免疫學的技術原理

1、關于免疫學技術原理第1頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四（一）抗原抗體反應的原理 抗原抗體反應:指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。 抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補結合 抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結合 抗原抗體之間的結合力 親水膠體轉化為疏水膠體 物質基礎:第2頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四體內：表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進吞噬或中和毒素或引起免疫病理的損傷體外：凝集、沉淀、細胞溶解和補體結合等反應第3頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四（二）抗原抗體反應的特點特異性 可逆性比例性 階段性第4頁，共38頁，2022年

2、，5月20日，9點46分，星期四特異性：抗原與抗體結合反應的專一性抗原抗體反應特異性示意圖分子基礎:抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構型的互補性（1）特異性第5頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結構的抗原表位，可與彼此相應的抗血清發(fā)生反應交叉反應（cross reactions）抗原抗體交叉反應示意圖Ag B第6頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四(2)可逆性可逆性：抗原與相應抗體結合成復合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性 影響因素： 抗體對相應抗原的親合力親合力越高，結合越牢固，越不易解離 環(huán)境因素

3、對復合物的影響pH、離子強度 第7頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四前帶(prezone)：抗體過量后帶(postzone)：抗原過量等價帶(equivalence zone)： 抗原抗體比例合適 抗原抗體反應比例性示意圖比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系(3)比例性第8頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四第一階段：特異性結合階段，反應快，不可見 第二階段：反應可見階段，反應慢，出現(xiàn)凝集、 沉淀和細胞溶解等現(xiàn)象 (4)階段性第9頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四A.抗原、抗體反應物的自身因素環(huán)境因素（三） 影響抗原

4、抗體反應的因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價第10頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四B.環(huán)境因素電解質: 生理鹽水或緩沖液酸堿度: pH6pH9溫 度: 1540，37最適第11頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反應類型實驗技術結果判斷凝集反應直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結合試驗同上(四）免疫學檢測技術的類型第12頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反應類

5、型實驗技術結果判斷中和反應病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標記免疫反應熒光免疫技術檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術檢測放射性強度酶免疫技術檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術檢測發(fā)光強度金免疫技術檢測金顆粒沉淀第13頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四按實際用途分為:e免疫組織化學技術(immunohistochemistry techniqu,IHCT)免疫測定(immunoassay)標記免疫技術：用熒光物質、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析第14頁，共38頁，2022年，5月20日，

6、9點46分，星期四按測定反應體系的物理狀態(tài)分為: 均相免疫測定(homogenous immunoassay）非均相免疫測定(heterogenous immunoassay) 按檢測現(xiàn)象分為: 放射免疫技術 熒光免疫技術酶免疫技術 化學發(fā)光免疫技術金免疫技術第15頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1什么是抗原抗體反應？ 抗原抗體反應的原理是什么？ 2.抗原抗體反應有哪些特點？ 3.如何理解抗原抗體反應的特異性？4什么是抗原抗體反應的可逆性？有何應用？5抗原抗體反應體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例？ 6抗原抗體反應有哪些影響因素？7基于抗原抗體反應的免疫學檢測技術有哪

7、些？思考題第16頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四小結 抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。 抗原抗體反應的特點是特異性、可逆性、比例性和階段性。 第17頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 影響抗原抗體反應的因素包括反應物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學檢測技術的基礎是抗原抗體反應，免疫學技術有凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應、中和反應和標記免疫反應五種類型。 第18頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四抗原抗原排斥抗原抗體Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY 顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應抗體結

8、合，在電解質參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應。第二節(jié) 凝集反應第19頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 分類直接凝集反應- 顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。細胞性抗原：細菌和紅細胞第20頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四凝集原(agglutinogen)：凝集反應中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集參與反應的抗體第21頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四顆粒性抗原凝集素 直接凝集反應第22頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1、玻片凝集反應: 已知抗原

9、+未知抗體凝集團塊 混濁?2、試管凝集反應： 定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應YES NO確定抗體的滴度第23頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 在試管內顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。試管凝集試驗第24頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四第25頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四鮮血者紅細胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(無)O型-A型+-+-B型+-AB型+- 注:“+”表示有凝集反應, “-”表示無凝集反應第26頁，共38頁，2022年，5月20日，9點4

10、6分，星期四間接凝集反應(indirect agglutination): 將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.第27頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒 間接凝集試驗示意圖第28頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四 載體種類及其處理方法紅細胞： 新鮮紅細胞吸附蛋白質的能力差。一般先醛化后應用。聚苯乙烯膠乳顆粒： 可物理吸附蛋白質；常制備帶有化學活性基團的顆粒第29頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四1.正向間接凝集試驗2.

11、反向間接凝集試驗3.間接凝集抑制試驗間接凝集反應的類型第30頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四用抗原致敏載體-檢測抗體正向間接凝集試驗第31頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四反向間接凝集試驗用抗體致敏載體-檢測抗原第32頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接凝集抑制試驗用抗原致敏載體-檢測抗原第33頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接血凝試驗第34頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接乳膠凝集試驗概念金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗第35頁，共38頁，2022年，5月20日，9點46分，星期四間接凝集反應的應用抗原的檢測 反向間接凝集試驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質成分?？贵w的檢測檢測細菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體。 第36頁，共38頁，2022年，