人參皂苷Rg3抑制腫瘤生長的作用

1、20（S）人參皂苷Rg3對Lewis肺癌生長及轉(zhuǎn)移的抑制作用【摘要】 目的觀察20 （S） 人參皂苷Rg3 （SPG Rg3）抗Lewis肺癌生長及轉(zhuǎn)移的作用并探討其作用 機(jī)制。方法 建立Lewis肺癌實體瘤模型及自發(fā)肺轉(zhuǎn)移模型觀察SPG Rg3的抗腫瘤作用，并取Lewis肺癌 C57BL/6荷瘤小鼠的脾臟，檢測T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化活性、NK細(xì)胞及IL 2活性。結(jié)果 實體瘤實驗中，3.0mg/kg 和1.0mg/kg SPG Rg3用藥組瘤重明顯低于溶劑對照組（P0.05） ； SPG Rg3用藥組肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)均明顯少于溶劑對照組（P99.5%，注射前用 生理鹽水稀釋成所需濃度，溶劑對照組含有溶劑和生

2、理鹽水。環(huán)磷酰胺，50mg/kg，上海華聯(lián)制藥有限公司。 純系C57BL/6N小鼠，雌雄各半，體重1822g,購于本校實驗動物部，動物等級為普通級，合格證編號為 101025。高轉(zhuǎn)移Lewis肺癌細(xì)胞由本校放射生物實驗室惠贈，培養(yǎng)于含10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中。1.2SPG Rg3對Lewis肺癌實體瘤生長的作用無菌條件下，取Lewis肺癌實體瘤，用玻璃勻漿器加生理鹽水（1 ： 3）磨制成細(xì)胞懸液，取0.2ml （含 瘤細(xì)胞2 X 106）接種于C57BL/6N小鼠右腋窩皮下，接種后將動物隨機(jī)分成5組:SPG Rg3 3mg/kg、1mg/kg、 0.3mg/kg組，陽性（環(huán)

3、磷酰胺）及陰性（溶劑）對照組。次日腹腔注射SPG Rg3，連續(xù)給藥10d （1次/ 天），停藥24h后處死動物，稱體重及瘤重，計算腫瘤生長抑制率（%）,其值為1-（治療組平均瘤重/ 對照組平均瘤重）X100%。1.3SPG Rg3對Lewis肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的作用取體外培養(yǎng)對數(shù)生長期Lewis肺癌細(xì)胞，以5X105/只接種于C57BL/6N小鼠右后肢爪墊皮下。隨機(jī)分 為4組，即SPG Rg3 3mg/kg、1mg/kg、0.3mg/kg組及溶劑對照組。次日腹腔注射SPG Rg3，連續(xù)用藥 5周（1次/天），在第3周截除荷瘤下肢，第5周末處死小鼠，取出肺組織用Bouin s液固定，在解剖顯 微鏡下

4、（X10）計數(shù)肺組織表面腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)。1.4SPG Rg3對Lewis肺癌C57荷瘤小鼠免疫功能影響取Lewis肺癌實體瘤，按1 ：3加入生理鹽水研磨成細(xì)胞懸液，取0.2ml （含瘤細(xì)胞1X106）接種于 小鼠右腋皮下，次日腹腔注射SPG Rg3（1.0mg/kg），連續(xù)給藥21d后處死動物、無菌條件下取脾臟，分 別檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化活性、NK細(xì)胞活性以及對IL 2反應(yīng)活性4。1.5統(tǒng)計方法采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，應(yīng)用方差分析處理數(shù)據(jù)。結(jié)果2.1SPG Rg3對Lewis肺癌生長的抑制作用3次體內(nèi)重復(fù)實驗均見SPG Rg3用藥組瘤重明顯低于溶劑對照組，見表1,其中以3.0mg/kg和l.Om

5、g/kg SPG Rg3 組效果非常顯著（P0.05），0.3mg/kg 組效果不明顯（P0.05），且 3.0mg/kg SPG Rg3 組 抑瘤率3次均在30%以上，說明SPG Rg3具有明顯地抑制Lewis肺癌生長的作用。但SPG Rg3組瘤重 明顯高于陽性藥物組（P0.05），說明SPG Rg3的抑瘤作用較傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物的作用差。2.2SPG Rg3 對 Lewis 肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的抑制作用SPG Rg3用藥組肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯少于溶劑對照組，0.3mg/kg組即顯示出明顯的作用，具有顯著統(tǒng) 計學(xué)意義（P0.05），且隨著劑量的增加其作用也有增加趨勢，可見SPG Rg3具有明顯

