平肝潛陽藥物對偏頭痛肝陽上亢證患者的臨床療效及其對血淋巴細胞

1、平肝潛陽藥物對偏頭痛肝陽上亢證患者的臨床療效及其對血淋巴細胞結果：平肝潛陽方有明顯止痛效果87.5%，與氟桂利嗪片75.0%比較，差異有統(tǒng)計學意義p0.01；以改善眩暈、煩躁易怒和面部烘熱病癥更為明顯p0.05。兩組中醫(yī)病癥積分均降低p0.01，其中以治療組更為明顯p0.01，治療組未出現明顯不良反響。正常人、平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者治療前和治療后血淋巴細胞凝膠蛋白質點數依次為53442、55254和52955。平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者與正常人比較有6個蛋白質表達下調，14個蛋白質表達上調；平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者治療前后比較發(fā)現表達下調的6個蛋白質中有4個

2、表達增強，而表達上調的14個蛋白質中有11個表達降低。共得到12個肽質量指紋圖譜，2個無質譜結果，搜索到10個具有統(tǒng)計學意義的蛋白質，主要有通道蛋白、抗氧化蛋白、細胞信號轉導蛋白、代謝相關蛋白和免疫相關蛋白等。結論：平肝潛陽中藥復方有良好的止痛作用，能改善中醫(yī)病癥；可能通過調節(jié)部分血淋巴細胞蛋白質的表達治療偏頭痛肝陽上亢證。【關鍵詞】平肝;潛陽;肝陽上亢;蛋白質組學;偏頭痛;隨機對照試驗reeivedjuly30,2021;aeptedaugust12,2021;publishednlinejanuary15,2021.freefulltext(htlandpdf)isavailableat.

3、frardlinkingandreferenelinkingviarssref.di:10.3736/ji20210104penaess1.researhinstitutefintegratedtraditinalhineseandesternediine,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina2.departentfeergeny,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina3.departentfneurlgy

4、,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina偏頭痛igraine在以頭痛為病癥的疾病中占有很重要的地位，在美國約17.2%的女性和6%的男性曾有偏頭痛發(fā)作，但僅有48%的患者就診1。肝陽上亢證是偏頭痛的常見證型。平肝潛陽藥物治療偏頭痛肝陽上亢證有較好的療效2。但平肝潛陽藥物治療偏頭痛肝陽上亢證的作用機制目前尚未說明。我們應用蛋白質組學技術研究了平肝潛陽藥物對偏頭痛肝陽上亢證患者血淋巴細胞表達的影響。1資料與方法1.1研究對象2022年8月2022年12月中南大學湘雅醫(yī)院神經內科門診及住院病人按就診順序隨機

5、分為治療組和對照組各16例，其中治療組男性5例，女性11例，年齡1863歲，平均年齡34.76.2歲，平均病程2.10.6年；對照組男性6例，女性10例，年齡1963歲，平均年齡33.87.1歲，平均病程2.20.5年。兩組在年齡和病程方面的差異無統(tǒng)計學意義p0.05。33.37.4歲，與上述治療組和對照組的年齡和性別比較，差異無統(tǒng)計學意義p0.05。1.2診斷標準西醫(yī)診斷標準參考2022年第2版?國際頭痛疾病分類?3標準，排除繼發(fā)性偏頭痛。中醫(yī)辨證及證候斷定標準參考?中醫(yī)肝臟象現代研究與臨床?4。主癥：1眩暈；2頭痛；3面部烘熱；4煩躁易怒；5口苦而渴；6脈弦。兼證：1耳鳴；2五心煩熱；3失

6、眠；4心悸；5肢麻；6震顫。具備主癥中的4項和12項兼癥者可診斷為肝陽上亢證。納入病例標準：1年齡1865歲；2符合西醫(yī)偏頭痛診斷標準和中醫(yī)辨證肝陽上亢證者。1.3觀察指標及療效評價標準?國際頭痛疾病分類?3標準。頭痛持續(xù)時間：記錄頭痛發(fā)作至停頓的時間，假如患者疼痛時入睡，到醒來時頭痛已消失，那么醒來的時間為頭痛停頓的時間以小時為計算單位。無疼痛發(fā)作記0分，輕度頭痛發(fā)作持續(xù)時間12h記2分，中度頭痛發(fā)作持續(xù)時間在1248h記4分，重度頭痛發(fā)作持續(xù)時間48h記6分。頭痛發(fā)作次數：記錄治療前后2個月及隨訪2個月內頭痛發(fā)作次數以月為計算單位。無疼痛發(fā)作記0分，輕度疼痛發(fā)作2次/月記2分，中度疼痛發(fā)作

