血紅蛋白的提取和分離習(xí)題講解課件

1、既可與底物結(jié)合又可與產(chǎn)物分離，可反復(fù)利用酶不會(huì)混在產(chǎn)物中，不會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量加入樣品樣品的洗脫1洗脫2洗脫3三、血紅蛋白的提取和分離三、血紅蛋白的提取和分離得到了含許多雜質(zhì)的血紅蛋白水溶液三、血紅蛋白的提取和分離得到了含許多雜質(zhì)的血紅蛋白水溶液三、血紅蛋白的提取和分離得到了含許多雜質(zhì)的血紅蛋白水溶液 1、干凝膠吸水膨脹。 2、凝膠色譜柱的裝填：將吸水膨脹的凝膠顆粒沿玻璃管內(nèi)壁灌入，同時(shí)輕輕敲擊管壁，排出柱內(nèi)氣泡，并保證柱床上表面平整。靜置，使凝膠顆粒沉降至柱內(nèi)出現(xiàn)清晰固液分界面。3、凝膠珠裝填完成之后，需要立即連接磷酸緩沖液洗滌平衡凝膠12h，使凝膠裝填緊密。三、血紅蛋白的提取和分離得到了含許多

2、雜質(zhì)的血紅蛋白水溶液 樣品加入：滴管尖端緊貼柱內(nèi)壁，以勻速轉(zhuǎn)圈的方式沿內(nèi)壁加入樣品，保證樣品在凝膠上表面均勻分布，形成狹窄、均勻、整齊的圓環(huán)狀樣品層。 洗脫：以勻速轉(zhuǎn)圈的方式沿內(nèi)壁加入磷酸緩沖液，不能沖亂整齊的環(huán)狀樣品層。加入樣品樣品的洗脫1洗脫2洗脫3三、血紅蛋白的提取和分離得到了含許多雜質(zhì)的血紅蛋白水溶液 思考2、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳還可以測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量，其原理是？分析：使用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定樣品蛋白的分子量時(shí)，可選用一組已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，經(jīng)過(guò)一定得換算，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率取決于它

3、所帶凈電荷的多少以及分子的大小。Marker純化前純化后1純化后297KD66KD45KD20.1KD14.4KD（一組已知分子量的蛋白質(zhì)）電泳結(jié)果血紅蛋白的提取和分離習(xí)題講解2020課標(biāo)II卷37.生物選修1:生物技術(shù)實(shí)踐（15分） 研究人員從海底微生物中分離到一種在低溫下有催化活性的a-淀粉酶A3,并對(duì)其進(jìn)行了研究?；卮鹣铝袉?wèn)題： （1)在以淀粉為底物測(cè)定A3酶活性時(shí)，既可檢測(cè)淀粉的減少，檢測(cè)應(yīng)采用的試劑是_，也可采用斐林試劑檢測(cè)_的增加。 （2)在A3的分離過(guò)程中可采用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)其純度，通常會(huì)在凝膠中添加 SDS,SDS 的作用是_和_。還原糖（或葡萄糖）清除蛋白質(zhì)所帶凈電荷

4、對(duì)遷移率的影響碘液使蛋白質(zhì)發(fā)生變性 （3)本實(shí)驗(yàn)中，研究人員在確定A3的最適pH時(shí)使用了三種組分不同的緩沖系統(tǒng)，結(jié)果如圖所示。某同學(xué)據(jù)圖判斷，緩沖系統(tǒng)的組分對(duì)酶活性有影響，其判斷依據(jù)是_。在pH相同時(shí)，不同緩沖系統(tǒng)條件下所測(cè)得的相對(duì)酶活性不同 （4)在制備 A3的固定化酶時(shí)，一般不宜采用包埋法，原因是_（答出1點(diǎn)即可）。酶分子體積小，容易從包埋材料中漏出2、上方右圖表示血紅蛋白提取和分離的部分實(shí)驗(yàn)裝置，請(qǐng)回答下列問(wèn)題。 （1）血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，其在紅細(xì)胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質(zhì)具有運(yùn)輸功能，一個(gè)血紅蛋白分子至少含有_個(gè)游離的氨基，含有_個(gè)亞鐵離子。血紅蛋白因?yàn)楹衉而

5、呈現(xiàn)紅色。 （2）甲裝置用于_，原理_。 （3）乙裝置中，C溶液是_。用乙裝置分離血紅蛋白時(shí)，待_接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5mL收集一管，連續(xù)收集。如果，則說(shuō)明色譜柱制作成功。44血紅素透析（或粗分離）透析袋是半透膜制作的，小分子物質(zhì)可以通過(guò)，大分子物質(zhì)不能通過(guò)磷酸緩沖溶液紅色的血紅蛋白3、羊的紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，可以選用羊的血液來(lái)提取和分離血紅蛋白。請(qǐng)根據(jù)材料回答下列問(wèn)題： （1）實(shí)驗(yàn)前取新鮮血液，為了防止血液凝固，要在采血器中預(yù)先加入_。取血后，馬上進(jìn)行離心，目的是分離、收集_。 （2）在對(duì)樣品進(jìn)行處理時(shí)，主要包括紅細(xì)胞的洗滌、_、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中分離血