6、地抑制Lewis肺 癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的作用，見表2。2.3SPG Rg3 對 Lewis 肺癌 C57 荷瘤小鼠免疫功能影響SPGRg3用藥組瘤重低于溶劑對照組（P0.05），脾細(xì)胞對ConA、IL 2反應(yīng)性和脾細(xì)胞NK活性值均高于溶劑對照組（P0.05），這表明SPG Rg3提高小鼠NK細(xì)胞殺傷活性、提高脾淋巴細(xì)胞對IL 2及ConA刺激的反應(yīng)性，說明SPGRg3能明顯提高機(jī)體免疫功能，見表3。討論SPG Rg3 屬原人參二醇型皂甙，其水溶性好，生物利用率較高，已有研究表明，其有抑制兒茶酚胺 分泌、保護(hù)神經(jīng)元、拮抗血管平滑肌收縮5,6、抗腫瘤等功效。本組實驗中觀察到，SPG Rg3在體內(nèi) 具有明

7、顯地抑制Lewis肺癌生長和自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的作用。而我們前期實驗結(jié)果顯示SPG Rg3可明顯抑制B16 黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移、B16黑色素瘤細(xì)胞的侵襲力以及腫瘤新生血管的形成6。這說明SPG Rg3抑制Lewis 肺癌的生長和轉(zhuǎn)移的作用可能與其抗腫瘤血管新生、降低腫瘤細(xì)胞侵襲力的活性有關(guān)。表1SPG Rg3對 Lewis肺癌生長的抑制作用表2SPGRg3抗Lewis肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移作用與溶劑對照組比較，*P0.05； *P0.01本次實驗還通過檢測SPG Rg3對荷瘤小鼠免疫力的影響，從免疫方面探討其抗腫瘤的作用機(jī)制。淋巴細(xì)胞增殖能力的強(qiáng)弱，在某種程度上代表了淋巴細(xì)胞功能的高低4。ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞體

8、外 增殖反應(yīng)能力的提高提示脾臟淋巴細(xì)胞的免疫活性明顯增強(qiáng),SPG Rg3提高脾細(xì)胞對ConA刺激的反應(yīng)性， 說明SPGRg3提高了淋巴細(xì)胞的免疫功能。NK細(xì)胞是細(xì)胞免疫中非特異部分，其可通過表面受體與腫瘤細(xì)胞結(jié)合釋放溶細(xì)胞素致腫瘤細(xì)胞死亡。 IL 2 其抗腫瘤機(jī)制在于刺激和活化效應(yīng)細(xì)胞， IL 2 能促進(jìn)未 成熟的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞增殖和產(chǎn)生溶細(xì)胞作用，可解除腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞的免疫抑制狀態(tài)并增強(qiáng)其免疫 功能，并能促進(jìn)NK細(xì)胞增殖、維持NK細(xì)胞長期生長并增強(qiáng)其活性。由此可見，IL2在細(xì)胞免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮了重要作用。SPGRg3提高了脾淋巴細(xì)胞對IL 2的反應(yīng)性，增強(qiáng)了荷瘤小鼠NK細(xì)胞的殺傷活性，

9、說明在SPG Rg3作用下，更多有活性的淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞參與了腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答過程，提高機(jī) 體的免疫功能，從而對腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移起到抑制作用。SPG Rg3 有明顯的抗腫瘤活性，并可提高荷瘤機(jī)體的免疫力，這說明其不僅可以提高機(jī)體對腫瘤的 免疫應(yīng)答，也可以提高荷瘤機(jī)體對其他致病因素的抵抗力。這一點優(yōu)于其他抗腫瘤藥物，對于腫瘤病人， 尤其是放、化療后的病人是致關(guān)重要的。 SPG Rg3 單獨應(yīng)用或與其他腫瘤化療藥物聯(lián)合應(yīng)用將給腫瘤治 療帶來新的希望?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1Mochizuki M,Yoo YC,Matsuzawa K,et al.Inhibitory effect of tumor met

10、astasis in mice by saponin,ginsenoside Rb2,20（R） and 20（S） ginsenoside Rg3,ofredginsengJ.BiolPharm Bull,1995,18（9）: 11971202.2陳大富，趙揚(yáng)冰，白紹槐，等裸鼠原位種植人乳腺癌細(xì)胞株術(shù)后早期應(yīng)用人參皂貳Rg3對切口愈合的影 響J 腫瘤防治研究，2003，30 （5）： 391392.Ji Yoon Lee,JunWan Shin,KyungSoo Chun,et al.Antitumor promotional effects of a novel intestinalba

11、cterialmetabolite(IH 901)derivedfromtheprotopanaxadiol type ginsenosides in mouse skinJ.Carcinogenesis, 2005,26(2): 359367.楊貴貞免疫生物工程綱要與技術(shù)M.長春:吉林科學(xué)技術(shù)出版社,1991.48.Tachikawa E,kudo K,Nunokawa M,et al. Characterization of ginseng saponin ginsenoside Rg3 TOC o 1-5 h z inhibition of catacholamine sectetion in bovine adrenal chromaffin cells.Biochem Pharm,2001,62(7): 943951.Kim ND,Kang SY,Kim MJ,et al.The ginsenoside Rg3 evoke e