7、34次/月記4分，重度疼痛發(fā)作5次/月記6分。缺乏一級，或頭痛持續(xù)時間縮短1/3或頭痛加重，持續(xù)時間延長。頭痛起效和消失時間標準以首次服藥時間為基準以小時為計算單位。病癥評分眩暈、頭痛、煩躁易怒、面目紅赤或面部烘熱和口苦而渴等主癥以及耳鳴、五心煩熱、失眠、心悸、肢麻、震顫和腰膝酸軟等兼癥均按無、輕、中、重、嚴重評為0、1、2、3和4分。?中醫(yī)肝臟象現代研究與臨床?4。臨床痊愈：中醫(yī)臨床病癥、體征消失或根本消失，證候積分減少91%；顯效：中醫(yī)臨床病癥、體征明顯改善，證候積分減少70%90%；有效：中醫(yī)臨床病癥、體征均好轉，證候積分減少35%69%；無效：中醫(yī)臨床病癥、體征均無明顯改善，甚或加重，

8、證候積分減少缺乏35%。積分評分方法采用尼莫地平法，證候積分=治療前積分值治療后積分值/治療前積分值100%。反響全部患者治療前后均進展血、尿、糞便常規(guī)和心肝腎功能檢測，用藥后隨訪期間詳細記錄可能出現的不良反響，包括病癥以及發(fā)生、持續(xù)和消退的時間。1.4治療藥物治療組患者服用平肝潛陽中藥復方湯劑。平肝潛陽方自擬方由天麻12g，鉤藤10g，石決明20g，牡蠣30g，川芎10g組成，為深圳市三九中藥現代提供的中藥顆粒劑型。根據處方劑量將單味顆粒調配成湯劑，200l溫開水沖服，分2次口服100l/次，2次/d，14d為1個療程，2個療程完畢后統(tǒng)計療效。對照組患者服用氟桂利嗪片劑西比靈片劑，5g/片，

9、批準文號為國藥準字h10910003，由西安揚森公司提供，5g/次，每晚睡前口服1次，10d為1個療程，2個療程完畢后統(tǒng)計療效。1.7研究方法2結果2.1頭痛平均發(fā)作次數和平均持續(xù)時間治療組和對照組治療后頭痛平均發(fā)作次數和平均持續(xù)時間較治療前均明顯改善p0.01；其中治療組改善程度優(yōu)于對照組p0.05。見表1。2.2止痛療效32例患者均完成2個療程的治療，治療組總有效率為87.5%，對照組為75.0%，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義p0.01。見表2。2.3中醫(yī)病癥改善情況治療組和對照組治療后各病癥均較治療前明顯緩解，差異有統(tǒng)計學意義p0.01；且治療組療效優(yōu)于對照組，其中眩暈、煩躁易怒、面部烘熱

10、等病癥明顯改善p0.05。見表3。表1治療組和對照組頭痛發(fā)作情況表2治療組和對照組止痛療效表3治療組和對照組肝陽上亢證主癥2.4中醫(yī)病癥積分的變化治療組和對照組治療后中醫(yī)病癥積分均下降，與治療前比較，差異有統(tǒng)計學意義p0.01。兩組治療后比較，差異亦有統(tǒng)計學意義p0.01。見表4。表4治療組和對照組中醫(yī)病癥積分的變化2.5不良反響在臨床觀察過程中，治療組和對照組心、肝、腎功能均未發(fā)現明顯異常。對照組部分患者服藥后出現細微嗜睡和無力現象，但尚可耐受，未有因不能耐受而退出試驗者，其中1例有胃部燒灼感，除外原發(fā)胃腸疾病，予以對癥處理后病癥消失；治療組未出現明顯不良反響。2.6血淋巴細胞雙向凝膠電泳圖

11、譜及差異蛋白質點分析在一樣條件下分別對10例正常人和10例治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前及治療后的血淋巴細胞總蛋白質進展雙向凝膠電泳，采用iagesanner掃描儀掃描獲取圖像，然后通過iageaster2delite4.01分析軟件對其進展點檢測，獲得正常人血淋巴細胞和治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前后血淋巴細胞的雙向凝膠電泳圖譜，其平均蛋白質點數依次為53442、55254和52955。分別將其中的一塊膠定為參考膠進展3塊凝膠間的蛋白質點的匹配，平均匹配點數為46651，其匹配率為86.6%。由此獲得了重復性較好的正常人血淋巴細胞和治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前后血淋巴細胞的雙向凝膠電泳圖譜。見圖