6、紅蛋白溶液是利用離心法將紅細(xì)胞的不同組分分開(kāi)，結(jié)果可以從試管中明顯看到溶液分為4層，自上往下數(shù)，血紅蛋白位于第_層。 （3）同學(xué)甲利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，在電泳過(guò)程中，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素包括蛋白質(zhì)分子的大小、_以及_等。 （4）電泳是指_的過(guò)程。檸檬酸鈉紅細(xì)胞血紅蛋白的釋放3帶電性質(zhì)分子的形狀帶電離子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移4、哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，在生命科學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題： （1）哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞是由骨髓中的造血干細(xì)胞經(jīng)_（填“有絲分裂”或“無(wú)絲分裂”）和分化形成的。 （2）從哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中提取血紅蛋白時(shí)，首先要用相當(dāng)于紅細(xì)胞液

7、體體積五倍的_洗滌紅細(xì)胞_次，然后用蒸餾水和甲苯使紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。 （3）得到血紅蛋白混合液之后，可先用離心法進(jìn)行樣品處理及粗分離，再通過(guò)_法或凝膠電泳法進(jìn)一步純化。使用前一種方法純化時(shí)，先從色譜柱洗脫出來(lái)的是_（填“大分子”或“小分子”）蛋白質(zhì)。 （4）因哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞核和眾多的細(xì)胞器，常被用作制備細(xì)胞膜的材料。與提取血紅蛋白不同的是：在制備細(xì)胞膜時(shí)，紅細(xì)胞的破裂只能使用_而不能使用_。有絲分裂生理鹽水3凝膠色譜大分子蒸餾水甲苯5、科學(xué)家關(guān)于分泌酶的研究，對(duì)阿爾茲海默癥的特異性藥物設(shè)計(jì)提供了重要的結(jié)構(gòu)信息?；卮鹣铝袉?wèn)題： （1）酶大規(guī)模應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，于是出

8、現(xiàn)了固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)。固定化酶和固定化細(xì)胞技術(shù)是利用_將_固定在_的技術(shù)，包括_、_和物理吸附法。 （2）分泌酶由4個(gè)跨膜蛋白亞基組成。若對(duì)分泌酶4個(gè)跨膜蛋白亞基進(jìn)行分離、純化及分子量測(cè)定，需采用_及電泳技術(shù)。前者是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量較大的跨膜蛋白移動(dòng)速度_（較快、較慢、無(wú)差異）。 （3）電泳是指_在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的_，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。 （4）對(duì)分泌酶的4個(gè)跨膜蛋白亞基進(jìn)行分子量測(cè)定時(shí)，通常采用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法，SDS能

9、使蛋白質(zhì)完全變性，并解聚成單條肽鏈，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差別，使該電泳遷移率完全取決于_。相對(duì)分子量的大小物理或化學(xué)方法酶或細(xì)胞一定空間內(nèi)化學(xué)結(jié)合法包埋法凝膠色譜較快帶電粒子遷移速度6、大腸桿菌是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類(lèi)細(xì)菌，含有2000種以上的蛋白質(zhì)?；卮鹣铝袉?wèn)題： （1）大腸桿菌的培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基為大腸桿菌的生長(zhǎng)提供_。培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前通常需要檢測(cè)固體培養(yǎng)基是否被污染，檢測(cè)的方法是_。 （2）利用平板劃線(xiàn)法純化大腸桿菌時(shí)，通過(guò)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)，將聚集的菌種_分散到培養(yǎng)基的表面

10、；長(zhǎng)期保存純化后的菌種，可以采用_的方法。稀釋涂布平板法是根據(jù)培養(yǎng)基上的菌落的數(shù)目來(lái)推測(cè)樣品中的活菌數(shù)，其原理是_。稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品中的一個(gè)活菌碳源、氮源、維生素、水和無(wú)機(jī)鹽將未接種的培養(yǎng)基在適宜的條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落出現(xiàn)逐步稀釋甘油管藏6、大腸桿菌是人和許多動(dòng)物腸道中最主要且數(shù)量最多的一類(lèi)細(xì)菌，含有2000種以上的蛋白質(zhì)。回答下列問(wèn)題： （3）利用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質(zhì)過(guò)程如圖一，正確的加樣順序是_（用數(shù)字表示）。圖二、圖三分別是同學(xué)甲、乙利用同一種樣品分離得到的結(jié)果，則圖三中與圖二中蛋白質(zhì)P對(duì)應(yīng)的是_。 （4）圖四是用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質(zhì)粗品的洗脫曲線(xiàn)（橫軸表示將某成分洗脫出來(lái)所需的洗脫液體積，縱軸表示該組分在某光下的吸收光度值）。實(shí)驗(yàn)中常用到的洗脫液是_，分析曲線(xiàn)可得，分離得到的這5種蛋白質(zhì)中，相對(duì)分子質(zhì)量最小的是_（序號(hào)）。丙磷酸緩沖液57、某生物興趣小組在“蛋白質(zhì)的提取和分離”實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)備從豬的血液中初步提取血紅蛋白，設(shè)計(jì)的“血紅蛋白提取、分離流程圖”如下：請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題： （1）樣品處理中紅細(xì)胞的洗滌要用_反復(fù)沖洗、離心。向紅細(xì)胞懸液中加入一定量的低濃度pH7.0的緩沖液并充分?jǐn)嚢?，可以破碎紅細(xì)胞，破碎細(xì)胞的原理是_。 （2）血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是_，若要盡快達(dá)到理