植物油甘油三酯的測(cè)定 高效液相色譜法

1、植物油甘油三酯的測(cè)定 高效液相色譜法范圍本文件規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定植物油甘油三酯的原理、試劑、儀器和用具、操作步驟和結(jié)果表示。本方法適用于包含中、長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油三酯的所有植物油。原理根據(jù)甘油三酯分子量和不飽和度與等價(jià)碳原子數(shù)（ECN）的關(guān)系，采用高效液相色譜法分離和定量測(cè)定液體植物油中甘油三酯。試劑所有試劑均為色譜級(jí)，流動(dòng)相使用前應(yīng)脫氣，且在不影響分離效果的情況下循環(huán)使用。三氯甲烷、丙酮和乙腈。警告1：三氯甲烷不易燃，但長(zhǎng)期暴露在火焰或高溫環(huán)境下可燃燒。空氣中臨界危害值為10 ppm。使用時(shí)應(yīng)在通風(fēng)廚中進(jìn)行。警告三氯甲烷為已知致癌物。吸入可引起中毒，有麻醉特性。勿與皮膚接觸。長(zhǎng)期吸入或攝入

2、可引起肝、腎損傷，嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡。警告2：丙酮為易燃溶劑，建議在通風(fēng)廚中使用，切不可在明火附近使用。警告3：乙腈易燃，皮膚吸收和吸入可引起中毒，空氣中臨界危害值為40 ppm，使用時(shí)應(yīng)在通風(fēng)廚中進(jìn)行。液相色譜流動(dòng)相：乙腈和丙酮，調(diào)節(jié)至合適比例以達(dá)到滿(mǎn)意的分離效果，以50:50（v/v）的比例開(kāi)始調(diào)整；流動(dòng)相應(yīng)脫氣，在不影響色譜分離的情況下可循環(huán)使用。增溶溶劑：丙酮或丙酮-氯仿混合物（1:1，v/v）。甘油三酯對(duì)照品：使用商品甘油三酯，或使用大豆油甘油三酯圖譜（注1和圖A.1）。甘油三酯對(duì)照品溶液：稱(chēng)取0.5g0.01g甘油三酯對(duì)照品至10 mL容量瓶（A.4.6）中，以增溶溶劑（A.3.3）定

3、容至10 mL。儀器和用具高效液相色譜儀：配有柱溫箱。進(jìn)樣裝置：可輸送10 L樣品的進(jìn)樣器。檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器。色譜工作站或積分儀。色譜柱：不銹鋼色譜柱，規(guī)格（250 mm4.6 mm，5 m），硅膠填料，含碳量22-23%（以十八烷基二甲基硅形式）。容量瓶：10 mL、25 mL。操作步驟優(yōu)化工作參數(shù)：打開(kāi)泵使流動(dòng)相（A.3.2）以1.5 mL/min流速流經(jīng)色譜柱至少30 min，以得到穩(wěn)定基線(xiàn)；調(diào)節(jié)流動(dòng)相的相對(duì)比例及流速使甘油三酯各色譜峰按其ECN有效分離（圖A.1）。測(cè)試樣品溶液的準(zhǔn)備：稱(chēng)取0.5g0.01g樣品至10 mL容量瓶（A.4.6）中，用增溶溶劑（A.3.3）定容至10

4、 mL。進(jìn)樣10 L該溶液。確定各甘油三酯色譜峰（A.5.3），記錄甘油三酯和溶劑的保留時(shí)間，記錄各甘油三酯峰面積。圖中：O是油酸縮略符號(hào)；P是棕櫚酸縮略符號(hào)；L是亞油酸縮略符號(hào)；Ln是亞麻酸縮略符號(hào)；OOO是三油酸甘油酯縮略符號(hào)；LLL是三亞油酸甘油酯縮略符號(hào)。大豆油樣品色譜圖。甘油三酯色譜峰的確定：采用與分析樣品溶液相同的條件分析甘油三酯對(duì)照品溶液（A.3.4），進(jìn)樣量10 L（A.5.2），記錄樣品色譜峰保留時(shí)間和峰面積（A.5.2）。如果可能的情況下，通過(guò)與已知甘油三酯組成的植物油色譜峰或?qū)φ掌犯视腿ケ容^確定樣品中各甘油三酯色譜峰。剩余甘油三酯的確定通過(guò)：（a）通過(guò)以下公式（A.1）計(jì)算甘油三酯i的相對(duì)保留時(shí)間（i）（A.1）式中：RTi甘油三酯i扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間；RT三油酸甘油酯三油酸甘油酯扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間。RTi 或 三油酸甘油酯=RTi 或 三油酸甘油酯-RT溶劑（b）以甘油三酯對(duì)照品的log 和雙鍵數(shù)量（n）做圖。通過(guò)圖可得到樣品中所有甘油三酯的相對(duì)保留時(shí)間，而構(gòu)成這些甘油三酯的脂肪酸都應(yīng)存在于甘油三酯對(duì)照品中（圖A.2）。由確定的所有甘油三酯色譜峰計(jì)算各甘油三酯ECN數(shù)。在色譜圖上，根據(jù)圖A.1樣品所示ECN數(shù)將甘油三酯分組。log =f (n)圖結(jié)果表示采用歸一化法，即假設(shè)所有甘油三酯峰面積總和相當(dāng)