免疫分析方法的研究進展培訓課件

1、免疫分析方法的最新研究進展免疫分析方法的最新研究進展免疫分析法起始于本世紀50 年代, 首先應用于體液大分子物質的分析, 1960 美國學者Yalow 和Berso n 等將放射性同位素示技術和免疫反應結合起來測定糖尿病人血漿胰島素濃度, 開創(chuàng)了放射免疫分析方法的先河。同年,Oliv er 將地高辛同牛血清白蛋白結合, 使之成為人工抗原, 免疫動物后成功獲得了抗地高辛抗體, 從而開辟了用免疫分析法測定小分子藥物的新領域。免疫分析方法的最新研究進展2免疫分析法起始于本世紀50 年免疫分析方法的最新研究進展2免疫分析法通過對半抗原或抗體進行標記，利用標記物的生物或物理或化學放大作用來進行工作，它集

2、測定的高靈敏性和抗體反應的強特異性于一體。優(yōu)點：操作簡單、快速、靈敏度高、特異性強、價廉、樣品所需量少免疫分析方法的最新研究進展3免疫分析法通過對半抗原或抗體進行標記，利用標記物的生物或物理 免疫分析方法非標記免疫分析技術 標記免疫分析技術免疫擴散免疫電泳標記免疫分析技術標記免疫分析技術標記免疫分析技術膠體金免疫技術發(fā)光免疫技術鐵蛋白免疫技術熒光免疫技術放射免疫分析酶免疫分析免疫分析方法免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術發(fā)光免疫技術鐵蛋白免疫技術熒光免疫技術放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術發(fā)光免疫技術鐵蛋白免疫技術熒光免疫技術放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法膠

3、體金免疫技術發(fā)光免疫技術鐵蛋白免疫技術熒光免疫技術放射免疫分析酶免疫分析免疫電泳免疫分析方法膠體金免疫技術發(fā)光免疫技術(CLIA)鐵蛋白免疫技術熒光免疫技術(FIA)放射免疫分析（RIA ）酶免疫分析（EIA）免疫電泳免疫分析方法免疫分析方法的最新研究進展4 免疫分析方法非標記免疫分析技術 標記免疫分析技術免疫擴散免免疫分析標記技術免疫分析標記技術是指以抗原抗體間的特異性反應為基礎,研究標記以各種標記物(定量信號)來對某種物質進行定性或定量檢測的研究。至2007年，應用于免疫分析檢測中的各種標記技術:放射物標記、酶標記、發(fā)光標記、熒光標記、金標記和超順磁粒子標記等免疫分析方法的最新研究進展5免

4、疫分析標記技術免疫分析標記技術是指以抗原抗體間的特異性反應免疫分析方法的研究進展培訓課件酶免疫分析方法酶免疫分析是一種非放射性標記免疫分析技術,以酶標記抗原或抗體作為示蹤物, 由高活性的酶催化底物顯色或發(fā)光, 達到定量分析的目的。到目前為止, 酶標記法所用的酶大多是辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。酶通過與自己的特殊作用底物反應, 而產生典型的有色沉淀物。免疫分析方法的最新研究進展7酶免疫分析方法酶免疫分析是一種非放射性標記免疫分析技術,以酶優(yōu)點：避免對人體的放射性傷害,環(huán)境的污染 酶標記物較穩(wěn)定,半衰期可超過1年. 酶免疫反應通常不需要溫育，不需將與抗體結合的標記藥物同

5、游離的標記藥物分開,. 產生的信號用普通的可見一紫外分光光度計就可測定,不需昂貴的儀器沒備。缺點：標記酶不像同位素標記物,熒光標記物那樣能直接產生信號,而必須要何其它試劑,如酶底物,輔酶的參與,才能完成酶反應,引起吸收光譜等變化后方可進行測定. 免疫分析方法的最新研究進展8優(yōu)點：避免對人體的放射性傷害,環(huán)境的污染 酶標記物較穩(wěn)定,半熒光免疫分析法熒光免疫分析法是以熒光物質標記抗原或抗體, 形成的標記物發(fā)生免疫反應后, 引起熒光強度發(fā)生變化, 從而達到定量分析的目的。目前為止認為比較滿意標記物的有: 異硫氰酸熒光素( FITC )、二氯三嗪氨基熒光素( DTAP)、四乙基羅丹明( RB200)和

