高效液相色譜法測定姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的含量

1、高效液相色譜法測定姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的含量【摘要】目的建立姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的高效液相色譜HPL含量測定方法。方法采用HPL法，色譜柱:atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，流動相:乙腈-0.05lL-1磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.02278，檢測波長:270n，流速:1.0lin-1，柱溫：30。結(jié)果鹽酸小檗堿在0.120.59g范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關系r=0.9997，加樣回收率為98.30，RSD為1.19n=6。結(jié)論該方法快速、簡便、準確、重復性較好，結(jié)果可靠，可用于控制姜連止瀉片制劑的質(zhì)量?！娟P鍵詞】姜連止瀉片鹽酸小檗堿高效液相色譜法Abst

2、rat：bjetiveTestablishanaurateethdfrthedeterinatinfberberinehydrhlrideinJianglianzhixieTablets.ethdsatersSyetryShieldTRP18lun(1503.9，5)inanvenat30asneed，ithabilephasensistingfaetnitrile-0.05lL-1ptassiudihydrgenphsphate(phsphateregulatinpHvaluet2.0)(22:78)andaUVdetetrat270n,theflrateas1.0lin-1.Results

3、Thelinearrangefberberinehydrhlrideasithin0.120.59g.Theaveragereveryas98.30%andRSDas1.19%(n=6).nlusinTheethdissipleandaurate,andanbeusedfrthequalityntrlfJianglianzhixietablets.Keyrds：JianglianzhixieTablets;Berberinehydrhlride;HPL姜連止瀉片是由炮姜、黃連、益智仁、訶子肉、麥芽炒、白術炒、補骨脂鹽等組成的純中藥制劑，具有補腎健脾，清腸止瀉之成效，用于治療慢性腹瀉或五更泄瀉，

4、腸鳴，腹脹、腹冷隱隱作痛，口淡、納食減少，伴形寒肢冷，腰膝酸軟等。姜連止瀉片是北京中醫(yī)藥大學附屬東直門醫(yī)院姜良鐸教授多年臨床經(jīng)歷方。黃連為本品方中的君藥，鹽酸小檗堿是該藥的主要有效成分，故以鹽酸小檗堿為指標進展含量測定，控制成品的質(zhì)量。參照?中國藥典?2022年版部1，我們建立了姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的HPL含量測定方法，該方法快速、簡便、準確、重現(xiàn)性較好，結(jié)果可靠，可用于姜連止瀉片制劑的質(zhì)量控制。1儀器與試藥L-2022高效液相色譜儀日本島津公司；KQ250型超聲波清洗器昆山市超聲儀器，ettlerTledAG135十萬分之一電子分析天平(瑞士ettler公司。鹽酸小檗堿對照品中國藥品生物制

5、品檢定所提供，批號：110713-200208，供含量測定用)；姜連止瀉片自制，批號：20220311、20220313、20220315；乙腈為色譜純，水為純潔水，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，流動相：乙腈0.05lL-1磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至22278，檢測波長:270n，流速:1.0lin-1，柱溫：30，進樣體積：10l。2.2溶液制備2.2.1對照品溶液的制備精細稱取鹽酸小檗堿對照品3.96g，置10l量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精細汲取1l，置10l量瓶中，加甲醇溶解并定容至

6、刻度，搖勻，即得(每1l含鹽酸小檗堿39.6g)。2.2.2供試品溶液的制備取本品適量，粉碎成細粉，稱取細粉約0.15g，置50l的容量瓶中，參加鹽酸甲醇110045l，超聲處理(功率250，頻率40kHz)30in，取出，放冷至室溫，用鹽酸甲醇1100定容至刻度，搖勻，濾過，即得。2.2.3陰性供試品溶液的制備按姜連止瀉片制備工藝制得缺黃連的陰性樣品制劑，再按供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3線性關系考察分別精細汲取鹽酸小檗堿對照品溶液0.0396gl-1)3，5，8，10，13，15l。在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀測定，以鹽酸小檗堿峰面積為縱坐標Y，

7、鹽酸小檗堿對照品的進樣量為橫坐標X，得回歸方程為：Y=3.219106X+8.196104，r=0.9997。以上結(jié)果說明，樣品進樣量在0.120.59g范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿峰面積與進樣量呈現(xiàn)良好的線性關系。2.4專屬性實驗汲取鹽酸小檗堿對照品溶液、姜連止瀉片供試品溶液及缺黃連的陰性對照溶液各10l，分別注入色譜儀。按上述方法進展測定，結(jié)果說明，鹽酸小檗堿對照品與姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的保存時間根本一致，陰性供試品溶液在鹽酸小檗堿色譜峰位置處無相應的峰出現(xiàn)，說明本品中鹽酸小檗堿來自姜連止瀉片中的黃連，制劑中其他成分對鹽酸小檗堿的測定不產(chǎn)生干擾。所得鹽酸小檗堿對照品、供試樣品及陰性供試品色譜圖。見

8、圖1。2.5精細度實驗精細汲取25gl-1鹽酸小檗堿對照品溶液10l，重復進樣6次，計算得鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.88n=6，精細度良好。2.6穩(wěn)定性實驗精細汲取同一供試品溶液批號:20220311，分別于0，2，4，6，8，12h進樣測定，記錄峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積的RSD為1.29n=6，說明姜連止瀉片供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7重復性實驗精細稱取同一批姜連止瀉片批號:202203116份，按“2.2.2項下方法制備供試液，并在上述色譜條件下進展測定。結(jié)果樣品中鹽酸小檗堿平均含量的RSD為1.37n=6，重現(xiàn)性較好。2.8加樣回收率實驗取本品準確含量的樣品(批號：20

9、220311)0.075g，精細稱定6份，置50l量瓶中。再分別精細參加鹽酸小檗堿對照品溶液(1.5110gl-1)1l，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，進樣10l，在上述色譜條件下測定。結(jié)果見表1。2.9樣品測定在上述色譜條件下，分別精細汲取供試品溶液與對照品溶液各10l，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算3批9個樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見表2。表1加樣回收率實驗略3討論3.1提取時間的考察本實驗采用了超聲處理的方法，考察了不同提取時間(10，30，60in)對含量測定的影響，結(jié)果說明選擇超聲提取30in鹽酸小檗堿已提取完全。表23批姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的每片含量略3.2檢測波長確

10、實定經(jīng)二極管陣列檢測器180400n掃描，鹽酸小檗堿紫外掃描圖見圖2。由圖2可以看出鹽酸小檗堿分別在270.0n和349.2n兩個波長處有吸收，但考慮到在測定過程中使用乙腈作為流動相，在低波長處有紫外吸收，而349.2n響應不如270.0n，因此檢測波長選擇為270.0n。3.3流動相的選擇根據(jù)文獻報道2，3，選用乙腈0.05lL-1磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至22278為流動相對本品進展試驗，色譜柱為atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，所得色譜圖的別離度好，保存時間較適宜，故本實驗選用的流動相為乙腈0.05lL-1磷酸二氫鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.02278，并將該條件的色譜圖記錄下來，以被測組分鹽酸小檗堿峰計算理論塔板數(shù)為6554.7，同時計算鹽酸小檗堿與相鄰峰的別離度為1.74，根據(jù)實驗結(jié)果，考慮到儀器、色譜柱、流動相的配制和溫度等系統(tǒng)因素的影響，規(guī)定理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