香菇多糖對(duì)荷瘤鼠白細(xì)胞介素2和白細(xì)胞介素6表達(dá)及腫瘤細(xì)胞周期

1、香菇多糖對(duì)荷瘤鼠白細(xì)胞介素-2和白細(xì)胞介素-6表達(dá)及腫瘤細(xì)胞周期【摘要】目的討論了香菇多糖對(duì)IL-2和IL-6表達(dá)及腫瘤細(xì)胞周期的影響。方法昆明小鼠隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組，腫瘤S180模型組，腫瘤環(huán)磷酰胺組，腫瘤香菇多糖組。放免法檢測(cè)各組小鼠血清IL-2和IL-6程度、鏡下觀測(cè)計(jì)算小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期。結(jié)果香菇多糖可使荷瘤鼠IL-2含量升高(P0.01)，IL-6含量降低(P0.01)；香菇多糖可進(jìn)步荷瘤鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率P0.01和吞噬指數(shù)P0.01；使Gl期細(xì)胞增多，S期和G2期細(xì)胞減少，使腫瘤細(xì)胞的增殖指數(shù)明顯下降P0.01。結(jié)論香菇多糖可抑制

2、荷瘤機(jī)體Th1/Th2細(xì)胞的平衡向Th2細(xì)胞漂移，活化巨噬細(xì)胞功能，減低腫瘤細(xì)胞的增殖指數(shù)。【關(guān)鍵詞】香菇多糖；S180；細(xì)胞周期；白細(xì)胞介素-2；白細(xì)胞介素-6我們之前的研究已證實(shí)，香菇多糖(lentinan,LNT)能使荷瘤鼠脾指數(shù)增加,脾白髓相對(duì)面積及脾小體個(gè)數(shù)明顯增加；能增加胸腺樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量及促進(jìn)其分化成熟；使外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著增加；影響荷瘤機(jī)體T細(xì)胞亞群的比例，促使荷瘤機(jī)體細(xì)胞的增殖與活化，誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的產(chǎn)生，最終直接或間接殺傷腫瘤細(xì)胞1，2。本實(shí)驗(yàn)討論香菇多糖對(duì)荷瘤鼠血清IL-2和IL-6表達(dá)及腫瘤細(xì)胞周期的影響，以期為香菇多糖的抗腫瘤作用提供更多的根據(jù)。2方法2.1荷

3、瘤S180鼠模型的建立按本課題組既往操作程序制作1。2.2動(dòng)物分組及處理小鼠隨機(jī)分為4組。第組為正常對(duì)照組，右前腋皮下注射0.2l生理鹽水，9d后處死；第組為腫瘤模型組，第組為腫瘤環(huán)磷酰胺組，第組為腫瘤香菇多糖組，后3組于接種腫瘤后第2天始分別每日腹腔注射生理鹽水0.2l，環(huán)磷酰胺(ylphsphaide,YP)0.2l每只每次1g，以及香菇多糖0.2l(每只每次0.025g)，共7次。均于最后1次給藥后第2日處死。2.3血清IL-2和IL-6的測(cè)定小鼠摘除眼球取血置抗凝管中，別離血清，-70保存。嚴(yán)格按試劑盒操作程序檢測(cè)血清IL-2和IL-6的程度。2.4小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(arphage，)

4、吞噬功能的測(cè)定取材前1天所有小鼠腹腔注射2%無(wú)菌淀粉1l。取材當(dāng)日小鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞hikenredbldell,RB1l，30in后，腹腔注射PBS1l，輕輕按揉腹壁1in，吸出腹腔液滴片。置37濕盒孵育30in后，用PBS沖洗，去除未貼壁和游離RB，純甲醇固定78in，自然晾干，用瑞士染液進(jìn)展染色。在顯微鏡高倍鏡下觀察，每張片隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)中吞噬RB的數(shù)及吞噬的RB總數(shù)。并計(jì)算的吞噬百分率和吞噬指數(shù)。計(jì)算公式為：吞噬百分率%=吞噬RB的總數(shù)/觀察到的總數(shù)100%；吞噬指數(shù)=被吞噬的RB總數(shù)/觀察到的總數(shù)。2.5腫瘤細(xì)胞周期的測(cè)定剝離腫瘤后，取適量剪碎，胰蛋白酶消化30in，以含血清

5、培養(yǎng)基終止反響，經(jīng)研磨后200目過(guò)濾，PBS離心洗滌3次后，200目過(guò)濾，調(diào)整細(xì)胞濃度為5106/l，4待測(cè)。檢測(cè)時(shí)，取5105個(gè)細(xì)胞，按流式細(xì)胞儀操作規(guī)程上機(jī)檢測(cè)。并用美國(guó)BD公司提供的相關(guān)軟件將所得數(shù)據(jù)進(jìn)展曲線(xiàn)擬合分析，計(jì)算相應(yīng)的DNA含量，根據(jù)DNA含量的變化，得出細(xì)胞周期中各期細(xì)胞G0/G1期，S期，G2/期的百分比及計(jì)算增殖指數(shù)PI。PI%=S+G2/G0/G1+S+G2/100%2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以s表示，采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)滿(mǎn)足正態(tài)分布和方差齊同后作單因素方差分析，組間差異用SNK方法檢測(cè)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.

