肝纖維化的檢測課件

1、肝纖維化檢測及肝纖四項產(chǎn)品的應(yīng)用肝纖維化檢測及肝纖四項產(chǎn)品的應(yīng)用Contents化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介肝纖維化綜述肝纖維化的檢測方法血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值其他血清學(xué)檢測指標(biāo)簡介肝纖維化診斷現(xiàn)狀肝纖四項檢測常見問題Contents化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介Part1.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)概念 化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)是臨床診斷領(lǐng)域最有前景的技術(shù)之一。其利用魯米諾在酶促下發(fā)出的光子信號(以及其他發(fā)光方式)，放大抗原抗體反應(yīng)，對體內(nèi)的各種微量標(biāo)志物進(jìn)行檢測，從而對各種疾病進(jìn)行早期、特異和定量化的診斷。 其特點在于靈敏度高、測定范圍寬、快速、簡便，并且在測試中不使用有害的試劑，無污染?；瘜W(xué)發(fā)光技

2、術(shù)簡介Part1.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)概念 化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介Part2.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的領(lǐng)先性放射免疫診斷技術(shù)（RIA）酶聯(lián)免疫診斷技術(shù)（ELISA）化學(xué)發(fā)光免疫診斷技術(shù)（CLIA）20世紀(jì) 60年代 70年代 80年代 90年代 2000年 2020年 時間臨床免疫診斷技術(shù)的發(fā)展基本歷經(jīng)了以下三個階段：化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介Part2.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的領(lǐng)先性放射化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介Part3.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1） 靈敏度高 靈敏度可達(dá)10-19mol/L以上。靈敏度(mol/L)10-2210-1810-1410-10酶標(biāo)熒光放免發(fā)光化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡

3、介Part3.化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的優(yōu)勢1） 化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介 2）線性范圍寬 發(fā)光強(qiáng)度與測定物質(zhì)濃度間的線性關(guān)系達(dá)0105范圍。與酶標(biāo)免疫的比色吸光度（OD值）03.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。例：CEA 酶免只能達(dá)到80ng/ml；發(fā)光可以達(dá)到3000ng/ml。線性范圍105104103102酶標(biāo)熒光放免發(fā)光化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介 2）線性范圍寬線性范圍105酶標(biāo)熒光放免發(fā)化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介酶標(biāo)熒光放免發(fā)光有效期（月試劑有效期長 發(fā)光免疫的試劑有效期可長達(dá)1年。放射免疫由于放射性同位素衰變，一般有效期只有一個月，酶標(biāo)免疫的底物穩(wěn)定性差，有效期有限?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)簡介酶標(biāo)熒光放

4、免發(fā)光有效期（月）183）試劑有效化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介 4）安全性好： 消除了放射性污染，環(huán)保、安全。 到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫法的危害性?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)簡介 4）安全性好：化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介化學(xué)發(fā)光（CLIA）酶免（EIA）放免（RIA）檢測限（M/L）10-17-10-1910-1210-15標(biāo)記物酶蛋白發(fā)光物質(zhì)酶蛋白放射性元素靈敏度高低高線性范圍寬窄寬放射污染無無有試劑穩(wěn)定性6-12個月6-12個月1-3個月操作易易繁瑣Part4.免疫分析技術(shù)對比（本章小結(jié)）化學(xué)發(fā)光技術(shù)簡介化學(xué)發(fā)光酶免放免檢測限（M/L）10-17 肝纖維化（hepatic fibrosis）是指肝細(xì)胞發(fā)生壞死及炎癥刺

5、激時，肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常增生的病理過程。 是慢性肝病的共同病理學(xué)基礎(chǔ)，隨著各種不同的慢性肝臟疾病的進(jìn)展可逐漸形成肝纖維化 。 輕肝纖維化重肝硬化 （不同之處肝小葉結(jié)構(gòu)是否完整） 引起肝纖維化的病因消除后早期肝纖維化可完全恢復(fù)，肝硬化則不易復(fù)原。 肝纖維化綜述Part1.肝纖維化的概念 肝纖維化（hepatic fibrosis） 肝纖維化嚴(yán)重時可引起門脈高壓纖維化組織壓迫門靜脈分支，門靜脈阻力升高。 從生理角度看，肝損傷時肝內(nèi)纖維結(jié)締組織增生是一種對損傷的正常修復(fù)反應(yīng)。 肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞數(shù)量過度增生 減少，肝功能降低 肝臟萎縮變硬，肝硬化失代償 肝纖維化是慢性肝病最重要的病理特征，也