6、四甲基異硫氰酸羅丹明( TMR ITC ) 。免疫分析方法的最新研究進展9熒光免疫分析法熒光免疫分析法是以熒光物質標記抗原或抗體, 形化學發(fā)光免疫分析法化學發(fā)光免疫分析是將高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性的免疫反應相結合, 借以檢測抗原或抗體的分析技術。它兼有發(fā)光分析的高靈敏度和免疫反應的特異性。優(yōu)點：靈明度高，線性范圍寬，光信號持續(xù)時間長，分析方法簡便快速，結果穩(wěn)定、誤差小，安全性好，使用周期長。免疫分析方法的最新研究進展10化學發(fā)光免疫分析法化學發(fā)光免疫分析是將高靈敏度的化學發(fā)光測定方法優(yōu) 點缺 點放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡單

7、靈敏度低，適用于定性和半定量測定化學發(fā)光操作簡單，成本較低，靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定工作曲線隨時間漂移時間分辨靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復雜，發(fā)光時間短，試劑成本高，儀器維護費用較高電化學發(fā)光靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復雜，試劑成本高，儀器維護費用較高，有本底干擾免疫分析方法的最新研究進展11方法優(yōu) 點缺 點放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復雜，放射化學發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學發(fā)光分析2個系統(tǒng)。免疫分析系統(tǒng)是將化學發(fā)光物質或酶作為標記物,直接標記在抗原或抗體上,經過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物?；瘜W發(fā)光分析系統(tǒng)是在免疫反應結束后,加入氧化劑或酶的發(fā)光底物,化學發(fā)光物質在堿性介質

8、中經氧化劑的氧化時釋放大量自由能, 產生激發(fā)態(tài)的中間體，該激發(fā)態(tài)的中間體由最低振動能級回到穩(wěn)定的基態(tài)， 各個振動能級時產生輻射，同時產生能量，多余的能量即為發(fā)射光子，從而產生發(fā)光現(xiàn)象。發(fā)光強度可以利用發(fā)光信號測量儀器進行檢測、分析接收光量子的產量，根據(jù)化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關系,可利用標準曲線計算出被測物的含量。免疫分析方法的最新研究進展12化學發(fā)光免疫分析含有免疫分析和化學發(fā)光分析2個系統(tǒng)。免疫分析常見的發(fā)光體系魯米諾、異魯米諾及其衍生物類：免疫分析方法的最新研究進展13常見的發(fā)光體系魯米諾、異魯米諾及其衍生物類：免疫分析方法的最吖啶類化合物：免疫分析方法的最新研究進展14吖啶類化合物：

9、免疫分析方法的最新研究進展14（金剛烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物免疫分析方法的最新研究進展15（金剛烷）-1,2-二氧乙烷及其衍生物免疫分析方法的最新研究電化學發(fā)光體免疫分析方法的最新研究進展16電化學發(fā)光體免疫分析方法的最新研究進展16生物發(fā)光體系北美熒火蟲體內的熒光素/熒光素酶是著名的生物化學發(fā)光體系,它由蟲熒光素酶、蟲熒光素D-(-)-2-6-羧基-2苯并噻唑-2-噻唑啉-4-羧酸、ATP、Mg2+及O2所組成。蟲熒光素酶在催化時,首先與蟲熒光素酰腺苷酸(由Mg2+-ATP與蟲熒光素復合而成)生成復合物,然后該復合物放出質子,酶變構導致蟲熒光素氧化脫羧并發(fā)射光子。另一生物發(fā)光體系是水

10、母發(fā)光蛋白,它不需要加入熒光素酶,只需加入Ca2+或Se2+便能通過分子內反應而發(fā)出max為470 nm的藍光。生物發(fā)光體系的特點是發(fā)光效率、靈敏度、選擇性均非常高。免疫分析方法的最新研究進展17生物發(fā)光體系北美熒火蟲體內的熒光素/熒光素酶是著名的生物化學其他無機氧化劑的化學發(fā)光體系近年來，一些科學家就一些無機氧化劑直接氧化一些物質產生化學發(fā)光的化學發(fā)光新體系,如高錳酸鉀、鈰()、過氧化氫、高碘酸鉀、次氯酸鹽和鐵氰化鉀等在藥物分析方面的應用展開了研究，并取得了一定的成果。免疫分析方法的最新研究進展18其他無機氧化劑的化學發(fā)光體系近年來，一些科學家就一些無機氧化總結與展望總之, 免疫學分析技術的發(fā)展也就是標記學的發(fā)展。目前, 多種免疫分析標記方法并存, 相互競爭, 相互補充,如將EIA 與熒光技術或化學發(fā)光技術結合, 形成熒光酶免疫分析( FEIA) 及化學發(fā)光酶免疫分析( CLEIA ) , 從而大大提高靈敏度, 增大檢測范圍。