細胞中某些蛋白質溶于酒精，利用這一原理可以將DNA與蛋白質進一步分離DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解蛋白質，但對DNA沒有影響；大多數(shù)蛋白質不能忍受60-80的高溫，但DNA在80以上才會變性；洗滌劑能瓦解細胞膜，去除脂質和蛋白質，但對DNA沒有影響選取實驗材料：菜花、雞血、洋蔥細胞DNA含量較高DNA的溶解和釋放：動物細胞：向雞血細胞中加入蒸餾水血液中加入檸檬酸鈉防止凝固，同時用玻璃棒交辦，過濾后收集濾液攪拌應快速，加速血細胞破裂

31、；植物細胞：切碎，加入洗滌劑和實驗，進行充分攪拌和研磨，過濾收集研磨液DNA的純化：加入NaCl調節(jié)濃度為2mol/L，過濾除去不溶的雜質，加蒸餾水調節(jié)NaCl溶液溶解DNA；在濾液中加入嫩肉粉，反應10-15min；將濾液放在60-75恒溫水浴箱中保溫10-15minDNA的析出：加入與濾液體積相等的、冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精溶液，靜置2-3min；用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水分加入酒精和攪拌時的動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀DNA的鑒定：沸水浴條件下，DNA與二苯胺反應呈現(xiàn)藍色；取2支20mL試管各加入2mol/L Na

32、Cl溶液5mL，將絲狀物放入其中一個試管中，攪拌使其溶解，各加入4mL二苯胺試劑，混勻后將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，比較溶液顏色變化二苯胺試劑要現(xiàn)配先用，否那么會影響鑒定效果為什么加入蒸餾水能使雞血細胞排列？蒸餾水對于雞血細胞來說市一中低滲液體，水分可以大量進入血細胞中使血細胞賬裂，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂，從而釋放出DNA加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？洗滌劑是離子去污劑，溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽主要成分NaCl有利于DNA的溶解如果研磨不充分，會對實驗結果產(chǎn)生怎樣的影響？ DNA釋放不完全，提取的DNA少，影響結果，看不到絲狀物，鑒定不顯藍

33、色濾液中可能含有那些細胞成分？RNA、核蛋白、多糖等為什么反復溶解與析出DNA，能夠去除雜質？高濃度鹽溶液溶解DNA，除去某些不溶性雜質；低濃度鹽溶液能使DNA析出，能除去在低鹽溶液中溶解的雜質；反復溶解析出能夠除去與DNA溶解度不同的雜質加入嫩肉粉與恒溫加熱去除雜質的原理有什么不同？前者是利用蛋白酶分解雜質蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質分開后者利用DNA與蛋白質對高溫的耐受性不同，使蛋白質變性與DNA分離DNA實驗操作中的主要步驟都有什么目的？材料選取：選取DNA含量較高的生物材料，否那么會由于實驗過程中或多或少的損失而造成檢測困難DNA的釋放與溶解：盡量使細胞DNA全部溶解DNA純化：對DNA溶解性，對酶及高溫的耐受性與其他雜質不同，最大限度將DNA與雜質分開DNA的鑒定：對整個實驗結果的監(jiān)測從細胞中提取某種特定的蛋白質與提取DNA一樣容易么？為什么？不一樣，蛋白質難度大。蛋白質對溫度、鹽濃度、pH條件敏感得多，容易失活；而且蛋白質空間結構多種多樣，理化性質各不相同。蛋白質的提取沒有統(tǒng)一方法，只能根據(jù)特定蛋白質的特性摸索提取的條件，