6、是慢性肝炎、肝硬化進(jìn)一步發(fā)展、惡化的重要原因。肝纖維化綜述Part2.肝纖維化的病理生理學(xué) 肝纖維化嚴(yán)重時可引起門脈高壓纖維化組織壓肝纖維化綜述肝纖維化綜述慢性乙型肝炎慢性丙型肝炎脂肪性肝炎（酒精或非酒精性）藥物免疫性肝病膽汁淤積等肝纖維化綜述Part3.肝纖維化的病因?qū)W慢性乙型肝炎肝纖維化綜述Part3.肝纖維化的病因?qū)W過度纖維化會導(dǎo)致肝臟萎縮變硬，直到引起肝硬化或肝衰竭，進(jìn)而導(dǎo)致患者完全喪失生活能力和死亡。據(jù)統(tǒng)計，目前我國乙肝病毒攜帶者1.2億，慢性乙肝患者約3500萬，加上慢性丙肝、脂肪肝、血吸蟲病、免疫性肝病等，構(gòu)成了龐大的潛在的肝纖維化患者群。調(diào)查顯示，肝硬化占據(jù)國際上疾病死亡病因的

7、第六位。早期發(fā)現(xiàn)并積極治療肝纖維化，使之逆轉(zhuǎn)或延緩其發(fā)展，對提高患者生活質(zhì)量，改善患者預(yù)后，有十分重要的作用。 肝纖維化綜述Part4.肝纖維化的流行病學(xué)過度纖維化會導(dǎo)致肝臟萎縮變硬，直到引起肝硬化或肝衰竭，進(jìn)而導(dǎo) 肝纖維化是肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，各種因素導(dǎo)致的肝損傷，都可繼發(fā)肝纖維化形成進(jìn)而發(fā)展為肝硬化。 早期肝纖維化可完全恢復(fù)，肝硬化則不易復(fù)原。 肝纖維化綜述Part5.小結(jié) 肝纖維化是肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，各種因素導(dǎo)致的肝損 肝活檢病理學(xué)檢查仍是診斷肝纖維化的金標(biāo)準(zhǔn)，是明確診斷、衡量炎癥活動度、纖維化程度以及判定藥物療效的重要依據(jù)。目前一般采用半定量計分系統(tǒng)。但是，由于肝纖維化在肝內(nèi)分布

8、不均勻，而且肝穿刺組織僅占全肝的五萬分之一，可造成診斷誤差。因此強(qiáng)調(diào)肝活檢標(biāo)本至少15 mm，并包含6個以上匯管區(qū)。Part1.病理學(xué)檢查肝纖維化的檢測方法 肝活檢病理學(xué)檢查仍是診斷肝纖維化的金標(biāo)準(zhǔn)，是肝纖維化的檢測方法肝纖維化的檢測方法 現(xiàn)代影像學(xué)手段如B型超聲、CT、磁共振成像（MRI）等可以發(fā)現(xiàn)肝纖維化的某些征象，如肝臟輪廓、大小、及肝實質(zhì)信號強(qiáng)弱的改變，肝臟血管內(nèi)徑及血流方向、速度的改變，脾臟大小的改變等。彩色多普勒超聲檢查或放射性核素掃描可以測定肝臟動脈和門脈的血流量及功能性門體分流情況。但是，目前這些影像學(xué)檢查尚不能對纖維化做出確診和鑒別診斷，更難于準(zhǔn)確判斷肝纖維化的嚴(yán)重程度，故只

9、能作為一種輔助診斷。 Part2.影像學(xué)檢查肝纖維化的檢測方法 現(xiàn)代影像學(xué)手段如B型超聲、CT、磁共振成像（M細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)及代謝產(chǎn)物ECM代謝相關(guān)酶類及抑制劑膠原蛋白 例如：PNP PIP Col Col VI非膠原糖蛋白 例如：LN FN FNR UN TN糖胺多糖 例如：HA蛋白多糖 膠原酶及其抑制劑 例如：MMPs TIMPs脯氨酰羥化酶（PH）賴氨酰氧化酶細(xì)胞因子多肽類生長因子 例如：TGF-白細(xì)胞介素 例如：IL-1腫瘤壞死因子 例如：TNF-干擾素 例如：IFN-Part3.血清學(xué)檢查肝纖維化的檢測方法細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)及代謝產(chǎn)物ECM代謝相關(guān)酶類及抑制劑膠原Part4.