12、1。經圖像分析統(tǒng)計后發(fā)現，與正常人比較，偏頭痛肝陽上亢證患者有6個蛋白質表達下調，14個蛋白質表達上調；偏頭痛肝陽上亢證治療前后比較發(fā)現表達下調的6個蛋白質中有4個表達增強，而表達上調的14個蛋白質中有11個表達降低。見表5。表5相關蛋白點在正常組和治療組凝膠中的相對表達強度3討論偏頭痛是一種常見并多發(fā)玻流行病學調查發(fā)現，女性的患病率為3.3%21.9%，男性為0.7%16.1%1。其臨床表現為反復發(fā)作、單側搏動性頭痛，可伴有惡心、嘔吐、視物異常、耳鳴等病癥。偏頭痛發(fā)病機制尚不明確，西藥緩解偏頭痛的急性發(fā)作雖成效顯著，但許多藥物不良反響大，或價格昂貴。防治偏頭痛的藥物研究成為當今一大醫(yī)學研究熱

13、點，開發(fā)有效而且低毒副作用的中藥，在防治偏頭痛的發(fā)作方面將有所作為。偏頭痛常見證型有肝陽上亢、痰濁上泛、瘀血阻絡和氣血虧虛7。臨床采用平肝潛陽制劑治療偏頭痛療效明顯2，但對平肝潛陽藥物治療偏頭痛的機制研究尚未見報道。平肝潛陽中藥復方由天麻、鉤藤、石決明、川芎和牡蠣等中藥組成，是由天麻鉤藤飲化裁而來。本臨床觀察結果說明，平肝潛陽中藥在減輕患者頭痛發(fā)作次數或發(fā)作持續(xù)時間、止痛、中醫(yī)病癥積分改善方面較對照組明顯，在改善肝陽上亢證主癥方面，對眩暈、煩躁易怒和面部烘熱的改善較明顯，而在頭痛和口干方面，與氟桂利嗪比較差異無統(tǒng)計學意義。說明該復方具有改善患者的臨床病癥和進步生活質量的優(yōu)勢。同時發(fā)現平肝潛陽中

14、藥的不良反響較少。本研究鑒定的10個差異蛋白質點包括乙醇脫氫酶3、免疫球蛋白重鏈區(qū)域、中性粒細胞防御素4前體、黑素瘤相關性e2抗原、專利l339483蛋白、免疫球蛋白重鏈片斷、熱休克蛋白27、膜聯蛋白a1、硫氧還蛋白過氧化物酶2和谷胱甘肽合成轉移酶片斷。它們均與偏頭痛發(fā)生、開展親密相關，有可能是偏頭痛的相關診斷指標。乙醇脫氫酶3是含鋅原子nad依賴的胞質二聚體酶，可逆氧化各種醇為相應的醛酮，是乙醇代謝的關鍵酶8。本研究發(fā)現偏頭痛肝陽上亢證患者乙醇脫氫酶3表達下調，經平肝潛陽中藥干預后表達上調，說明乙醇脫氫酶3可能與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)病有關。中性粒細胞防御素4能激活哺乳動物細胞的得高寧敏感鈣通

15、道9，還能通過形成上皮頂膜通道而激活氯化物的分泌10，可與嗜酸性粒細胞互相作用參與偏頭痛的發(fā)玻免疫球蛋白重鏈區(qū)域是由127個氨基酸組成的蛋白質，識別并結合特異性抗原，在機體的免疫應答中起重要作用。本研究亦發(fā)現偏頭痛肝陽上亢證患者免疫球蛋白上調，經平肝潛陽中藥干預后表達下調，說明免疫球蛋白可能參與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)玻谷胱甘肽存在于哺乳動物體內，是細胞內最主要的巰基和含量最豐富的低分子多肽。本研究發(fā)現谷胱甘肽在偏頭痛肝陽上亢證患者表達下調，經平肝潛陽中藥干預后表達上調，說明谷胱甘肽也可能參與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)玻膜聯蛋白a1是一類構造相關鈣依賴的磷脂結合蛋白質超家族。最新的研究發(fā)現，膜聯蛋白3可以作為腦缺血導致的神經損傷的標志物11。熱休克蛋白27屬于小分子熱休克蛋白家族，參與多種效應反響，在機體抗損傷中起一定作用。evgrafv等12研究發(fā)現，熱休克蛋白的突變與進展