6、1香菇多糖對(duì)各組小鼠血清IL-2和IL-6的影響結(jié)果見(jiàn)表1。表1各組小鼠血清細(xì)胞因子結(jié)果比擬(略)3.2香菇多糖對(duì)荷瘤鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)的影響正常對(duì)照組小鼠腹腔通常吞噬12個(gè)RB，荷瘤鼠大局部未吞，或只吞1個(gè)RB，而香菇多糖組吞噬率和吞噬指數(shù)均明顯增強(qiáng)，與其它各組比擬，其差異均有統(tǒng)計(jì)意義P0.05或P0.01見(jiàn)圖1，且通常一個(gè)吞噬23個(gè)，甚至68個(gè)RB見(jiàn)圖2。3.3香菇多糖對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤細(xì)胞周期的影響香菇多糖對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤細(xì)胞周期的影響研究結(jié)果說(shuō)明，香菇多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)改變是有影響的。結(jié)果見(jiàn)表2。表2香菇多糖對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤細(xì)胞周期的影響(略)4討論I

7、L-2和IL-6是宿主生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑bilgialrespnsedifiers，BR系統(tǒng)中調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的兩種重要的細(xì)胞因子。IL-2由Thl亞群分泌，具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用3。IL-6由Th2亞群分泌，對(duì)腫瘤具有雙向調(diào)節(jié)作用，即對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖既有促進(jìn)作用又有抑制作用。有資料證明腫瘤機(jī)體血清中IL-6多呈高表達(dá)狀態(tài)4，5。本實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型組和環(huán)磷酰胺組血清IL-2程度顯著低于正常對(duì)照組P0.05，P0.01，而IL-6程度那么顯著高于正常對(duì)照組P0.01，P0.01，說(shuō)明在發(fā)生腫瘤和給予化療時(shí)機(jī)體的免疫才能下降。給予香菇多糖后，白介素程度有所恢復(fù)，使荷瘤鼠IL-2含量升高(P0.01

8、)，IL-6含量降低(P0.01)，抑制荷瘤機(jī)體Th1/Th2漂移而增強(qiáng)抗腫瘤免疫反響。香菇多糖的這種BR樣作用機(jī)制目前尚不非常清楚。許多多糖對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤活性是經(jīng)由激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬功能和免疫調(diào)節(jié)功能以及分泌多種生物活性物質(zhì)而起作用的6，7。已有研究證明：香菇多糖可誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞N生成增加，細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶活性和精氨酸酶活性升高8，9，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明香菇多糖可進(jìn)步荷S180小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)，與其它各組比擬有顯著性差異P0.05或P0.01。結(jié)果與王慧銘10的報(bào)道相符。從表2可見(jiàn)，香菇多糖可使腫瘤細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，細(xì)胞數(shù)明顯增加P0.01；可

9、減少增殖細(xì)胞在S期的分布，細(xì)胞數(shù)明顯減少P0.01；使腫瘤細(xì)胞的增殖指數(shù)明顯下降從61.49%降至37.08%P0.01。說(shuō)明香菇多糖可以抑制細(xì)胞進(jìn)入S期，影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制和合成，從而使細(xì)胞在G1期堆積，最終抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。我們推測(cè)以上結(jié)果主要由香菇多糖活化巨噬細(xì)胞所致：巨噬細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶活性升高，增強(qiáng)了溶酶體酶的消化才能；巨噬細(xì)胞的N生成增加，從而發(fā)揮細(xì)胞毒作用，抑制和破壞腫瘤細(xì)胞；巨噬細(xì)胞內(nèi)精氨酸酶活性明顯升高，可消耗腫瘤細(xì)胞的精氨酸，干擾腫瘤細(xì)胞的肽類(lèi)和蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)而干擾DNA和RNA的合成，使腫瘤細(xì)胞的增殖受到抑制。【參考文獻(xiàn)】1林卡莉,呂軍華,徐鷹,等.香菇多糖調(diào)

10、節(jié)荷瘤小鼠的免疫功能J.解剖學(xué)雜志,2022,32(2):166.2林卡莉,辛贛海,陳方.香菇多糖改善S180荷瘤鼠免疫功能的體視學(xué)研究J.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2022,17(4):398.3ekhailT,dL,BukskiR.Interleukin-2inanertherapy:usesandptiuanageentfadverseeffetsJ.BiDrugs.2000,14(5):299.4戴東,李明意,陳群,等.動(dòng)態(tài)檢測(cè)乳腺癌患者手術(shù)前后血清IL-6、VEGF-A表達(dá)的臨床意義J.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2022,11(8):1016.5郭軍鵬,李紅,紀(jì)影實(shí),等.縫裂層孔菌調(diào)節(jié)荷瘤小

11、鼠免疫功能的實(shí)驗(yàn)研究J.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2022,11(4):514.6asserSP.ediinalushrsasasurefantiturandiundulatingplysaharidesJ.ApplirbilBitehnl.2002,60(3):258.7iVE,LiuF.Inundulatinandanti-anerativityfplysaharideprtEinplexesJ.urredhe，2000,7(7):715.8Kupfahl,GeginatG,HfH.LentinanhasastiulatryeffetninnateandadaptiveiunityagainsturineListeriany