10、不同方法的對比肝纖維化的檢測方法Part4.不同方法的對比肝纖維化的檢測方法 透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）主要由纖維母細(xì)胞細(xì)胞合成，通過淋巴系統(tǒng)進(jìn)入血循環(huán)，并由肝臟快速清除。肝內(nèi)皮細(xì)胞是HA攝取、降解的場所。由于體內(nèi)存在有效的HA清除機(jī)制，正常人血清中僅有低水平的HA。多種原因?qū)е碌母尾】墒寡錒A水平上升，主要與肝臟清除功能下降、肝臟內(nèi)成纖維細(xì)胞（肝星狀細(xì)胞）合成增加有關(guān)。在肝纖維化時，肝星狀細(xì)胞合成HA水平大大升高，且內(nèi)皮細(xì)胞清除HA能力亦有下降，雙重原因?qū)е赂卫w維化中HA水平上升。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值Part1.透明質(zhì)酸 透明質(zhì)酸（hyaluronic a

11、cid，HA） HA又稱“小肝穿”，測定具有以下作用：1.反映肝臟纖維化形成；2.反映肝臟纖維化程度；3.反映肝細(xì)胞功能；4.反映肝臟炎癥性病變；5.無論是無癥狀性病毒感染或嚴(yán)重病毒感染、酒精性肝病、膽汁性肝硬化，HA均是有效指標(biāo)，可用于藥物療效觀察及病情的動態(tài)觀察。 就目前臨床研究而言：HA是目前眾多纖維化生化指標(biāo)中最為敏感和特異的指標(biāo)（80%以上） 。在慢性肝病肝纖維化組織學(xué)-血清對照研究中發(fā)現(xiàn)，HA是4項細(xì)胞外間質(zhì)成分中最為敏感和特異的指標(biāo)，HA的診斷準(zhǔn)確性為82.9%，特異性為93%，敏感性為56%。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 HA又稱“小肝穿”，測定具有以下作用：1.反映血清學(xué)

12、肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值Part2.層粘連蛋白 層粘蛋白（laminin，LN）是基底膜成分中的主要大分子糖蛋白，在肝臟內(nèi)與型膠原共同分布，大量沉積則引起肝竇毛細(xì)血管化，直接影響肝竇血流阻力。 LN有十幾個亞型，有報道顯示肝纖維化過程中肝臟內(nèi)大量合成1和1鏈，有人研究老鼠肝纖維化時說大量合成的是2型而非1型。但到目前，在肝纖維化過程中研究最多的是1型。 血清LN的測定通常是測定其LN-P1片斷。 LN-P1主要反映的是肝纖維化形成中的纖維化活性，其血清值被認(rèn)為是反映基底膜更新率的指標(biāo)，可提示肝竇的毛細(xì)血管化和匯管區(qū)纖維化。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值Part2.層粘連蛋白 LN在肝纖維化

13、中的診斷價值：與肝纖維化形成的病因密切相關(guān)，LN水平在酒精性肝硬化明顯高于病毒性肝硬化和膽汁性肝硬化，LN水平可反映酒精性肝病是否存在門脈高壓及門脈高壓程度，但在非酒精性肝硬化，LN則不能用于門脈高壓的診斷。 目前，有關(guān)LN對診斷肝纖維化的價值仍有爭議，其診斷敏感性不及Col 和PNP。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 LN在肝纖維化中的診斷價值：與肝纖維血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 PNP是PC在細(xì)胞外形成原膠原前，被相關(guān)酶切下后進(jìn)入血循環(huán)的氨基端尾肽。完整的PNP主要通過竇狀隙內(nèi)皮細(xì)胞受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被清除，故膠原代謝活躍及肝功能損傷時，血清PNP升高，PNP被視為肝纖維化生成的血清

