實(shí)驗(yàn)大腸桿菌培養(yǎng)分離

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)大腸桿菌培養(yǎng)分離第1頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三一、基礎(chǔ)知識(shí)： (一)微生物 90%以上的微生物是對(duì)人類有利的。如抗生素多數(shù)來(lái)源放線菌和霉菌；酒由酵母菌發(fā)酵產(chǎn)生，腐乳由紅曲霉和毛霉發(fā)酵制成；微生物也能消除環(huán)境污染，在新能源領(lǐng)域?qū)l(fā)揮巨大作用。病毒、細(xì)菌、放線菌、真菌、原生動(dòng)物第2頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三實(shí)驗(yàn)1 大腸桿菌的分離和培養(yǎng)第3頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三一、大腸桿菌的概述第4頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成

2、一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。第5頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三二、培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。1.培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2.培養(yǎng)基的類型和用途3.配制培養(yǎng)基的原則第6頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三三、無(wú)菌技術(shù)1.無(wú)菌技術(shù)的概念 對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行；避免已滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。只有膽大心細(xì)，操作快捷，

3、熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。 第7頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源3、紫外線消毒(1)消毒的方法：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。第8頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三（2）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。第9頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三1、灼燒滅菌2、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持1

4、5-30min.3、過(guò)濾滅菌法4、 紫外光滅菌法5、化學(xué)滅菌法(2)滅菌的方法：第10頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第11頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三四、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備LB（液體和固體）培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）

5、第12頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三1計(jì)算、稱量2溶化3調(diào)pH：pH76操作步驟第13頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三 4滅菌: 將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。將培養(yǎng)基用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160170 下滅菌2h。5倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到50 左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種. (試管斜面的制作方法類似)6無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入37的溫室中培養(yǎng)2448小

6、時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。第14頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三倒平板技術(shù)第15頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問(wèn)題討論 答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第16頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三2、大腸桿菌的擴(kuò)大培養(yǎng)自學(xué)課本P23第17頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，

7、星期三3、分離大腸桿菌（除雜）1、方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. 第18頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三第19頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三第20頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三問(wèn)題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)

8、上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第21頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。第22頁(yè)，共26頁(yè)，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三4.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？5.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。第2