14、學(xué)指標(biāo)。 Part3. 型前膠原N端肽血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 PNP是PC血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 PNP的含量可以有效地區(qū)別輕型與中/重型慢性肝炎，提示活動性肝纖維化，是反映慢性肝纖維化活動性和程度的指標(biāo)。長期隨訪血清PNP含量能判定慢性肝病的預(yù)后。對原發(fā)性膽汁性肝硬化、慢性遷延性肝炎、慢性活動性肝炎、自身免疫性肝炎進(jìn)行210年隨訪，無論藥物治療與否，原發(fā)性肝硬化者血清PNP總是升高，接受肝移植后恢復(fù)正常；慢性遷延性肝炎PNP含量在正常上限；發(fā)展成肝硬化的慢性活動性肝炎其血清PNP持續(xù)升高，轉(zhuǎn)入緩解期則血清PNP正常。唯自身免疫性肝炎例外，血清值一直不升高。血清學(xué)肝纖維化四

15、項診斷的應(yīng)用價值 PNP的含量 血清PNP可評估慢性肝病，特別是慢性活動性肝炎纖維化過程，其臨床判斷預(yù)后價值已被公認(rèn)，但總體敏感性、特異性不高。有報道，血清PNP含量判別肝纖維化的敏感性和特異性分別是76%和71%。但PNP正?；蜉p微升高不能排除已經(jīng)存在但正在緩慢進(jìn)展中的纖維化。 此外，值得提出的是，在年幼的兒童，生長導(dǎo)致全身間質(zhì)膠原的更新可使血清PNP水平明顯升高，故對兒童肝纖維化沒有診斷價值。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 血清PNP可評估慢性肝病，特別是慢性活動性肝血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 型膠原是構(gòu)成基底膜的主要成分。肝纖維化時肝內(nèi)型膠原合成增多并大量沉積，致使肝竇毛細(xì)血管化

16、。型前膠原由氨基端三螺旋即7S膠原、羧基端球形區(qū)即NCl及主三螺旋區(qū)組成。在血清中可出現(xiàn)這三種主要的降解片斷，3者均是反映型膠原降解的指標(biāo)，即具有相同的臨床意義，差別在于不同成分的檢測敏感度不同。由于膠原降解的增加常伴有更多的再合成，因此，確切地說，它們是反映基底膜膠原更新的指標(biāo)。Part4. 型膠原血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 型膠原是構(gòu)成 研究表明，型膠原成分的檢測對判斷肝纖維化和肝硬化具有較高的敏感性（79%）和特異性（82%）。有文獻(xiàn)報道在慢性活動性丙肝患者中組合利用型膠原與凝血酶原時間（PT)可明確地診斷為肝硬化。血清學(xué)肝纖維化四項診斷的應(yīng)用價值 研究表明，型膠原成分的檢測對判斷

17、肝纖維化和肝 血清甘膽酸(Cholyglycine, CG) 是膽酸與甘氨酸結(jié)合二次的結(jié)合型膽酸之一，在肝細(xì)胞內(nèi)，膽固醇經(jīng)過及其復(fù)雜的酶促反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成初級膽汁酸。其中有膽酸(CA)和鵝去氧膽酸（CD-CA）。膽酸的類固醇核上有三個羥基(C3、C7、C12），側(cè)鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結(jié)合，分子量為462u。 CG正常代謝途徑為腸肝循環(huán)，CG由肝細(xì)胞合成，經(jīng)毛細(xì)膽管、膽管排入膽囊，隨同膽汁進(jìn)入十二指腸，幫助食物消化。95%膽酸在回腸末端重吸收，經(jīng)門靜脈再回肝臟，由肝細(xì)胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結(jié)合形式存在，溢入體循環(huán)的總量小于1 %。在正常情況下,外周血中膽酸含量甚微,正常成人無論空腹或

18、餐后,其血清CG濃度穩(wěn)定在低水平。其他血清學(xué)指標(biāo)簡介Part1. 甘膽酸 血清甘膽酸(Cholyglycine, CG)其他血清學(xué)指標(biāo)簡介 當(dāng)肝細(xì)胞受損時，肝細(xì)胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽酸發(fā)生障礙，而返流血液循環(huán)的CG含量增高，也使血CG含量增高。因此，用RIA（radioimmunoassay放射免疫測定法）法檢測血清甘膽酸（SCG）是評價肝細(xì)胞功能及其肝膽系物質(zhì)循環(huán)功能的敏感指標(biāo)之一。 臨床意義（1）急性肝炎、慢性活動性肝炎、原發(fā)性肝癌、肝硬化、慢遷肝患者血 CG均明顯高于正常人，且呈遞性增高。（2）膽石癥伴黃疸患者膽管、膽囊排泄功能障礙引起血清CG顯

19、著升高。（3）肝硬化、梗阻性肝病、腸肝循環(huán)障礙血清CG水平高于正常人。 其他血清學(xué)指標(biāo)簡介 當(dāng)肝細(xì)胞受損時，肝細(xì)胞攝取CPart2. 纖維連接蛋白及其受體 纖維連接蛋白(FN)及其受體(FNR)：FN在體內(nèi)有2種形式，即細(xì)胞型和血漿型。血漿型FN絕大部分由肝細(xì)胞合成。在肝臟，F(xiàn)N 與膠原、LN等共同組成基底膜成分。肝纖維化及肝硬化時，肝組織中細(xì)胞型FN含量明顯增加，但血漿FN水平則明顯降低，后者反映了肝細(xì)胞合成蛋白質(zhì)功能的減退。故血清FN對肝纖維化的判斷價值尚不能肯定。運用ELISA法研究慢性肝病病人血清FNR(FN受體B亞單位)，發(fā)現(xiàn)慢性活動性肝炎、肝硬化、酒精性肝病和肝細(xì)胞癌病人血清FNR

20、水平顯著升高，并與血清PNP水平相關(guān)；血清FNR水平與組織學(xué)肝纖維化程度的相關(guān)性，比與組織學(xué)上壞死、炎癥的相關(guān)性更為密切，而血清PNP則相反。表明血清FNR在反映肝纖維化方面優(yōu)于血清PNP，認(rèn)為其是反映肝纖維化的1種有價值的指標(biāo).其他血清學(xué)指標(biāo)簡介Part2. 纖維連接蛋白及其受體 纖維連接蛋Part3.型前膠原羧基端肽和氨基端肽 型前膠原羧基端肽(PCP)和氨基端肽(PNP)： 型膠原的生物合成過程與型膠原不同的是，型前膠原形成原膠原過程中，其PCP被完全切除。因此，理論上講，PCP可直接反映膠原生成。然而，研究表明，血清PCP對區(qū)別酒精性肝炎和酒精性脂肪肝的準(zhǔn)確性不如血清PNP；血吸蟲病患

21、者早期血清PCP增高的幅度大于晚期，而晚期患者血清PNP仍持續(xù)增高；肝外間質(zhì)組織(如骨、皮膚)富含型膠原，在生長年齡對血清含量影響較大，故目前已較少采用。血清PNP檢測的意義和價值與PCP相似。其他血清學(xué)指標(biāo)簡介Part3.型前膠原羧基端肽和氨基端肽 型前 肝纖維化的診斷依賴于肝活檢病理診斷，這種創(chuàng)傷性檢查具有許多明顯不足，如具有創(chuàng)傷性、難以反復(fù)活檢、有一定的并發(fā)癥（1/3的患者有疼痛；0.3的患者出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，包括出血，氣胸，結(jié)腸和膽囊穿孔等；還有0.03的死亡率）、病變在肝臟內(nèi)不均勻、存在觀察者自身和觀察者之間的差異（半定量分期系統(tǒng)可誤差1-2期）、標(biāo)本長度不夠（長度20mm和10個匯管

22、區(qū)）等易出現(xiàn)低估以及標(biāo)本破碎及肝包膜下纖維化可造成假象。因此臨床上迫切需要尋找簡單、易推廣的非創(chuàng)傷性診斷方法來診斷和評估肝纖維化。多年來，人們一直在試圖尋找無創(chuàng)的血清學(xué)指標(biāo)來評估慢性肝病的肝纖維化，包括常規(guī)生化、纖維化、細(xì)胞因子、免疫功能等，但迄今為止，還沒有任何單項指標(biāo)能足夠敏感、準(zhǔn)確地反應(yīng)肝纖維化程度。近十多年來，國外建立了多個以綜合多項臨床、生化指標(biāo)及影像學(xué)為基礎(chǔ)的肝纖維化非創(chuàng)傷性診斷預(yù)測模型。 現(xiàn)在公認(rèn)的是這四項：HA、LN、PNP、 C 。診斷肝纖的靈敏度為60-70%，特異性為90%以上。肝纖維化診斷現(xiàn)狀 肝纖維化的診斷依賴于肝活檢病理診斷，這種創(chuàng)傷肝纖四項檢測常見問題問題一：肝纖

23、維化血清學(xué)檢測有什么臨床意義？ 解釋：肝纖維化檢測的方法常規(guī)的有三種，即病理學(xué)檢測、影像學(xué)檢測和血清學(xué)檢測。目前，病理學(xué)檢測依然是肝纖維化檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而影像學(xué)和血清學(xué)作為輔助診斷的項目。雖然病理學(xué)檢測的認(rèn)可度最高，但是因為具有創(chuàng)傷性，并且技術(shù)難度和風(fēng)險度都很高而致使其應(yīng)用受到限制，特別是不能夠監(jiān)測患者的病情。影像學(xué)的發(fā)展對肝纖維化的診治非常地有意義，但是目前市場上產(chǎn)品的分辨率普遍偏低，這對早期肝纖維化的發(fā)現(xiàn)和診治失去價值，從而使病人失去肝纖維化治療的寶貴時間。血清學(xué)檢測則是對病理學(xué)檢測和影像學(xué)檢測最有效的補(bǔ)充，不僅可以監(jiān)測病人病情，而且對早期肝纖維化的發(fā)現(xiàn)和治療非常有價值。肝纖四項檢測常

24、見問題問題一：肝纖維化血清學(xué)檢測有什么臨床意義肝纖四項檢測常見問題問題二：肝纖維化檢測的血清學(xué)指標(biāo)非常多，為什么國內(nèi)多采用透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、型前膠原N端肽和型膠原聯(lián)合檢測來診斷肝纖維化？ 解釋：盡管肝纖維化發(fā)生時，許多血清學(xué)指標(biāo)可能都會升高，但是目前在血清學(xué)檢測肝纖維化領(lǐng)域，還沒有任何單項指標(biāo)具有較高的敏感度和特異性，單項檢測的意義也需要結(jié)合患者自身的其他情況綜合分析。所以現(xiàn)在研究者都在尋求最佳的檢測指標(biāo)組合模式以提高檢測的敏感度和特異性。但是由于肝纖維化的病因很多，學(xué)術(shù)方面還沒有找到適合所有肝纖維化病因的血清學(xué)指標(biāo)組合方案。肝纖維化四項產(chǎn)品是針對 國內(nèi)患者人群的現(xiàn)狀開發(fā)出的具有相對較高臨

25、床敏感度和臨床特異性的產(chǎn)品。肝纖四項檢測常見問題問題二：肝纖維化檢測的血清學(xué)指標(biāo)非常多，問題三：肝纖維化四項檢測的應(yīng)用范圍有哪些？ 解釋： 主要適用于： 1）門診上肝病病人的常規(guī)檢查，如慢性乙肝患者、脂肪肝患者（包含酒精肝患者）、慢性丙肝患者等等； 2）臨床上對病人病情的監(jiān)測及對病人治療效果的觀察。 3）抗纖維化藥物的臨床研究。例如森隆藥業(yè)的藥品安絡(luò)化纖宣傳資料上就推薦使用 “小肝穿”的HA判斷肝纖維化的程度和觀察藥物的療效。肝纖四項檢測常見問題問題三：肝纖維化四項檢測的應(yīng)用范圍有哪些？肝纖四項檢測常見問問題四：為什么肝纖維化四項有些項目測定值非常高，而其他幾項指標(biāo)正常？ 解釋：肝纖維化四項檢

26、測在國內(nèi)由來已久，雖然是國內(nèi)公認(rèn)的檢測肝纖維化比較敏感和特異的血清學(xué)指標(biāo)，但是單個項目檢測肝纖維化的敏感度和特異性卻有很大差異。主要有兩個原因：1）肝纖維化的病因不同導(dǎo)致的差異；2）肝纖維化發(fā)展為不同時期導(dǎo)致的差異。目前對于這個問題學(xué)術(shù)還沒有非常詳盡的解釋，對于第二種原因我們通過一些臨床試驗發(fā)現(xiàn)四項指標(biāo)都高的多是肝硬化、重肝和肝癌病人；在肝纖維化早期透明質(zhì)酸和型前膠原N端肽的敏感度更高；肝纖維化發(fā)展為肝硬化前的中晚期時層粘連蛋白和型膠原快速升高；而處于治療階段的病人隨著病情的好轉(zhuǎn)某些指標(biāo)會轉(zhuǎn)為正常，尤其是透明質(zhì)酸和型前膠原N端肽，它們對于肝纖維化病情的監(jiān)測效果更佳。需要提起注意的是：四項指標(biāo)檢

27、測肝纖維化沒有固定的模式，因病因、因病情、因病人會有差異，需要結(jié)合單個項目的臨床意義和病人的其他檢測指標(biāo)及相關(guān)癥狀分析病人病情，只通過結(jié)果的陰陽性判定肝纖維化是不科學(xué)的。肝纖四項檢測常見問題問題四：為什么肝纖維化四項有些項目測定值非常高，而其他幾項指問題五：問什么層粘連蛋白和型膠原采用夾心兩步法？ 解釋：LN系生物大分子，不僅存在二十種左右的亞型，而且在血清內(nèi)被降解至少7個片段以上，理論上無法對其進(jìn)行最準(zhǔn)確的定量。由于這個原因，競爭法測定時，由于抗原降解時片段增多，而抗原位阻減小，從而導(dǎo)致結(jié)果大大偏高（如放免類試劑），夾心一步法測定結(jié)果則由于片段干擾標(biāo)記抗體結(jié)合在固相上而導(dǎo)致不同程度地偏低，可

28、以說相關(guān)性很差，我們在研發(fā)過程中發(fā)現(xiàn)某些重癥肝硬化患者一步法測定結(jié)果整體偏低證實這個現(xiàn)象，這樣的結(jié)果肯定無法應(yīng)用于病情監(jiān)測。而我們最終確定的兩步法模式，則最大程度克服了這個問題，使測定結(jié)果和病人病情有很高的相關(guān)性，從而可以應(yīng)用于病情的監(jiān)測。 在最初研究C項目時，曾發(fā)現(xiàn)血清稀釋一倍后，發(fā)光值成更大比例地降低，通過查閱文獻(xiàn)，推測血清內(nèi)應(yīng)存在大量的單體形式或降解形式，因為只有這樣，才會造成測定結(jié)果受到極大的干擾。所以，采用競爭法和夾心一步法測定C，結(jié)果一定不準(zhǔn)確。我們采用兩步法操作，斜率在1左右，最大程度消除了單體及降解片段的干擾，結(jié)果更可信，對于患者的病情監(jiān)測更有意義。肝纖四項檢測常見問題問題五：

29、問什么層粘連蛋白和型膠原采用夾心兩步法？肝纖四項檢問題六：肝纖維化四項操作時要特別注意的問題有哪些？會導(dǎo)致什么后果？ 解釋：操作時需要特別注意的問題有：1）所有項目盡量減小加樣誤差，建議采用貼壁的加樣方法，為了防止HA和PNP產(chǎn)品加樣時污染，可采用加標(biāo)本時貼微孔下壁，加HA結(jié)合蛋白溶液或PNP抗體溶液時貼微孔上壁的方法，或者加完標(biāo)本時把板子水平轉(zhuǎn)動180度再加HA結(jié)合蛋白溶液或PNP抗體溶液。當(dāng)加樣不準(zhǔn)時會導(dǎo)致誤差加大，污染則導(dǎo)致測定錯誤。2）溫育時使用水浴最佳，也可采用在水浴鍋內(nèi)放入試管架或醫(yī)用托盤，上面鋪上濕紗布，反應(yīng)時將板子放在紗布上的做法，還可以采用在溫箱中放入鋪有濕紗布的醫(yī)用托盤的做法。以上建議的溫育方法主要是為了消除邊緣效應(yīng)，提高測定的準(zhǔn)確性，使可重復(fù)性增強(qiáng)。如果直接把微孔板放在鐵架子上，會使邊緣微孔受熱過快，發(fā)光值偏高，從而導(dǎo)致操作誤差加大。肝纖四項檢測常見問題問題六：肝纖維化四項操作時要特別注意的問題有哪些？會導(dǎo)致什么問題七：通常膠原類蛋白免疫原